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.2016年11月25日;18(1):116.
doi:10.1186/s13058-016-0774-5。

乳腺血统追踪的复杂性和注意事项

附属公司

乳腺血统追踪的复杂性和注意事项

安妮·C·里奥斯等。 乳腺癌研究. .

摘要

谱系追踪越来越多地被用于探测乳腺内存在的不同细胞类型。虽然这项技术在体内追踪细胞和解剖不同细胞亚群在发育、体内稳态和肿瘤发生中的作用方面很强大,但与谱系追踪策略相关的一些重要警告。在此,我们强调与乳腺特别相关的关键参数。其中包括用于全山成像的组织准备,其中包括酶消化可大幅改变组织结构和细胞形态,因此应避免。其他因素包括三维克隆与二维克隆的评分、诱导的时间和标记效率的显著差异,这不仅在含有类似基因启动子的不同小鼠模型之间,而且在给定菌株内,甚至在单个乳腺内都很明显。因此,对导管组织的广泛区域进行可视化,并考虑对正常乳腺发育和潜在癌症“起源细胞”进行血统追踪研究方法的复杂性,变得至关重要。

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图1
图1
全山制剂和标记效率对谱系追踪结果的影响。使用不包括任何酶消化的方案(如Rios等人[4]所述)获得的角蛋白5免疫染色完整导管部分的全贴装三维(3D)共焦图像。比例尺 = 50微米。b条角蛋白5免疫染色的导管部分(8周龄FVB/N小鼠)的全支架3D共聚焦图像(绿色)和E-钙粘蛋白(红色)使用Wuidart等人描述的乳腺酶消化方案[1]。随后,将乳腺部分在4°C的4%多聚甲醛(PFA)中固定2小时,并按照Rios等人[4]的描述进行处理,以进行免疫染色和共焦成像。c(c)放大的图像(b条)显示肌上皮层角蛋白5免疫染色。注意肌上皮细胞的缺乏及其改变的形状,不再拉长。比例尺 = 100微米(b条)和30微米(c(c)).d日显示一个肌上皮细胞之间正常接触的示意板(肌肉,英寸绿色)和多个管腔细胞(卢姆,英寸红色)在完整的乳房组织中(左边)以及肌上皮(in)之间失去细胞间接触绿色)和管腔细胞(in红色)酶消化后(正确的).电子K5rtTA-IRES-GFP乳腺导管的全贴装三维共焦图像(来自图1d,Rios等人[4]),对E-cadherin(in蓝色).(f)扩大自(电子),显示掩码(in红色)应用于一个肌上皮细胞(使用Imaris软件的GFP通道)和用E-cadherin标记的管腔层(in蓝色).图像显示了肌上皮细胞的面具和与肌上皮细胞直接接触的所有管腔细胞的面具。注:该面罩适用于具有代表性的70μm肌上皮细胞。比例尺 = 50μm(全安装电子)和10μm(放大(f),).h、 我K5-KI/R26R-td番茄乳腺导管的全贴装三维共焦图像显示(小时)或低()成年期三苯氧胺诱导4周后同一腺体的标记程度,然后对E-钙粘蛋白进行免疫染色(蓝色). 放大显示光学切片,描绘了含有克隆的管腔细胞(上部面板)或细长的肌上皮细胞(下部面板).比例尺 = 200μm(整体安装)和50μm(放大)

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引用人

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