跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2016年4月14日；7（4）：e2189。
doi:10.1038/cddis.2016.92。

姜黄素诱导肝星状细胞衰老需要激活PPARγ/P53信号

H Jin先生 1, N Lian公司 1, F张 1 2, L Chen先生 1, Q陈 1, C路 1, M卞 1, J邵 三, L Wu先生 1, S郑 1 2
附属公司

姜黄素诱导肝星状细胞衰老需要激活PPARγ/P53信号

H Jin先生等。 细胞死亡病. .

摘要

静止的肝星状细胞（HSCs）的激活是肝纤维化形成中的主要事件，伴随着细胞增殖的增强和细胞外基质的过度生成。尽管抑制细胞增殖和诱导凋亡是阻止HSCs激活的潜在策略，更好地了解活化HSC的衰老，可以为肝纤维化的防治提供新的治疗策略。抗氧化剂姜黄素是姜黄中的一种植物化学物质，已被证明在体外和体内抑制HSC的激活。目前的工作旨在评估姜黄素对活化HSC衰老的影响，并阐明其潜在机制。在本研究中，姜黄素促进了衰老标记物Hmga1在大鼠纤维化肝脏中的表达。此外，姜黄素增加了体外衰老相关β-半乳糖苷酶阳性HSC的数量。同时，姜黄素通过提高衰老标记物P16、P21和Hmga1的表达而诱导HSC衰老，同时HSC活化标记物α-平滑肌肌动蛋白和α1（I）-前胶原的丰度降低。此外，姜黄素还影响细胞周期和端粒酶活性。我们进一步证明，P53药物抑制剂pifithrin-α（PFT-α）或P53 siRNA转染可在体外消除姜黄素诱导的HSC衰老。同时，体内进一步证实姜黄素破坏P53导致活化HSC衰老加剧。进一步研究表明，姜黄素通过PPARγ激活依赖机制促进P53的表达。此外，PPARγ激动剂15d-PGJ2促进PPARγ反式激活活性，显著增强姜黄素对活化HSC衰老的诱导作用。然而，PPARγ拮抗剂PD68235消除了姜黄素对HSC衰老的诱导作用。综上所述，我们的结果为姜黄素通过诱导衰老抑制HSC活化的机制提供了新的见解。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
姜黄素促进大鼠肝纤维化HSC衰老和P53表达。大鼠分组如下：第1组，溶媒对照组（无CCl）4，无治疗）；第2组，模型组（带CCl4，无治疗）；第3组，秋水仙素治疗组（0.1 mg/kg+CCl4)；第4组，姜黄素治疗组（100 mg/kg+CCl4)；第5组，姜黄素治疗组（200 mg/kg+CCl4)；和第6组，姜黄素治疗组（300 mg/kg+CCl4). 使用抗Hmga1和P53抗体对肝脏切片进行免疫荧光染色。抗体α-SMA用于HSC的特异性染色，DAPI用于细胞核染色。条形图显示了Hmga1或P53阳性细胞在总活化HSC中荧光图像的百分比定量(α-SMA作为标记）使用如图所示的软件Image J***P（P）<0.001对第2组。比例尺，50μ米
图2
图2
姜黄素促进活化HSC衰老在体外用DMSO（0.02%，w/v）、足叶乙甙或姜黄素以指定浓度处理HSC 24小时(一)细胞计数试剂盒-8分析细胞增殖能力*P（P）<0.05对DMSO中**P（P）<0.01对二甲基亚砜***P（P）<0.001对二甲基亚砜。(b)TUNEL染色评估细胞凋亡。绿色荧光表明细胞凋亡。测定TUNEL阳性细胞的百分比。数据表示为平均值±S。D**P（P）<0.01对二甲基亚砜***P（P）<0.001对DMSO。比例尺，50μ米(c（c）)衰老β-半乳糖苷酶染色分析。SA阳性细胞百分比-β-Gal得分；平均值±S。显示了至少三个独立实验的数据**P（P）<0.01对二甲基亚砜***P（P）<0.001对二甲基亚砜。比例尺，200μ米(d日)与纤维化和衰老相关基因的实时PCR分析，包括α-SMA、，α1（I）-前胶原和P16、P21和Hmga1。数据表示为平均值±S。D.意义：*P（P）<0.05对二甲基亚砜**P（P）<0.01对二甲基亚砜***P（P）<0.001对二甲基亚砜。(e（电子）)纤维生成分子蛋白表达的Western blot分析α-SMA、，α1（I）-前胶原和衰老分子P16、P21和Hmga1。(（f）)使用针对P16、P21、Hmga1的抗体进行免疫荧光。用Hoechst试剂染色细胞核。比例尺，10μ米(克)端粒酶（TERT）mRNA水平的实时PCR分析。数据表示为平均值±S。D***P（P）<0.001对DMSO。(小时)流式细胞术细胞周期分析。测定细胞周期分布的百分比。数据表示为平均值±S。D*P（P）<0.05对二甲基亚砜**P（P）<0.01对二甲基亚砜。(我)细胞周期调控蛋白cyclin D1、cyclin E1、CDK4和CDK6的Western blot分析
图3
图3
姜黄素通过P53依赖机制诱导活化HSC衰老。(一和b)P53蛋白表达的Western blot分析。用DMSO（0.02%，w/v）或姜黄素在指定浓度下处理HSC 24小时或20小时μM表示指定的时间段。(c（c）)感官β-半乳糖苷酶染色分析。HSC用二甲基亚砜（0.02%，w/v）、姜黄素（20μM） 和/或PFT-α(20 μM） 24小时PFT-α：一种特殊的P53抑制剂。SA阳性细胞百分比-β-Gal得分；平均值±S。显示了至少三个独立实验的数据***P（P）<0.001对二甲基亚砜，##P（P）<0.01对姜黄素。比例尺，200μ米(d日和e（电子）)与纤维化和衰老相关基因的实时PCR分析，包括α-SMA、，α1（I）-前胶原和P16、P21、Hmga1。数据表示为平均值±S。D.意义：*P（P）<0.05对DMSO或对照siRNA**P（P）<0.01对DMSO或对照siRNA***P（P）<0.001对DMSO或对照siRNA，#P（P）<0.05对姜黄素，##P（P）<0.01对姜黄素，###P（P）<0.001对姜黄素。(（f）和克)纤维生成分子蛋白表达的Western blot分析α-SMA、，α1（I）-前胶原和衰老分子P16，P21，Hmga1。(小时)使用针对P16、P21和Hmga1的抗体进行免疫荧光。用Hoechst试剂染色细胞核。比例尺，10μ米
图4
图4
P53介导的姜黄素诱导活化HSC衰老体内将小鼠随机分为五组：第1组，溶媒对照组（无CCl）4，无治疗）；第2组（带CCl4+广告。Fc）；第3组（带CCl4+姜黄素+Ad.Fc）；第4组（带CCl4+姜黄素+Ad.shP53）；和第5组（带CCl4+Ad.shP53）。向小鼠注射CCl4（0.5毫升/100克体重，静脉注射，每周两次）或姜黄素（300毫克/千克体重，每2天一次），持续8周。Ad.shP53或Ad.Fc（2.5×107pfu/g体重，每2周注射一次）。Ad.Fc被用作对照病毒。(一)肝脏切片用苏木精、伊红、马森试剂、天狼星红和P16染色。展示了代表性的照片。比例尺，100μ米(b和c（c）)测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶（ALP）、透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、III型前胶原（PCIII）和羟脯氨酸水平。数据表示为平均值±S。D.意义：**P（P）<0.01对第1组***P（P）<0.001对第1组，#P（P）<0.05对第2组，##P（P）<0.01对第2组，###P（P）<0.001对第2组，$P（P）<0.05对第3组，$$P（P）<0.01对第3组。(d日)使用抗Hmga1抗体和γH2AX（DNA损伤标记）。抗体α-SMA用于特异性染色HSC，DAPI用于染色细胞核。条形图显示Hmga1或γ总活化HSC中的H2AX阳性细胞(α-SMA作为标记）使用软件Image J，如所示(d日). ***P（P）<0.001对第2组，###P（P）<0.001对第3组。比例尺，50μ米(e（电子）)a-SMA的Western blot分析，α1（I）-前胶原、P16、P21、Hmga1和γ分离HSC中H2AX蛋白水平
图5
图5
姜黄素激活PPARγ促进P53的转录激活。用DMSO（0.02%，w/v）、姜黄素和猪苓酮以指定浓度处理HSC 24小时(一)PPAR水平γ用ELISA检测培养中的HSC。数据表示为平均值±S。D.意义：*P（P）<0.05对二甲基亚砜。(b)PPAR蛋白质丰度的蛋白质印迹分析γ分别在细胞质和细胞核中。(c（c）)使用抗PPAR抗体的免疫荧光γ用Hoechst试剂染色细胞核。比例尺，10μ米(d日)EMSA用于检查PPAR的结合能力γDNA序列。通道1表示仅用探针处理的样品。通道2是用不含姜黄素的二甲基亚砜处理的样品，通道3是用姜黄素处理的样品（20μM） ，通道4是用姜黄素处理的样品（40μM） ，通道5是用Pigliatone（2）处理的样品μM） ●●●●。(e（电子）)传代HSC转染pP53-Luc。然后用或不用15d-PGJ2预处理细胞（10μM） ，PD68235（10μM） ，在添加姜黄素（20μM） 在雷尼拉荧光素酶报告基因正常化后，荧光素素酶活性表示为相对单位(n个=6). 数据表示为平均值±S。D.意义：*P（P）<0.05对二甲基亚砜**P（P）<0.01对二甲基亚砜***P（P）<0.001对二甲基亚砜，#P（P）<0.05对姜黄素，##P（P）<0.01对姜黄素
图6
图6
激活PPARγ是姜黄素诱导P53依赖性HSC衰老所必需的。用姜黄素（20μM） 无论是否预先接触15d-PGJ2（10μM） 和PD68235（10μM） 持续1小时(一和e（电子）)衰老β-半乳糖苷酶染色分析。SA阳性细胞百分比-β-Gal得分；平均值为±S。显示了至少三个独立实验的数据*P（P）<0.05对二甲基亚砜**P（P）<0.01对DMSO中***P（P）<0.001对二甲基亚砜，##P（P）<0.01对姜黄素。比例尺，200μ米(b和（f）)与纤维化和衰老相关基因的实时PCR分析，包括α-SMA、，α1（I）-前胶原和P16、P21、Hmga1。数据表示为平均值±S。D.意义：*P（P）<0.05对二甲基亚砜**P（P）<0.01对二甲基亚砜***P（P）<0.001对二甲基亚砜，#P（P）<0.05对姜黄素，##P（P）<0.01对姜黄素，###P（P）<0.001对姜黄素。(c（c）和克)纤维生成分子蛋白表达的Western blot分析α-SMA、，α1（I）-前胶原和衰老分子P16、P21和Hmga1。(d日和小时)使用针对P16、P21和Hmga1的抗体进行免疫荧光。用Hoechst试剂染色细胞核。比例尺，10μ米(b–d日,（f）–小时)P53 mRNA和蛋白水平的实时PCR、western blot和免疫荧光分析。数据表示为平均值±S。D.比例尺，10μ米(我)PPAR（购电协议）γ信号转导通过转录上调P53表达在激活的HSC衰老中起重要作用
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Kisseleva T，Brenner DA。肝星状细胞与纤维化逆转。《胃肠肝病杂志》2006；21（补充3）:S84–S87。-公共医学
    1. Kisseleva T，Brenner DA。肝星状细胞在纤维化形成和逆转纤维化中的作用。胃肠病学与肝病杂志2007；22（补充1）：S73–S78。-公共医学
    1. Friedman SL.肝纤维化的机制。胃肠病学2008；134: 1655–1669.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Friedman SL。肝星状细胞：肝脏的蛋白质、多功能和神秘细胞。2008年生理学评论；88: 125–172.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Krizhanovsky V，Yon M，Dickins RA，Hearn S，Simon J，Miething C等人。活化星状细胞的衰老限制了肝纤维化。细胞2008；134: 657–667.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语