HNF1A-AS1 Regulates Cell Migration, Invasion and Glycolysis via Modulating miR-124/MYO6 in Colorectal Cancer Cells

doi:10.2147/OTT.S231249

.2020年2月18日：13:1507-1518。

doi:10.2147/OTT。S231249。 eCollection 2020。

HNF1A-AS1通过调节miR-124/MYO6调节结肠癌细胞的迁移、侵袭和糖酵解

熊国¹, 杨章¹, 刘玲（Ling Liu）², 杨伟明¹, 张琪（音译）^三

附属公司

¹中南大学湘雅医院直肠肛门外科，长沙410008，中华人民共和国。
²中南大学湘雅医院肝胆肠外科研究中心，长沙410008，中华人民共和国。
^三中南大学湘雅医院肝胆胰外科，长沙410008，中华人民共和国。

PMID： 32110048
预防性维修识别码：第7035897页
DOI（操作界面）： 10.2147/OTT。S231249号

HNF1A-AS1通过调节miR-124/MYO6调节结肠癌细胞的迁移、侵袭和糖酵解

熊国等。 Onco目标Ther. 2020.

.2020年2月18日：13:1507-1518。

doi:10.2147/OTT。S231249。 eCollection 2020。

作者

熊国¹, 杨章¹, 刘玲（Ling Liu）², 杨伟明¹, 张琪（音译）^三

附属公司

¹中南大学湘雅医院直肠肛门外科，长沙410008，中华人民共和国。
²中南大学湘雅医院肝胆肠外科研究中心，长沙410008，中华人民共和国。
^三中南大学湘雅医院肝胆胰外科，长沙410008，中华人民共和国。

PMID： 32110048
预防性维修识别码：项目管理委员会7035897
DOI（操作界面）： 10.2147/OTT。S231249号

摘要

背景：越来越多的证据表明，lncRNAs在结直肠癌（CRC）的细胞进展中发挥着多重作用。长非编码RNA（lncRNA）肝细胞核因子1同源异型盒A（HNF1A）-反义RNA 1（AS1）已被确定影响各种癌症的细胞生长和疾病诊断，包括CRC。然而，HNF1A-AS1在细胞进展和糖酵解中的潜在调节机制尚未在CRC中得到充分探索。

材料和方法：采用逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测HNF1A-AS1、microRNA-124（miR-124）和VI类肌球蛋白（MYO6）的表达。葡萄糖消耗、乳酸生成和己糖激酶2（HK2）蛋白水平的分析用于评估细胞内的糖酵解。Western blot检测HK2和MYO6蛋白水平。细胞迁移和侵袭通过跨阱分析进行评估。HNF1A-AS1、miR-124和MYO6之间的关系通过荧光素酶报告子和RNA免疫沉淀（RIP）测定来确定。

结果：在本研究中，我们发现HNF1A-AS1在CRC组织和细胞系中上调。功能实验确定HNF1A-AS1的减少或miR-124的促进抑制了CRC细胞的细胞迁移和侵袭以及糖酵解。此外，荧光素酶报告基因检测表明，miR-124是HNF1A-AS1的靶基因，MYO6是CRC细胞中miR-124mRNA的靶基因。此外，反向实验表明，抗miR-124可削弱si-HNF1A-AS1对结直肠癌细胞的作用，上调MYO6可缓解miR-124-高表达对CRC细胞的影响。HNF1A-AS1通过靶向miR-124调节CRC细胞中MYO6的表达。

结论：在本研究中，我们首次发现HNF1A-AS1通过调节CRC细胞中的miR-124/MYO6来调节细胞迁移、侵袭和糖酵解。

关键词：HNF1A-AS1；MYO6；大肠癌；miR-124。

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利益冲突声明

作者报告称，这项工作没有任何利益冲突。

数字

图1
HNF1A-AS1在CRC组织和细胞系中上调。(**A、 B类**)HNF1A-AS1在结直肠癌组织和正常组织中的表达(A类)RT-qPCR检测CRC细胞（SW620、HT-29、HCT116和SW480）和永生化结肠细胞（NCM460）***P（P）*< 0.01. ****P（P）*< 0.001.

图2
HNF1A-AS1基因敲除抑制CRC细胞的细胞迁移和侵袭以及糖酵解。用si-NC或si-HNF1A-AS1转染SW620和HCT116细胞。(A类)通过RT-qPCR监测转染SW620和HCT116细胞中HNF1A-AS1的表达。(B类)利用葡萄糖测定试剂盒测量转染细胞中的葡萄糖消耗(C类)转染后用乳酸检测试剂盒检测SW620和HCT116细胞中的乳酸生成。(D类)Western blot检测转染SW620和HCT116细胞中HK2蛋白水平。(E类和F类)细胞迁移(E类)和细胞侵袭(F类)在SW620和HCT116细胞中进行跨孔分析***P（P）*< 0.01. ****P（P）*< 0.001.

图3
miR-124是HNF1A-AS1的靶标。(A类)显示了HNF1A-AS1的3ʹUTR中预测的野生型和突变型miR-124结合位点。(B类和C类)在SW620中测量荧光素酶活性(B类)和HCT116(C类)通过荧光素酶报告分析，联合转染HNF1A-AS1-WT或HNF1A-AS1-MUT和miR-124或miR-NC的细胞。(D类和E类)进行RIP测定以确保SW620中HNF1A-AS1和miR-214之间的关系(D类)和HCT116(E类)单元格。(F类和**G公司**)在SW620中检测到miR-124的表达(F类)和HCT116(**G公司**)转染pcDNA、HNF1A-AS1、si-NC或si-HNF1A-ASC1的细胞****P（P）*< 0.001.

图4
抗miR-124可削弱si-HNF1A-AS1对CRC细胞迁移、侵袭和糖酵解的抑制作用。(A类)采用RT-qPCR检测miR-124在大肠癌细胞组织和正常组织中的表达。(B类)通过RT-qPCR分析miR-124在CRC细胞系（SW620、HT-29、HCT116和SW480）和永生化结肠细胞（NCM460）中的表达。(C类——**M（M）**)用si-NC、si-HNF1A-AS1、si-HNF1A-AS1+miR-NC或si-HNF1A-AS1+miR-124转染SW620和HCT116细胞。(C类和D类)在SW620中检测到miR-124的表达(C类)和HCT116(D类)细胞使用RT-qPCR。(D类和E类)在SW620中测量葡萄糖消耗(E类)和HCT116(F类)转染后的细胞。(**G公司**和**H（H）**)在SW620中测试了乳酸产量(**G公司**)和HCT116(**H（H）**)转染后的细胞。(我)在转染的SW620和HCT116细胞中评估HK2的表达。(J型和**K（K）**)在处理过的SW620中检测到细胞迁移(J型)和HCT116(**K（K）**)单元格。(**L（左）**和**M（M）**)在SW620中分析细胞侵袭(**L（左）**)和HCT116(**M（M）**)转染后的细胞***P（P）*< 0.01. ****P（P）*< 0.001.

图5
miR-124直接靶向MYO6。(A类)显示了MYO6的3′UTR中预测的miR-124结合位点的野生型和突变型。(B类和C类)在SW620中测量荧光素酶活性(B类)和HCT116(C类)通过荧光素酶报告基因测定用MYO6-WT Luc或MYO6-MUT和miR-124或miR-NC共转染的细胞。(D类和E类)进行RIP分析以确定SW620中MYO6和miR-214之间的关系(D类)和HCT116(E类)单元格。(F类和**G公司**)SW620中MYO6的蛋白表达(F类)和HCT116(**G公司**)用蛋白质印迹分析检测用miR-NC、miR-124、抗-miR-NC或抗-miR-124转染的细胞****P（P）*< 0.001.

图6
上调的MYO6挽救了miR-124过度表达对CRC细胞迁移、侵袭和糖酵解的抑制作用。(A类)采用RT-qPCR方法分析MYO6在大肠癌组织和正常组织中的表达。(B类)采用RT-qPCR分析MYO6在CRC细胞（SW620、HT-29、HCT116和SW480）和永生化结肠细胞（NCM460）中的表达。(C类——**M（M）**)用miR-NC、miR-124、miR-24+pcDNA或miR-124+MYO6转染SW620和HCT116细胞。(C类和D类)转染SW620的MYO6蛋白表达(C类)和HCT116(D类)用蛋白质印迹法检测细胞。(E类和F类)在SW620中测量葡萄糖消耗(E类)和HCT116(F类)转染后的细胞。(**G公司**和**H（H）**)对处理过的SW620中的乳酸产量进行了检测(**G公司**)和HCT116(**H（H）**)单元格。(我)通过Western blot分析转染SW620和HCT116细胞中HK2的表达。(J型——**M（M）**)转染SW620和HCT116细胞后，通过跨阱检测细胞迁移和侵袭**P（P）*< 0.05. ***P（P）*< 0.01. ****P（P）*< 0.001.

图7
HNF1A-AS1通过miR-124在CRC细胞中介导MYO6表达。(A类和B类)在SW620中进行荧光素酶报告试验(A类)和HCT116(B类)导入miR-124或miR-124+HNF1A-AS1后，转染MYO6-WT-Luc的细胞。(C类和D类)在SW620中检测到MYO6的蛋白表达(C类)和HCT116(D类)利用Western blot分析将pcDNA、HNF1A-AS1、HNF1A AS1+miR-NC和HNF1A AS1+miR-124转染细胞***P（P）*< 0.01. ****P（P）*< 0.001.

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