Adeno-associated virus general transduction vectors: analysis of proviral structures

doi:10.1128/JVI.62.6.1963-1973.1988

.1988年6月；62(6):1963-73.

doi:10.1128/JVI.62.6.1963-1973.1988。

腺相关病毒通用转导载体：前病毒结构分析

S K麦克劳林¹, P科利斯, P L Hermonat公司, N Muzyczka先生

附属公司

PMID： 2835501
PMCID公司： PMC253280型
内政部： 10.1128/JVI.62.6.1963-1973.1988

腺相关病毒通用转导载体：前病毒结构分析

S K麦克劳林等。 J维罗尔. 1988年6月.

.1988年6月；62(6):1963-73.

doi:10.1128/JVI.62.6.1963-1973.1988。

作者

S K麦克劳林¹, P科利斯, P L Hermonat公司, N Muzyczka先生

附属

¹佛罗里达大学医学院微生物系，盖恩斯维尔32610。

PMID： 2835501
PMCID公司： PMC253280型
内政部： 10.1128/JVI.62.6.1963-1973.1988

摘要

我们使用两种腺相关病毒（AAV）载体将新霉素耐药基因导入人类细胞。其中第一个（dl52-91）保留了AAV rep基因；第二个（dl3-94）仅保留AAV末端重复和AAV多聚腺苷化信号（428个碱基对）。这两种载体都可以被包装成AAV病毒，并产生基本相同的前病毒结构。因此，病毒DNA的顺式包装（pac）、整合（int）、拯救（res）和复制（ori）所需的AAV序列位于包括末端重复的284个碱基对序列内。大多数G418r细胞株（73%）含有前病毒，当细胞被适当的辅助病毒超感染时，可以将其拯救（Res+）。一些产生了高产量的病毒DNA；另一名获救者的水平较低，为50倍。大多数Res+株系（79%）包含AAV基因组的串联重复序列（2到20个拷贝），该序列与细胞DNA随机整合。串联阵列中两个连续AAV拷贝之间的连接包含AAV终端回文的一个或两个拷贝。AAV和细胞序列之间的连接主要发生在AAV末端重复序列或其内部，但在某些情况下发生在内部AAV序列。发现两个株系含有AAV DNA的游离上位拷贝。Res+克隆包含已删除的前病毒或已删除基因组的串联重复序列。偶尔，侧翼细胞DNA也会扩增。AAV DNA整合无重叠感染抑制。我们的结果表明，无论整合之前还是整合之后，AAV序列都是通过DNA复制来扩增的，并且复制机制与AAV裂解感染中使用的机制不同。此外，我们还描述了一种新的AAV通用转导载体dl3-94，它为插入外源DNA提供了最大的空间，并以高频率（80%）整合。

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