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.1986年12月;60(3):823-32.
doi:10.1128/JVI.60.3.823-832.1986。

用合成寡肽抗体鉴定腺相关病毒的反式Rep蛋白

用合成寡肽抗体鉴定腺相关病毒的反式Rep蛋白

E门德尔森等。 J维罗尔. 1986年12月.

摘要

先前的遗传分析为腺相关病毒(AAV)的左手开放阅读框(orf-1)编码的反式调节蛋白(Rep)提供了证据。我们使用免疫印迹分析鉴定了orf-1的四种蛋白产物。针对orf-1编码的寡肽诱导的抗体与感染AAV或在有或无辅助腺病毒的情况下转染AAV重组载体的细胞提取物反应。该抗体识别四种表观分子量分别为78000、68000、52000和40000的多肽。78000-dalton(78K)(Rep78)和68K(Rep68)蛋白似乎分别由p5启动子转录的未片段化4.2-kb和3.9-kb mRNA编码。52K(Rep52)和40K(Rep40)蛋白似乎分别是从p19启动子转录的未剪接3.6kb和剪接3.3kb mRNA的产物。Rep68作为AAV编码蛋白的严格鉴定受到大小相似的交叉反应细胞蛋白的影响。所有四种蛋白均在感染AAV和腺病毒的人类细胞系293、HeLa、HT29和A549中表达。在没有腺病毒的情况下,在感染AAV的细胞中以高倍性检测到Rep78和Rep52的低水平。用重组AAV载体(pAV2)转染的人293细胞在存在或不存在腺病毒的情况下也表达Rep蛋白。引入pAV2的Rep区域的突变进一步鉴定了Rep蛋白。核质提取物和细胞质提取物中每个Rep蛋白的数量不同,但在病毒感染的裂解周期中,所有四种蛋白都会积累。其他研究表明,Rep蛋白在病毒DNA复制和基因表达的负调控和正调控中具有独立的反作用功能。本文所述抗体将促进每个反式作用功能与单个Rep蛋白的相关性。

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