跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2016年10月10日；30(4):595-609.
doi:10.1016/j.cell.2016.09.004。

p62/SQSTM1与维生素D受体结合抑制肝星状细胞活性、纤维化和肝癌

安杰尔·杜兰 # 1, 埃洛伊·德·埃尔南德斯 # 1, 米盖尔·雷纳·坎波斯 # 1 2, 埃利亚斯·卡斯蒂利亚 1, Shankar Subramaniam公司 三, 信杜拉古南丹 三, 刘易斯·罗伯茨 4, 塔蒂亚娜·基塞莱娃 5, 迈克尔·卡林 6, 玛丽亚·T·迪亚兹-梅科 1, 豪尔赫·莫斯卡特 1
附属公司

p62/SQSTM1与维生素D受体结合抑制肝星状细胞活性、纤维化和肝癌

安杰尔·杜兰等。 癌细胞. .

摘要

肝星状细胞（HSC）在肝纤维化和肝细胞癌（HCC）中起着关键作用。HSC中维生素D受体（VDR）激活抑制肝脏炎症和纤维化。我们发现p62/SQSTM1是一种在肝实质细胞中上调但在HCC相关HSC中下调的蛋白质，它对HSC的激活起负控制作用。全身或HSC-特异性p62消融增强HSC并增强炎症、纤维化和HCC进展。p62直接与VDR和RXR相互作用，促进其异二聚体化，这对VDR:RXR靶基因招募至关重要。HSC中p62的缺失削弱了VDR激动剂对纤维化和炎症的抑制作用。这表明p62通过其促进HSC中VDR信号传导的能力是肝脏炎症和纤维化的负调控因子，HSC的激活支持HCC。

关键词：纤维化；肝星状细胞；肝细胞癌；炎症；肝癌；非酒精性脂肪性肝炎；核受体；第62页；固碳体-1；维生素D受体。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。p62全消融促进DEN诱导的肝癌发生和纤维化
（A） DEN-HFD诱导肝癌模型示意图。两周龄小鼠腹腔注射DEN（25 mg/kg），两周后喂食60%脂肪饮食32周。（B） WT（n=6）和p62KO（n=7）的代表性肝脏图像按（A）处理。比例尺，1 cm。（C）WT和p62KO肝脏中肿瘤总数和大于3 mm的肿瘤数量。（D） p62KO中上调基因与WT肝脏（n=3）相比的Ingenuity分析（IPA）中的顶级典型路径。（E） 使用C5 MSigDB数据库绘制p62KO肝肿瘤（n=3）中“胶原蛋白”和“细胞外基质”特征的GSEA富集图。（F） 利用细胞外基质基因集（Bg1，Biogroup1）对p62KO和WT（n=3）肝脏（Bs1，Bioset1）中上调基因之间的基因重叠进行NextBio分析。（G） 使用C2 MSigDB数据库绘制与p62KO肝肿瘤（n=3）中基因表达相关的“UP IN ACTIVATED VS QUIESCENT HSC”和“UP IN TGFB VS Control”基因集的GSEA富集图。（H） WT和p62KO肝脏的天狼星红和αSMA染色。比例尺，100μm。（一） WT和p62KO肝脏的天狼星红色阳性区域和Ishak得分。（J） WT和p62KO肝脏中αSMA和肌动蛋白的免疫印迹分析。（K） WT和p62KO肝纤维化标记物mRNA的qPCR分析。（五十） WT和p62KO小鼠血清中的ALT水平。（M） 炎症标志物mRNA的qPCR分析。（N） 免疫细胞浸润mRNA的qPCR分析。结果显示为平均值±SEM。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。另请参见图S1。
图2
图2。肝星状细胞选择性p62缺乏增加肝损伤后的纤维化
（A） HFD协议示意图。4周龄WT（n=5）和p62KO（n=5）小鼠在20周内喂以60%脂肪饮食。（B） WT和p62KO小鼠肝脏的天狼星红染色。（C） WT和p62KO肝脏的天狼星红色阳性区域和Ishak得分。（D） WT和p62KO肝脏中αSMA和肌动蛋白的免疫印迹分析。（E） 显示mRNA的qPCR分析。（F）CCl示意图4-诱导纤维化方案。8周龄小鼠腹腔注射0.5 ml/kg体重CCl4（玉米油中为1:50 v/v），4周内每周三次。最后一次注射后3天处死小鼠（每个基因型6只）。（G） WT和p62KO小鼠肝脏天狼星红染色（n=6）。（H） 天狼星红色阳性区域和Ishak得分。（一） WT和p62KO肝脏中αSMA和肌动蛋白的免疫印迹分析。（J） （F）所述小鼠肝脏中指示mRNA的qPCR分析。（K） CCl方案4-WT（n=5）和GFAP-p62KO（n=9）小鼠的诱导纤维化模型如（F）所示。（五十） WT和GFAP-p62KO小鼠肝脏的天狼星红染色。（M） WT和GFAP-p62KO肝脏的天狼星红阳性区域和Ishak评分。（N） WT和GFAP-p62KO肝脏中αSMA和肌动蛋白的免疫印迹分析。（O） （K）中所述小鼠肝脏中指示mRNA的qPCR分析。（P） CCl方案4-诱导纤维化方案。8周龄WT（n=6）和Lrat-p62KO（n=5）小鼠腹腔注射0.5 ml/kg体重CCl4（玉米油中为1:10 v/v），6周内每周三次。最后一次注射后1天处死小鼠。（Q） WT和Lrat-p62KO小鼠肝脏的天狼星红染色。（R） WT和Lrat-p62KO小鼠肝脏的天狼星红阳性面积、Ishak评分和羟脯氨酸含量。（S） 野生型和Lrat-p62KO肝脏中αSMA和肌动蛋白的免疫印迹分析。（T） （P）所述小鼠肝脏指示mRNA的qPCR分析。比例尺，100μm。结果显示为平均值±SEM。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。另请参见图S2。
图3
图3。肝星状细胞选择性p62缺乏促进肝癌发生
（A） DEN-CCl原理图4-诱导肝癌模型。两周龄小鼠腹腔注射DEN（25 mg/kg），6周后注射CCl4（2 ml/kg）每周两次，持续12周。（B） （A）中描述的WT（n=6）和GFAP-p62KO（n=7）小鼠肝脏的大体形态（顶部）和H&E染色（底部）。N、 正常肝组织。T、 肝肿瘤区域。比例尺，1 cm（顶部）和100μm（底部）。（C） 肿瘤总数、大于3mm的肿瘤数量和最大肿瘤直径。（D） （A）中描述的WT和GFAP-p62KO肝脏HCC标记物mRNA的qPCR分析。（E） WT和GFAP-p62KO小鼠肝脏的天狼星红染色。比例尺，100μm。（F） WT和GFAP-p62KO肝脏的天狼星红阳性区域和Ishak评分。（G） WT和GFAP-p62KO肝脏中αSMA和肌动蛋白的免疫印迹分析。（H） 所示mRNA的qPCR分析。结果显示为平均值±SEM。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
图4
图4。人肝癌HSC中p62缺失
（A） 用免疫印迹法分析永生化人HSC中p62、αSMA和肌动蛋白的水平，这些HSC表达非靶向shRNA（shNT）或两种不同的shRNA中的一种通过慢病毒感染表达p62（shp62-1和shp62-2）。（B） mRNA的qPCR分析COL1A1公司人HSC中shNT或shp62。结果以平均值±SEM的形式呈现。（C）BODIPY 493/503染色法检测经载体（DMSO）或100 nM-Cal处理48小时的shNT或shp62人HSC中性脂质。比例尺，20μm。（D） 正常肝（normal）和肝癌（TUMOR）标本中p62（绿色）和αSMA（红色）双重免疫荧光的代表性图像。标尺，25μm（正常）和10μm（肿瘤）。（E） 方框和胡须图显示p62和αSMA之间共定位面积百分比的中位数（水平线）、四分位范围（方框）和10th-90百分位（胡须）（每组14个）**p<0.01，***p<0.001。另请参见图S3。
图5
图5。p62是肝星状细胞激活和VDR功能所必需的
（A和B）qPCR分析原发性静止期（A）或永生化激活期（B）WT和p62KO HSC中HSC激活标记的mRNA。（C） 图1A所示的总p62KO和WT小鼠肝癌中下调基因的灵巧性分析（IPA）中的核受体相关通路。（D） 在基础条件下和钙泊三醇（Cal）治疗后，p62KO和WT HSC之间差异表达基因的独创性分析（IPA）得出的顶级经典途径。（E） mRNA的qPCR分析Cyp24a1细胞,百万分之一、和百万像素13在WT和p62KO-HSC中。（F） 引物设计和ChIP-qPCR分析Cyp24a1细胞VDR和RXRα的启动子占有率。（G） 引物设计和ChIP-qPCR分析第1a1列VDR和SMAD3的启动子占用率。（H） 引物设计和ChIP-qPCR分析学报2VDR和SMAD3的启动子占用率。结果以平均值±SEM表示。使用双向方差分析计算p值**p62KO与WT的所有比较p<0.01，***p<0.001；#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001，无显著性差异，Cal与车辆的所有比较。另请参见图S4。
图6
图6。p62调节VDR:RXR的形成α二聚体对钙泊三醇的反应
（A和B）RXRα（A）或VDR（B）与p62的内源性相互作用对钙泊三醇（Cal）的反应。分析细胞裂解物和免疫沉淀物中特定蛋白质的水平；se：短期接触；le：长时间曝光。（C） 用载体（DMSO）或100 nM-Cal处理24小时的WT HSC中RXRα–p62和VDR–p62相互作用（红色）的邻近连接分析（PLA）。（D）用表达载体中所示cDNA转染的HEK293T细胞的细胞裂解物和V5标记免疫沉淀物通过免疫印迹分析。（E） 重组His-VDR与FLAG-RXRα在重组MBP-p62存在下孵育，以响应Cal，并通过免疫印迹分析His-bads下拉物中的相互作用。（F） 用免疫印迹法分析经或不经Cal处理的WT和p62KO HSC的细胞裂解物和内源性VDR免疫沉淀物。（G） VDR的PLA:WT和p62KO HSC中的RXRα异二聚体（红色）用载体（DMSO）或100 nM-Cal处理24小时。（H）用表达载体中所示cDNA转染的HEK293T细胞的细胞裂解物和V5标记免疫沉淀物通过免疫印迹分析。（一） SRC-1的PLA:WT和p62KO HSC中的VDR（红色）用载体（DMSO）或100 nM-Cal处理24小时。（J）p62的畴结构示意图和RXRα与p62不同畴的相互作用总结。（K） RXRα的结构域结构示意图以及p62与RXRβ不同结构域的相互作用概述。（五十） 用免疫印迹法分析转染表达载体中所示cDNA的HEK293T细胞的细胞裂解物和V5标记的免疫沉淀物。（M） 免疫印迹分析用所示结构重建的WT、p62KO和p62KO-HSC中的αSMA、p62和Actin，并用载体（DMSO）或Cal处理24小时百万像素13,Cyp24a1细胞、和学报2在重建实验中，如（M）所示。（O） p62在VDR调节中的作用模型：RXR异二聚。比例尺，20μm。结果显示为平均值±SEM。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。另请参见图S5。
图7
图7。HSC中p62缺乏损害维生素D介导的纤维化抑制
（A） CCl原理图4-诱导纤维化模型和钙泊三醇逆转。8周龄小鼠腹腔注射CCl4（0.5 ml/kg），4周内每周三次。在CCl的最后一周内，经口灌胃给予Cal（20μg/kg）五次4治疗。最后一次注射后3天处死小鼠。（B） 按（A）处理的WT（n=6）和GFAP-p62KO（n=7）小鼠肝脏的天狼星红染色。比例尺，100μm。（C） WT和GFAP-p62KO肝脏的天狼星红阳性区域和Ishak评分。（D） WT和GFAP-p62KO肝脏中αSMA和肌动蛋白的免疫印迹分析。（A）中描述的肝脏HSC激活标记（E）和VDR靶点（F）mRNA的（E和F）qPCR分析。结果显示为平均值±SEM。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

中的注释

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“引用者”文章

工具书类

    1. Anstee QM，Day CP。NAFLD的遗传学。《自然》杂志评论胃肠病和肝病。2013;10:645–655.-公共医学
    1. Bataller R，Brenner DA。肝纤维化。临床投资杂志。2005;115:209–218.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Calle EE，Kaaks R.超重、肥胖和癌症：流行病学证据和拟议机制。《自然》杂志评论《癌症》。2004;4:579–591.-公共医学
    1. Denk H、Stumptner C、Fuchsbichler A、Muller T、Farr G、Muller-W、Terracciano L、Zatloukal K。肿瘤性和非肿瘤性肝细胞中的Mallory小体和细胞内透明小体是否相关？病理学杂志。2006;208:653–661.-公共医学
    1. Ding N，Yu RT，Subramaniam N，Sherman MH，Wilson C，Rao R，Leblanc M，Coulter S，He M，Scott C等。维生素D受体/SMAD基因组电路对肝纤维化反应的调控作用。单元格。2013;153:601–613.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型