跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
。2020年2月14日；11(9):2572-2579.
doi:10.7150/jca.37959。 eCollection 2020。

LncRNA PVT1上调通过调节MiR-519d-3p和HIF-1A促进胰腺导管腺癌细胞的进展和糖酵解

孙俊伟 1, 张萍萍 2, 陶寅 三, 张峰（音） 三, 王伟兴 1
附属机构

LncRNA PVT1上调通过调节MiR-519d-3p和HIF-1A促进胰腺导管腺癌细胞的进展和糖酵解

孙俊伟等。 J癌症。 。

摘要

长的非编码RNA（lncRNA）PVT1作为一种重要的表观遗传调控因子，在致癌过程中起着关键作用。然而，其在胰腺导管腺癌（PDAC）中的作用尚未得到充分研究。在我们的PDAC肿瘤样本中发现lncRNA PVT1的上调表达。敲除它可以抑制PDCA细胞的生长和糖酵解。miR-519d-3p与PVT1呈负相关。RIP、RNA下拉和萤光素酶分析表明，PVT1通过与微小RNA结合位点结合，直接靶向miR-519d-3p。生物信息学分析和研究表明，HIF-1A是miR-519d-3p的靶点。总之，我们的研究结果表明，PVT1可以作为一种致癌lncRNA，通过与miR-519d-3p竞争调节HIF-1A，从而促进肿瘤进展。

关键词：HIF-1A；PDAC；PVT1；miR-519d-3p。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：作者声明不存在竞争利益。

数字

图1
图1
LncRNA PVT1在PDAC癌中经常过度表达，并与不良预后相关。（A） 用qRT-PCR检测PDAC组织和相应的非癌组织（n=30）中PVT1 mRNA的水平。数据用中位数和四分位数表示。（B） 用qRT-PCR法测定正常胰腺细胞系H6C7和各种胰腺癌细胞系（HPAC、DANG、BXPC3、PANC1和ASPC-1）中PVT1 mRNA的水平。数据显示为平均值±SD，n=3。（C） TCGA队列中PVT1的表达水平。TCGA队列中PVT1表达与总生存率相关性的Kaplan-Meier分析。PVT1的中位数水平用作截止值。(*P（P）< 0.05,**P（P）< 0.01,***P（P）< 0.001)
图2
图2
PVT1敲除抑制PDAC细胞增殖和侵袭体外。（A） qRT-PCR用于测量用抗PVT1的siRNAs转染的HPAC细胞或对照细胞中PVT1表达水平。（B） 通过MTT法测定转染对照或si-PVT1#3的PDAC细胞的细胞活力。（C） 进行集落形成试验以评估转染对照或si-PVT1#3的HPAC细胞的细胞增殖。（D） PVT1后使用PDAC细胞进行的伤口愈合分析的代表性图像沉默24小时。放大200×，比例尺=10μm。（E） 进行Transwell分析以评估转染对照或si-PVT1#3的HPAC细胞的侵袭性。在三个独立的实验中，所有结果都是可重复的。数据显示为平均值±标准差，n=3。(*P（P）< 0.05,**P（P）< 0.01,***P（P）< 0.001)
图3
图3
敲除lncRNA PVT1可减少PDAC细胞的糖酵解。用对照或si-PVT1#3转染PDAC细胞48小时后培养24小时。对这些细胞的葡萄糖摄取（A）、乳酸分泌（B）和细胞内ATP水平（C）进行量化，并对细胞数量进行标准化。所示数据为平均值±SD（n=3）。然后用抗HIF-1A、抗LDHA、抗GULT1、抗HK2或抗β-肌动蛋白抗体（D）对细胞裂解产物进行蛋白质印迹分析。(**P（P）< 0.01,***P（P）< 0.001)
图4
图4
PVT1负性调节PDAC细胞中的miR-159-3p。（A） microrna.org预测了miR-159-3p和PVT1的假定结合位点。（B）在联合转染野生型（pmirGLO-PVT1-wt）或突变报告构建物（pmirGLO-PVT1-mut）和miR-159-3 p-mimics或NC mimics的HPAC细胞中，使用荧光素酶报告基因分析检测PVT1荧光素素酶活性。（C） 将HPAC细胞的细胞裂解物与Ago2抗体和IgG抗体一起用于RIP。用qRT-PCR检测miR-159-3p的水平。（D） 用生物素化NC（NC-Bio）、生物素化野生型miR-519d-3p（miR-519-3p-Bio）或生物素化突变型miR-138（miR-5129d-3p-Bio-Mut）转染HPAC细胞，转染48小时后进行基于生物素的miRNA下拉分析。用qRT-PCR分析PVT1。（E） 在转染si-NC、si-PVT1#3、pc-DNA3.1或pc-DNA3.1-PVT1的PDAC细胞中检测到miR-159-3p。在转染NC-mimics、miR-159-3p-mimics、inh-NC或miR-159-3 p-inh的PDAC细胞中检测到PVT1。（F） 在PDAC患者的癌组织中检测到PVT1与miR-159-3p的相关性。（**和##P（P）<0.01，***和###P（P）< 0.001)
图5
图5
PVT1抑制miR-159-3p，然后正向调节HIF-1A。（A） 生物信息学分析显示HIF-1A上miR-159-3p结合位点的预测。（B） 荧光素酶报告子构建物包含野生型（HIF-1A3'UTR-WT）或突变型HIF-1A（HIF-1A'UTR-MUT）序列。HIF-1A3'UTR-WT或HIF-1A3'UTR-MUT与miR-159-3p模拟物或NC模拟物共转染48小时。（C和D）通过qRT-PCR和western blot检测转染miR-519d-3p-mimic、pc-PVT1及其对照的HIF-1A的mRNA和蛋白水平。（E） 在PDAC患者的癌组织中检测到HIF-1A和miR-159-3p的相关性。（**和##P（P）<0.01，***，###和@@@P（P）< 0.001))
图6
图6
PVT1对进展和糖酵解的影响是miR-159-3p依赖性的。通过MTT分析和集落形成分析，miR-159-3p的抑制克服了PVT1降低对细胞增殖的抑制作用，并通过跨阱分析和伤口愈合分析（A、B、C和D）克服了对细胞迁移的抑制作用。（E） 用si-NC、si-PVT1、inh-NC或miR-159-3p-inh转染PDAC细胞48 h后培养24 h。对葡萄糖摄取、乳酸分泌和细胞内ATP水平进行量化，并对细胞数量进行标准化。（F） 然后用抗HIF-1A、抗LDHA、抗GULT1、抗HK2或抗β-肌动蛋白抗体对细胞裂解产物进行免疫印迹分析。（G、H、I、J和K）共2*106将shRNA或PVT1-shRNA转染48小时后的细胞注射到裸鼠皮下。注射后测量肿瘤生长曲线（每组n=6）。肿瘤切除后测量肿瘤重量。RT-PCR检测PVT1和miR-159-3p。免疫组织化学检测显示HIF-1α。所有值均以平均值±SD表示。（**和##P（P）<0.01，***和###P（P）< 0.001)
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Siegel RL、Miller KD、Jemal A.癌症统计，2017年。CA癌症临床杂志。2017年；67:7–30.-公共医学
    1. Sun M、Kraus WL。从发现到功能：长非编码RNA在生理学和疾病中的扩展作用。Endocr Rev.2015；36分25秒至64秒。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Cesana M、Cacchiarelli D、Legnini I、Santini T、Sthander O、Chinappi M等。一种长的非编码RNA通过作为竞争性内源性RNA发挥作用来控制肌肉分化。细胞。2011;147:358–369.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. O.Warburg。关于癌细胞的起源。科学。1956;123:309–314.-公共医学
    1. 姜瑜，吴国华，何国德，庄秋林，奚秋林，张斌等。沉默BxPC-3细胞株HIF-1A基因对糖酵解相关基因表达、细胞生长、侵袭和凋亡的影响。营养癌。2015;67:1314–1323.-公共医学