One-step generation of conditional and reversible gene knockouts

doi:10.1038/nmeth.4156

.2017年3月；14(3):287-289.

doi:10.1038/nmeth.4156。 Epub 2017年1月30日。

一步生成条件和可逆基因敲除

附属公司

¹英国剑桥大学威康信托医学研究委员会干细胞研究所。
²英国剑桥大学遗传学系。
^三威康信托桑格研究所，英国剑桥威康基因组校园。
⁴英国剑桥大学生物化学系。

PMID： 28135257
预防性维修识别码： PMC5777571
内政部： 10.1038/nmeth.4156

一步生成条件和可逆基因敲除

阿曼达·安德森-罗夫等。 Nat方法. 2017年3月.

.2017年3月；14(3):287-289.

doi:10.1038/nmeth.4156。 Epub 2017年1月30日。

附属公司

¹英国剑桥大学威康信托医学研究委员会干细胞研究所。
²英国剑桥大学遗传学系。
^三威康信托桑格研究所，英国剑桥威康基因组校园。
⁴英国剑桥大学生物化学系。

PMID： 28135257
预防性维修识别码：第5777571页
内政部： 10.1038/nmeth.4156

摘要

功能丧失研究是研究基因功能的关键，CRISPR技术使基因组编辑在模型生物和细胞中广泛可用。然而，二倍体细胞中的条件基因失活仍然很难实现。在这里，我们提出了CRISPR-FLIP，这是一种通过共同传递CRISPR-Cas9和通用条件内含子盒，为二倍体或非二倍体细胞（如多能干细胞、3D有机物和细胞系）中的双等位基因条件敲除提供高效、快速和可扩展方法的策略。

PubMed免责声明

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作者声明没有经济利益。

数字

**图1。双等位基因条件修饰的FLIP盒策略**
（a）双等位基因条件修饰的FLIP盒策略示意图。（b） FLIP盒式磁带的设计。SD–剪接供体，SA1，SA2–剪接受体，紫色三角形-LoxP1位点粉红色三角形-Lox 5171位点BP1，BP2（蓝色圆圈）-分支点，pA-聚腺苷酸化信号。（c）含有DsRed报告基因的FLIP盒示意图（d）用FLIP盒转染的HEK 293细胞的图像。eGFP和DsRed蛋白均表达（顶行）。Cre重组后，eGFP表达被破坏，只有DsRed表达保持不变（最下面一行）。比例尺400µm。

**图2。将FLIP盒插入内源性*Ctnb1号机组*小鼠胚胎干细胞基因。**
（a） Cre转染前后β-catenin的免疫荧光。（b） Cre转染前（顶部）和后（底部）ESC克隆的典型亮场图像。比例尺400μm。

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1. Mortensen RM、Conner DA、Chao S、Geisterfer-Lowrance AA、Seidman JG。用单一靶向结构生产纯合突变ES细胞。分子细胞生物学。1992;12:2391–5.-项目管理咨询公司-公共医学
1. te Riele H，Maandag ER，Clarke A，Hooper M，Berns A.通过胚胎干细胞中的同源重组，使pim-1原癌基因的两个等位基因连续失活。自然。1990;348:649–51.-公共医学
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