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.2016年5月31日；7(22):32478-92.
doi:10.18632/noctarget.8744。

长非编码RNA ANRIL促进上皮性卵巢癌的增殖和细胞周期进展，并抑制凋亡和衰老

Jun-Jun邱 1 2 三, Yan Wang（王燕） 4 5, 刘英磊 6, 张颖（音） 1 2 三, 京欣鼎 1 2 三, 科钦华 1 2 三
附属公司

长非编码RNA ANRIL促进上皮性卵巢癌的增殖和细胞周期进展，并抑制凋亡和衰老

Jun-Jun邱等人。 Oncotarget公司. .

摘要

INK4基因座中的反义非编码RNA（ANRIL）与多种癌症有关。在本研究中，我们评估了ANRIL在上皮性卵巢癌（EOC）中的表达，并确定了其临床意义和生物学功能。与正常对照组相比，ANRIL在EOC组织中过度表达。过度表达与国际妇产科医师联合会晚期和高组织学分级相关。多变量分析表明ANRIL是EOC总生存率的独立预后因素。获得和失去功能的实验表明，ANRIL在体内外都能促进EOC细胞增殖。增殖作用与促进细胞周期进展、抑制凋亡和衰老有关。ANRIL下调P15INK4B和上调Bcl-2可能部分解释了ANRIL诱导的EOC细胞增殖。本研究首次证实ANRIL促进EOC进展，是一种潜在的预后生物标志物。

关键词：ANRIL公司；细胞凋亡；细胞周期；增殖；衰老。

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利益冲突声明

作者没有利益冲突需要声明。

数字

图1
图1。卵巢癌中ANRIL的相对表达水平及其与预后不良的关系
(A类)卵巢上皮细胞和正常卵巢组织中ANRIL的相对表达水平。(B类)根据ANRIL表达水平对OS进行Kaplan-Meier分析。
图2
图2。ANRIL敲除抑制A2780和OVCA433细胞的增殖
(A类)EOC细胞系（A2780、Hey、SKOV3、OVCA429、OVCA33和OVCAR3）中ANRIL的相对表达水平。(B类)转染si-NC或ANRIL siRNAs的A2780和OVCA433细胞中ANRIL的相对表达水平*P（P）< 0.05. (C类)与对照组相比，采用MTT法评估A2780-KD和OVCA433-KD细胞的增殖情况。数据表示三个独立实验的平均值±标准偏差（SD）。横线表示SD*P（P）< 0.05. (D类)A2780-KD和OVCA433-KD细胞及相应对照的代表性集落形成分析结果*P（P）< 0.05.
图3
图3。ANRIL敲除抑制A2780和OVCA433细胞的细胞周期进展并促进凋亡和衰老
(A类)使用流式细胞术进行细胞周期分析。右边的条形图显示了细胞周期中G0-G1、S或G2-M期细胞的百分比。代表性直方图显示在左侧。所示结果代表了三个独立的实验*P（P）< 0.05. (B类)采用流式细胞术检测细胞凋亡。右边的条形图显示了凋亡细胞的百分比。代表性象限图显示在左侧。所显示的结果代表了三个独立的实验*P（P）< 0.05. (C类)细胞用衰老标记物β-半乳糖苷酶染色。A2780-KD和OVCA433-KD细胞细胞核周围的蓝色染色表明细胞衰老*P（P）< 0.05.
图4
图4。ANRIL的过度表达促进OVCA429细胞的EOC细胞增殖和细胞周期进展，并抑制凋亡和衰老
(A类)OVCA429-OE细胞和对照细胞中ANRIL的相对表达水平*P（P）< 0.05. (B类)MTT分析用于评估OVCA429-OE和OVCA429载体细胞的增殖*P（P）< 0.05. (C类)OVCA429-OE和OVCA429载体细胞的代表性集落形成分析结果*P（P）< 0.05. (D类)使用流式细胞术对OVCA429-OE和OVCA429载体细胞进行细胞周期分析。右边的条形图显示了细胞周期G0-G1、S或G2-M期细胞的百分比*P（P）< 0.05. (E类)使用流式细胞术评估细胞凋亡。右边的条形图显示了凋亡细胞的百分比*P（P）< 0.05. (F类)用β-半乳糖苷酶对OVCA429-OE和OVCA429载体细胞进行染色。细胞核周围的蓝色染色表明细胞衰老*P（P）< 0.05.
图5
图5。敲除和过度表达ANRIL改变P15INK4B（墨水4B）和Bcl-2表达
(A类)蛋白质印迹显示ANRIL敲除增加P15INK4B（墨水4B）并降低A2780和OVCA433细胞中的Bcl-2水平。(B类)蛋白质印迹显示ANRIL过度表达降低P15INK4B（墨水4B）并增加OVCA429细胞中的Bcl-2蛋白水平。(C类)增加P15INK4B（墨水4B）qRT-PCR检测到A2780-KD和OVCA433-KD细胞中Bcl-2 mRNA水平降低，而P15降低墨水4b在OVCA429-OE细胞中检测到Bcl-2 mRNA水平升高。
图6
图6。ANRIL敲除抑制A2780细胞增殖体内
(A类)肿瘤异种移植物的生长曲线。源自A2780-KD1和A2780-KD2细胞的肿瘤体积显著小于源自A2780-NC细胞的肿瘤体积，并且两组之间的大小差异随着时间的推移而增加（每组6只小鼠*P（P）< 0.05). (B类)A2780-NC肿瘤的重量明显大于A2780-KD1和A2780-KD2肿瘤的重量*P（P）< 0.05. (C类)裸鼠皮下注射A2780-NC、A2780-KD1和A2780-KD2细胞后肿瘤的典型图像。(D类)免疫组织化学染色显示来源于A2780-KD1和A2780-KD2细胞的肿瘤P15增加INK4B（墨水4B）与来源于A2780-NC细胞的相比，ki67和Bcl-2水平降低。
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