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.2016年12月;12(6):5240-5246.
doi:10.3892/ol.2016.5332。 Epub 2016年11月1日。

TRIP13在结直肠癌中表达并促进癌细胞侵袭

附属公司

TRIP13在结直肠癌中表达并促进癌细胞侵袭

Kurita Kenji等。 Oncol Lett公司. 2016年12月.

摘要

甲状腺激素受体相互作用子13(TRIP13)是与各种细胞活动相关的ATP酶家族的成员,在许多物种中高度保守。最近的研究表明,TRIP13对主轴组件检查点的失活至关重要,并与某些癌症的进展相关。在本研究中,研究了TRIP13在结直肠癌(CRC)中的作用。逆转录定量聚合酶链反应分析显示TRIP13信使RNA在多个CRC组织中高表达。CRC细胞中TRIP13的缺失抑制了细胞增殖、迁移和侵袭。为了确定TRIP13的催化活性是否对癌症进展至关重要,在CRC细胞中表达了TRIP13的无活性突变体。与野生型TRIP13表达癌细胞相比,表达突变TRIP13的癌细胞的侵袭性显著降低。这些结果表明TRIP13可能是CRC治疗的潜在靶点。

关键词:AAA+;TRIP13;大肠癌;入侵;迁移。

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数字

图1。
图1。
TRIP13在CRC组织标本和细胞系中表达。(A) 采用逆转录定量聚合酶链反应检测CRC组织标本和正常大肠组织中TRIP13 mRNA的水平。该图显示了一个正常样本中TRIP13 mRNA归一化为TRIP13 m RNA水平的相对水平。(B) 免疫印迹法检测TRIP13在多个CRC细胞系中的表达。mRNA、信使RNA;TRIP13,甲状腺激素受体相互作用物13;结直肠癌。
图2。
图2。
TRIP13敲除抑制细胞增殖。(A) 用siRNAs转染DLD1或HCT116细胞,72h后用免疫印迹法检测TRIP13的表达。(B) 用siRNAs转染细胞,并评估指定时间的活细胞数量。(C) 用siRNAs转染细胞,48小时后进行EdU掺入试验。该图显示EdU-阳性细胞的百分比。进行了三个独立实验,数据显示为平均值±标准偏差(*P<0.05)。TRIP13,甲状腺激素受体相互作用物13;小干扰RNA;Ctrl,控制;EdU,5-乙炔基-2′-脱氧尿苷。
图3。
图3。
TRIP13基因敲除抑制细胞迁移和侵袭。(A) 用siRNAs转染细胞,72小时后检测细胞迁移。该图显示了每个字段迁移的平均单元数。进行了三个独立实验,数据显示为平均值±SD(*P<0.05)。(B) 对siRNA转染的细胞进行侵袭试验。该图显示了每个场中入侵细胞的平均数量。进行了三个独立实验,数据显示为平均值±SD(*P<0.05)。(C) 通过逆转录病毒感染建立组成性表达Flag标签或Flag-TRIP13的HCT116细胞。用对照siRNA或TRIP13 siRNA(siTRIP13-3)转染细胞,72小时后用免疫印迹法检测TRIP13的表达。siTRIP13-3靶向TRIP13信使RNA的3′-非翻译区。箭头表示Flag-TRIP13,箭头表示内源性TRIP13。(D) 对转染siRNAs的细胞进行侵袭试验。该图显示了每个场中入侵细胞的平均数量。进行了三个独立实验,数据显示为平均值±SD(*P<0.05)。SD,标准偏差;TRIP13,甲状腺激素受体相互作用物13;小干扰RNA;Ctrl,控制;不另作说明,不重要。
图4。
图4。
TRIP13非活性突变体的表达抑制细胞侵袭。(A) 通过逆转录病毒感染建立了组成性表达标记突变TRIP13的HCT116细胞。用抗TRIP13抗体对细胞裂解物进行免疫印迹。箭头表示标记标记的蛋白质,箭头表示内源性TRIP13。(B) 细胞进行侵袭试验(染色,结晶紫;放大倍数,×40)。展示了代表性的照片。该图显示了每个场中入侵细胞的平均数量。进行了三个独立实验,数据显示为平均值±标准偏差(*P<0.05)。TRIP13,甲状腺激素受体相互作用物13;野生型;WA,沃克A;WB,沃克B。

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