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.2015;1(1):00005.
doi:10.15406/mojt.2015.01.00005。 Epub 2015年3月25日。

评估镇痛性谷氨酰胺酶抑制剂6-Diazo-5-Oxo-L-Norleucine的毒性在体外和大鼠皮肤成纤维细胞

海斯·A·克罗斯比 1, 迈克尔·伊纳特 2, 肯尼思·米勒 1
附属公司

评估镇痛性谷氨酰胺酶抑制剂6-Diazo-5-Oxo-L-Norleucine的毒性在体外和大鼠皮肤成纤维细胞

海斯·A·克罗斯比等。 MOJ毒物. 2015.

摘要

6-重氮-5-氧代-l-去甲亮氨酸（DON）是一种谷氨酰胺拮抗剂，由链霉菌它抑制几种谷氨酰胺依赖的酶途径。特别值得注意的是它对线粒体酶谷氨酰胺酶（GLS）的抑制作用，谷氨酰胺酶是神经元谷氨酸的主要产生者。谷氨酸是一种兴奋性神经递质，在疼痛信号传导过程中由初级感觉外周神经末梢和脊髓突触末梢释放。先前使用尾部切口和疼痛炎症模型的研究表明，将谷氨酰胺酶抑制剂DON单次应用于手术切口或关节炎动物的爪子中可以缓解疼痛。尽管这种化合物显示出作为治疗剂的前景，但关于其皮肤毒性的数据有限。作为第一种方法，我们评估了几种浓度的DON对大鼠皮肤成纤维细胞活力、线粒体氧化能力和增殖的影响，然后检测了DON与人肝微粒体孵育后对增殖的影响。最后，我们评估了DON处理的大鼠皮肤（尾部和后爪）的细胞坏死、炎症和有丝分裂体。在培养的大鼠皮肤成纤维细胞实验中，DON对细胞凋亡、坏死和线粒体活性没有显著影响（p>0.05）。流式细胞术显示在IC处理的细胞中没有凋亡50232.5μM。与单独的DON相比，未观察到人类微粒体暴露后的毒性增强。DON治疗组（10mM）大鼠皮肤H&E染色未见明显病理改变。DON无细胞毒性/细胞毒性最小在体外在皮肤成纤维细胞上施加有效镇痛的浓度。浓度大于在体外集成电路50DON透露没有体内皮肤毒性。这些数据表明DON的细胞毒性为零至最低，并支持DON作为止痛药的进一步研究。

关键词：6-重氮-5-氧-1-去甲亮氨酸；大学教师；DRG；GLS；谷氨酸；谷氨酰胺酶；切口；术后疼痛；Sprague-dawley大鼠；VGluT2。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者没有利益冲突。

数字

图1
图1
Annexin V分析。将大鼠皮肤成纤维细胞暴露于浓度为2、20和200μM的DON中48小时。细胞培养基9424.20±138.5 ru；喜树碱细胞（6μM）10356.7±175.4 ru；2μM DON 9483.2±158.4钌；20μM DON 9669.3±225.3 ru；200μM DON 9524.7±169.8 ru。除阳性对照喜树碱外，无显著差异（*p<0.05）。在485nm激发/535nm发射下读取荧光。数据报告为平均值±sem.N=7（每组）。
图2
图2
碘化丙啶相对荧光测定法。将大鼠皮肤成纤维细胞暴露于浓度为2、20和200μM的DON或6μM的喜树碱中48小时。培养基中的细胞4058.8±180.2 ru；喜树碱（6μM）3686.6±116.1 ru；2μM DON 4522.1±155.3 ru；20μM DON 4502.0±171.1 ru；200μM DON 4208.7±169.4 ru。未发现显著差异。在485nm激发/535nm发射下读取荧光。数据报告为平均值±sem.N=7（每组）。
图3
图3
MTT分析。将大鼠皮肤成纤维细胞暴露于浓度为2、20和200μM的DON和6μM的喜树碱中48小时。向细胞中添加MTT并读取吸光度。MTT用于测定线粒体活性。培养基中的细胞0.69±0.03；喜树碱（6μM）处理细胞0.64±0.05；2μM DON 0.68±0.06；20μM DON 0.64±0.02；200μM DON 0.70±0.10。未发现显著差异。数据报告为平均值±扫描电镜。在485nm激发/535nm发射下读取荧光。N=每组7人。
图4
图4
MTS分析。将大鼠真皮成纤维细胞暴露于浓度为0、0.02、0.05、0.15、0.46、1.4、4、12、37、111、333和1000μM的DON中48小时。DON 0.001μM设置为100.00%的吸光度百分比。从87.9%（0.015μM DON）到130.0%（1000.0μM DON）不等的百分比无统计学意义。在485nm激发/535nm发射下读取吸光度。数据报告为平均值±sem.N=4/组。
图5
图5
使用CyQUANT®测定法分析细胞增殖。用0.10μM DON处理的大鼠成纤维细胞的CyQUANT®吸光度百分比设置为100%。经0.45-10μM DON处理的细胞无统计学差异。在30μM DON下，CyQUANT®吸光度降低至77.1%。37–333μM DON时，CyQUANT®吸光度进一步降低（60.0–51.3%）。CyQUANT®吸光度的最大降低（38.2%）发生在1000μM DON。IC50为232.5μM*与0.45-10μM DON处理的细胞相比，p<0.05。数据报告为平均值±sem。在480nm激发/520nm发射下读取荧光。N=每组4个。
图6
图6
细胞周期分析。在无（对照）和存在232.5μM DON的情况下，对大鼠真皮成纤维细胞（ATCC CRL-1213）进行24小时和48小时的流式细胞术分析。DON治疗24和48小时后，未出现明显的Sub-G1峰，表明未出现凋亡。
图7
图7
使用PrestoBlue®进行微粒体细胞活性测定。用0.10μM DON处理的小鼠胚胎成纤维细胞的吸光度百分比设置为100%（激发570 nm，发射600 nm）。用高达1000μM DON处理的细胞没有观察到统计差异。DON处理的小鼠胚胎成纤维细胞的IC50被确定为两个处理组（有和没有微粒体）均>1000μM。N=每组7人。
图8
图8
皮肤毒性。图8A：后爪皮肤控制。图8B：尾部蒙皮控制。图8C：脚掌皮肤盐水注射。图8D：尾部皮肤盐水注射。图8E：后爪皮肤DON注射。图8F：尾皮DON。
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    1. 沃格尔·沃尔夫冈H，伯克·安德烈亚斯。视觉和眼科医学简史。阿姆斯特丹：Kugler/Wayenborgh；2009年，第97页。
    1. 美国国立卫生研究院。疼痛管理2010
    1. Bradford HF，Ward HK，Foley P.谷氨酰胺酶抑制和神经递质谷氨酸从突触体释放。脑研究1989；476(1):29–34.-公共医学
    1. Eksterowicz N.这是疼痛控制和研究的十年：我们真的有所作为吗？2004
    1. 伍尔夫CJ。躯体疼痛——发病机制和预防。Br J Anaesth博士。2011;75(2):169–176.-公共医学