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.2016年3月24日;17(4):437.
doi:10.3390/ijms17040437。

非小细胞肺癌中TRPV3的过度表达与肿瘤进展

附属机构

非小细胞肺癌中TRPV3的过度表达与肿瘤进展

李晓蕾等。 国际分子科学杂志. .

摘要

(1) 背景:瞬时受体电位香草醛3(TRPV3)是钙通透性通道TRP通道家族的成员。一些TRP通道的蛋白质在癌细胞中高度表达。本研究旨在评估TRPV3在非小细胞肺癌(NSCLC)中的临床意义和生物学功能;(2) 方法:采用免疫组织化学方法检测TRPV3在非小细胞肺癌组织及癌旁肺组织中的表达。Western blot检测TRPV3、CaMKII、p-CaMKIL、CyclinA、CycinD、CyclenE1、CDK2、CDK4和P27的蛋白表达。使用小干扰RNA去除TRPV3的表达。使用激光扫描共聚焦显微镜测量细胞内钙浓度([Ca(2+)]i)。流式细胞术分析细胞周期;(3) 结果:TRPV3在96例人类肺癌中的65例(67.7%)中过表达,并与分化(p=0.001)和TNM分期(p=0.004)相关。重要的是,TRPV3表达与总生存期短相关。此外,阻断或敲除TRPV3可抑制肺癌细胞增殖。此外,抑制TRPV3可降低肺癌细胞的[Ca(2+)]i,并使细胞周期阻滞在G1/S边界。进一步结果显示,TRPV3抑制可降低p-CaMKII、CyclinA、CyclonD1、CycrinE的表达,并增加P27水平;(4) 结论:我们的发现表明TRPV3在非小细胞肺癌中过度表达,并与肺癌进展相关。TRPV3的激活可促进肺癌细胞的增殖。TRPV3可能是非小细胞肺癌的潜在伴药靶点。

关键词:TRPV3;[钙]i;细胞周期;非小细胞肺癌;增殖。

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数字

图1
图1
的表达式TRPV3型在人类NSCLCS中。免疫组织化学染色TRPV3型在癌组织及其相应的癌旁组织中进行了检测。棕色颗粒代表积极信号。的阳性表达位点TRPV3型主要定位于肿瘤细胞的细胞膜和细胞质中。TRPV3型癌旁组织(Para)呈阴性表达(A类,B),以及TRPV3型肺鳞状细胞癌(Sq)阳性表达(C类,)和肺腺癌(E类,F类). (A类,C类,E类) 200×; 和(B,,F类)400×。的表达式TRPV3型肺内Ad、肺内Sq和Para(G公司)Western blot检测。每个条形代表三个独立实验的平均值±SD。** 与癌旁组织相比<0.01。
图1
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的表达式TRPV3型在人类NSCLCS中。免疫组织化学染色TRPV3型在癌组织及其相应的癌旁组织中进行了检测。棕色颗粒代表积极信号。的阳性表达位点TRPV3型主要定位于肿瘤细胞的细胞膜和细胞质中。TRPV3型癌旁组织(Para)呈阴性表达(A类,B),以及TRPV3型肺鳞状细胞癌(Sq)阳性表达(C类,)和肺腺癌(E类,F类). (A类,C类,E类) 200×; 和(B,,F类)400×。的表达式TRPV3型肺内Ad、肺内Sq和Para(G公司)Western blot检测。每个条形代表三个独立实验的平均值±SD。** 与癌旁组织相比<0.01。
图2
图2
卡普兰-迈耶生存曲线。根据Kaplan–Meier曲线计算cum存活率TRPV3型表达式状态(=0.020)。通过log-rank比较计算统计差异。
图3
图3
影响TRPV3型对肺癌细胞增殖的影响。通过MTT分析24小时后RuR(1–40µM)对A549和H1299细胞的影响(A类); 数据表示为三等分的平均值±标准差。* 与对照组相比<0.05;** 与对照组相比<0.01。A549和H1299细胞用TRPV3型-24小时特异性siRNATRPV3型A549和H1299细胞的耗尽效率(B); 用20µM RuR或TRPV3型-MTT检测特异性siRNA(C类)和菌落形成分析(). 数据表示为三份数据的平均值±SD。## 与对照组相比<0.01;** 与NC组相比<0.01。
图3
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影响TRPV3型对肺癌细胞增殖的影响。通过MTT分析24小时后RuR(1–40µM)对A549和H1299细胞的影响(A类); 数据表示为三等分的平均值±标准差。* 与对照组相比<0.05;** 与对照组相比<0.01。A549和H1299细胞用TRPV3型-24小时特异性siRNATRPV3型A549和H1299细胞的耗尽效率(B); 用20µM RuR或TRPV3型-MTT检测特异性siRNA(C类)和菌落形成分析(). 数据表示为三份数据的平均值±SD。## 与对照组相比<0.01;** 与NC组相比<0.01。
图4
图4
[Ca的测量2+]在A549和H1299细胞中。荧光强度(单位:[Ca)2+]用激光扫描共聚焦显微镜记录不同处理(400×)(A类); 蛋白质印迹分析p-CaMKII型A549和H1299细胞中的表达(B). 所有数据均表示为三倍的平均值±SD。# 与对照组相比<0.05;## 与对照组相比<0.01;* 与NC组相比<0.05;** 与NC组相比<0.01。
图5
图5
影响TRPV3型A549和H1299细胞周期动力学。细胞周期相由碘化丙啶(PI)掺入测定。细胞在电镀后24小时通过流式细胞仪进行分析(A类); 对一系列细胞周期相关因子的Western blot分析表明,蛋白质水平发生了变化(B). 所有数据均表示为三倍的平均值±SD。# 与对照组相比<0.05;* 与NC组相比<0.05。
图5
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影响TRPV3型A549和H1299细胞周期动力学。细胞周期相由碘化丙啶(PI)掺入测定。细胞在电镀后24小时通过流式细胞仪进行分析(A类); 对一系列细胞周期相关因子的Western blot分析表明,蛋白质水平发生了变化(B). 所有数据均表示为三倍的平均值±SD。# 与对照组相比<0.05;* 与NC组相比<0.05。

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