Epithelial cell migration requires the interaction between the vimentin and keratin intermediate filaments

doi:10.1038/srep24389

.2016年4月13日：6:24389。

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上皮细胞迁移需要波形蛋白和角蛋白中间丝之间的相互作用

克里斯蒂娜·韦莱兹·德尔瓦莱¹, 梅塔·马施·莫雷诺¹, 费德里科·卡斯特罗·穆尼奥兹莱多¹, 伊万·加尔瓦恩·门多萨², 瓦利德·库里·哈库奇¹

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¹IPN研究与高级研究中心细胞生物学系。阿普多。墨西哥梅西科市14-740号邮政信箱，07000。
²IPN研究和高级研究中心共焦显微镜单位。阿普多。墨西哥梅西科市14-740号邮政信箱，07000。

PMID： 27072292
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内政部： 10.1038/srep24389

上皮细胞迁移需要波形蛋白和角蛋白中间丝之间的相互作用

克里斯蒂娜·维莱兹·德尔瓦莱等。科学代表. 2016.

.2016年4月13日：6:24389。

doi:10.1038/srep24389。

作者

克里斯蒂娜·维莱兹·德尔瓦莱¹, 梅塔·马施·莫雷诺¹, 费德里科·卡斯特罗·穆尼奥兹莱多¹, 伊万·加尔瓦恩·门多萨², 瓦利德·库里·哈库奇¹

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¹IPN研究与高级研究中心细胞生物学系。阿普多。墨西哥梅西科市14-740号邮政信箱，07000。
²IPN研究和高级研究中心共焦显微镜单位。阿普多。墨西哥梅西科市14-740号邮政信箱，07000。

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摘要

上皮迁移在发育、伤口修复和肿瘤转移中起着重要作用，但中间丝在这一重要事件中的作用尚不清楚。我们最近发现，波形蛋白与迁移表皮细胞前缘的角蛋白KRT14共存于同一细胞中，波形蛋白的敲低会损害集落生长。在这里，我们证明波形蛋白与角蛋白-KRT14共定位和共免疫沉淀，并且波形蛋白-YRKLLEGEE-序列的突变显著减少角蛋白细胞的迁移。我们的数据表明，角质形成细胞迁移需要波形蛋白螺旋2B结构域的-YRKLLEGEE-序列中波形蛋白和角蛋白之间的相互作用。这些发现对理解波形蛋白中间丝在正常和肿瘤上皮细胞中的作用具有广泛意义。

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数字

**图1。培养的人表皮角质形成细胞中的波形蛋白和角蛋白染色。**
(A类)对4天龄的人类角质形成细胞集落进行KRT14角蛋白（绿色）和Vim（红色）的免疫荧光染色。注意，除了角蛋白外，只有外周细胞表达Vim。(B类)角质形成细胞KRT14（绿色）和Vim（红色）免疫染色的共焦显微镜图像。(C类)共焦显微镜下的连续单光学切片显示不同焦平面上KRT14和Vim的免疫荧光染色。请注意，虽然角蛋白IFs形成一个包裹细胞核的篮状结构，但Vim仅存在于底部的基底细胞中。比例尺 = 10 微米。(天)共焦显微镜下的单个光学切片显示KRT5/KRT6或KRT14和Vim的免疫荧光染色；（a）注意KRT14与KRT5的完全共同定位，以及（b）KRT14和Vim的部分共同定位。(E类)代表性免疫印迹分析显示，在存在或（−）不存在一级抗体的情况下，Vim和KRT14（+）的共同免疫沉淀。

**图2。沉默波形蛋白mRNA可阻断培养的人表皮角质形成细胞的迁移。**
角质形成细胞用一种针对Vim的siRNA电穿孔，并将其接种在Berens描述的微升径向单层分析（MRMA）中等.，它专门测量细胞迁移。我们接种了12种MRMA表皮培养物 h，然后治疗6次然后，在相差显微镜下拍摄培养物后，我们通过量化MRMA的面积来确定迁移距离，然后计算其半径。根据这些数据，计算了迁移距离。(A类)6点MRMA分析的代表性图像小时(B类)显示每个处理下迁移距离的图表。注意，与对照培养物相比，用siRNA处理的Vim培养物的迁移距离缩短。数据是n个重复实验的平均值 = 每个16个，±SD*p ≤ 0.05.

**图3。波形蛋白通过其位于线圈2B结构域末端的YRKLEGEE区域与角蛋白结合。**
(A类)Vim的线圈2B结构域的示意图，显示通过定点突变修饰的氨基酸。(B类)通过qRT-PCR分析短暂表达Wt-Vim或其突变体的表皮培养物中Vim mRNA的表达转染后h(C类)来自平行培养物的角质形成细胞集落的直径，如(B类). 数据是n个重复实验的平均值 = 16 ± 标准差*p ≤ 0.05. 请注意，变异的Vim减少了角质形成细胞集落的大小。(天)48小时与KRT14共免疫沉淀的Vim蛋白的免疫印迹分析转染后h。

**图4。波形蛋白YRKLLEGEE区域的突变破坏了IFs的排列。**
图3中测量的菌落的代表性图像显示了Vim纤丝的断裂。比例尺 = 25 微米；插入比例尺7.5 微米。

**图5。在波形蛋白基因的–YRKLLEGEE-序列中含有波形蛋白突变体的质粒电穿孔后，角质形成细胞的迁移减少。**
用Wt-Vim或其突变体对角质形成细胞进行电穿孔，并将其接种在如上所述的MRMA中，以测量细胞迁移。我们接种MRMA表皮培养24 h，然后治疗6次 h带有EGF，有或没有携带Vim基因的质粒。然后，在相差显微镜下拍摄培养物后，我们通过量化MRMA的面积来确定迁移距离，然后计算其半径。根据这些数据，计算了迁移距离。(A类)6点MRMA分析的代表性图像小时(B类)显示每个处理下迁移距离的图表。注意，与对照培养物相比，用含有突变Vim基因的质粒处理的培养物迁移距离缩短。数据是n个重复实验的平均值=每个16个， ± 标准差*p ≤ 0.05.

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