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.1988年12月;107(第6部分第1节):2363-76。
doi:10.1083/jcb.107.6.2363。

特异性质膜域中的选择性锚定:在上皮细胞极性中的作用

附属公司

特异性质膜域中的选择性锚定:在上皮细胞极性中的作用

P J萨拉斯等。 J细胞生物学. 1988年12月.

摘要

我们研究了横向迁移限制在MDCK上皮细胞顶端和基底外侧结构域蛋白质分离中的作用。冰冻切片上的放射免疫分析和免疫荧光半定量视频分析表明,用0.5%Triton X-100在保存皮层细胞骨架的缓冲液中不完全提取由单克隆抗体和β-2-微球蛋白结合确定的一个顶端和三个基底外侧糖蛋白(Fey,E.G.,K.M。Wan和S.Penman。1984年《细胞生物学杂志》。98:1973-1984; Nelson,W.T.和P.J.Veshnock。1986年《细胞生物学杂志》。103:1751-1766). 标记蛋白优先从“错误”域(即基底外侧标记的顶端域)中提取,表明细胞骨架锚定在“正确”域上最有效。两个基底外侧标记未极化,在细胞中几乎完全可提取,通过在低钙培养基中培养,无法建立细胞间接触,而在相同条件下仅从基底表面提取顶端标记。研究人员开发了将荧光探针应用于在天然胶原凝胶上生长的活细胞的顶端或基底外侧表面的程序。主要是基底外侧抗原的光漂白后的荧光恢复显示,大部分细胞(28-52%)的基底区域没有可恢复的荧光,但大多数细胞(92-100%)的顶面有正常的荧光恢复。荧光恢复正常的细胞在顶区的扩散系数约为1.1 x 10(-9)cm2/s,在基底表面的扩散系数为0.6-0.9 x 10(/9)cm3/s,但差异不显著。这两种技术的数据表明:(a)两个质膜结构域中都存在可移动和不可移动的蛋白质组分,(b)与结构域特异性膜下细胞骨架的连接在维持上皮细胞表面极性方面起着重要作用。

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    1. 生物化学杂志。1986年6月5日;261(16):7518-25-公共医学
    1. 细胞生物学杂志。1982年11月;95(第2部分第1部分):458-62-公共医学
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