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.1989年9月;9(9):3657-66.
doi:10.1128/mcb.9.9.3657-3666.1989。

第一步是自我剪接,而第二步不是自我剪接

附属机构

第一步是自我剪接,而第二步不是自我剪接

E T Barfod公司等。 摩尔细胞生物学. 1989年9月.

摘要

I组自剪接内含子有一个5’剪接位点双链(P1),其中包含一个保守碱基对(U.G)。U是5'外显子的最后一个核苷酸,G是内含子内部引导序列的一部分。通过定点突变和对嗜热四膜虫I组内含子剪接的速率和准确性的分析,我们发现U.G对的U和G对自我剪接的第一步(GTP在5'剪接位点的攻击)都很重要。U突变为嘌呤激活的隐秘5'剪接位点,其中一对U.G被恢复;这一结果强调了在拼接位点对U.G的偏好。然而,在引入嘌呤后,一些剪接在正常位点持续存在,这表明P1螺旋内的位置是5'剪接位点选择的另一个决定因素。当U变为C时,剪接的准确性不受影响,但GTP的Km增加了15倍,催化速率常数降低了7倍。用U.A、U.U、G.G或A.G替换保守的U.G会使剪接率降低更多。相反,保守G的突变增强了剪接的第二步,正如转剪接实验所证明的那样。此外,一个以a或C结尾的自由5'外显子而不是保守的U进行了有效的结扎。因此,与P1螺旋的其余部分不同,P1螺旋在自我剪接的第一步和第二步都起作用,保守的U.G似乎只对第一步很重要。

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