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.2015年12月22日；112(51):15713-8.
doi:10.1073/pnas.1522163112。 Epub 2015年12月7日。

BRD4是治疗肝纤维化的新靶点

宁鼎 1, Nasun Hah公司 1, 露丝·T·余 1, 玛拉·谢尔曼 1, 克里斯·本纳 2, 马蒂亚斯·勒布朗 1, 何明孝 1, 克里斯托弗·利德尔 三, 迈克尔·唐斯 4, 罗纳德·埃文斯 5
附属公司

BRD4是治疗肝纤维化的新靶点

宁鼎等。 美国国家科学院程序. .

摘要

肝纤维化的特征是肝星状细胞（HSC）衍生的肌成纤维细胞持续沉积细胞外基质成分。这是渐进但可逆的创伤愈合过程的组织学表现。未减弱的纤维化反应会导致慢性肝病和肝硬化，这是肝细胞癌的病理前兆。我们在这里报道了JQ1，一种溴代主要和末端外（BET）蛋白成员溴代主要蛋白4（BRD4）的小分子抑制剂，能够消除细胞因子诱导的HSC活化。Cistromic分析表明，BRD4在与参与多个纤维化前途径的基因相关的增强子中高度富集，其中BRD4与纤维化前转录因子共定位。此外，我们发现JQ1不仅具有保护作用，而且可以逆转四氯化碳诱导的小鼠纤维化模型中的纤维化反应。我们的结果表明，BRD4可以作为一个全局基因组调节器，通过其对肌成纤维细胞转录的协调调节来指导纤维化反应。这表明BRD4是纤维化并发症患者的潜在治疗靶点。

关键词：BET抑制剂；BRD4；抗纤维化治疗；肝星状细胞；肝纤维化。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突声明：N.D.、R.T.Y.、M.H.S.、C.L.、M.D.和R.M.E.是使用BET抑制剂治疗纤维化方法相关技术的创造者，可能有权获得专利使用费。

数字

图1。
图1。
BRD4调节激活HSC基因组的纤维化前反应。(A类)通过RT-qPCR测定用或不用TGF-β1处理的对照（siCNTL）或BRD4特异性（siBRD4）siRNA-转染的LX-2细胞中COL1A1的表达（5 ng/mL，16 h）。数据表示至少三个独立实验（一式三份）的平均值±SEM。星号表示具有统计学意义的差异（学生t吨测试*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001). (B类)经BRD4抑制剂（JQ1 500 nM；I-BET 500 nM和PFI-1 500 nM）处理的LX-2细胞中，无论是否含有TGF-β1（5 ng/mL，持续16 h），纤维化前基因表达的倍数变化。用载体（DMSO）处理的细胞中的基因表达水平被任意设置为1。数据表示至少三个独立实验（一式三份）的平均值±SEM。(C类)强度图显示了ChIP-碎片密度的等级聚集，作为启动子区域（转录起始位点的±2 kb）外具有统计意义的H3K27ac峰（FDR=0.0001）中心距离的函数。BRD4（黑色）位置0附近的强度表明BET/H3K27ac位点重叠，H3K17ac（绿色）作为阳性对照。(D类)LX-2细胞中BRD4 ChIP-Seq信号强度相对于其结合位点中心的图（16小时±500 nM JQ1）。(E类)对位于LX-2细胞BRD4峰100 bp以内的最丰富基序进行从头分析（FDR=0.0001），并绘制文氏图，描绘LX-2电池中BRD4和ETS1/SRF/NF-κB/SMAD3基因组结合位点的重叠。
图S1。
图S1。
BRD4在激活的HSC中靶向纤维化前增强因子。(A类)用DMSO（载体）或JQ1（500 nM，16 h）处理的LX-2细胞中COL1A1增强子区域的ChIP-qPCR。数据表示至少三个独立实验（一式三份）的平均值±SEM。(B类)LX-2细胞中BRD4靶基因的基因本体分析（MSigDB）。
图2。
图2。
BRD4抑制阻断HSC激活。(A类)DMSO（0.1%）或JQ1（500 nM）处理的原代活化HSC在不同时间点（第3天和第6天）的选定诱导基因的折叠变化。使用对数对行和列进行欧氏聚类2-转化的mRNA-Seq表达数据，n个=每个治疗组3个。子弹（红色）表示关键纤维化标记基因：第1a1列,第1a2列,学报2、和设计. (B类)JQ1抑制的激活诱导基因的基因本体（GO）分析（MSigDB）。(C类)用DMSO（0.1%）或JQ1（500nM）处理的静止（第1:D1天）和激活（第6:D6天）原发性HSC的代表性图像：亮场(顶部)，Acta2免疫荧光染色(中部)和BODIPY染色(底部). （比例尺，50μm）(D类)通过Western blot分析测定ACTA2的表达。(E类)脂肪细胞的定量C类数据表示至少三个独立实验的平均值±SEM。星号表示具有统计学意义的差异（学生的未配对t吨测试***P（P）< 0.001).
图S2。
图S2。
BRD4抑制抑制HSC激活成肌成纤维细胞期间的纤维化前基因表达。(A类)描述体外HSC自我激活系统的图表。(B类)激活期间诱导的基因总数（红色）和JQ1（蓝色）对该诱导的抑制。(C类)显示褶皱变化的火山图(x个轴）和DMSO（蓝色阴影）在两个时间点（第3天和第6天）和第1天（红色阴影）上调。从浅色渐变到深色渐变表示时间在增加（第3天和第6天）。(D类)DMSO（0.1%）或JQ1（500 nM）处理的原代活化HSC在不同时间点（第3天和第6天）的选定诱导基因的折叠变化。使用对数对行和列进行欧氏聚类2-转化的mRNA-Seq表达数据，n个=每个治疗组3个。子弹（红色）表示关键纤维化标记基因：第1a1列,第1a2列,学报2、和设计. (E类)第1a1列,学报2,倾倒1、和设计用DMSO或JQ1（500 nM）处理指定时期的原代小鼠HSC的qRT-PCR分析。数据表示至少三个独立实验（一式三份）的平均值±SEM。星号表示具有统计学意义的差异（学生t吨测试*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001).
图3。
图3。
BRD4抑制剂阻断激活HSC增殖。(A类)在显示的JQ1浓度下，活化HSC的正常增殖活性。(B类)通过TUNEL分析测量JQ1处理的（500 nM）HSC的凋亡。(C类)通过β-半乳糖苷酶染色测量JQ1处理的（500 nM）HSC的细胞衰老。(D类)BrdU纳入对照（DMSO）和JQ1处理（500 nM）HSC。(E类)基因表达的折叠变化Pdgfrb公司,抄送1,抄送2、和Myc公司用RT-qPCR测定用二甲基亚砜或JQ1（500 nM）处理的原代HSC。数据表示至少三个独立实验（一式三份）的平均值±SEM。星号表示具有统计学意义的差异（学生t吨测试*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001). （比例尺，50μM。）
图S3。
图S3。
在HSC激活成肌成纤维细胞期间，JQ1没有明显的促凋亡或促生作用。(A类)在指定时间点用二甲基亚砜或JQ1（500 nM）处理的原代小鼠HSC中TUNEL染色的代表性图像。(B类)β-半乳糖苷酶染色的代表性图像，用于测量在指定时间点用DMSO或JQ1（500 nM）处理的原代小鼠HSC的衰老。
图S4。
图S4。
激活的人类HSC中BET抑制剂的抗增殖特性。抗增殖活性(A类)JQ1和(B类)I-BET-151对抗LX-2细胞。(C类)用二甲基亚砜或JQ1/I-BET-151（500 nM）处理LX-2细胞72小时后的BrdU掺入试验(D类)用TUNEL法检测用DMSO或JQ1/I-BET-151（500 nM）处理72 h的LX-2细胞的凋亡。(E类)通过β-半乳糖苷酶染色检测用二甲基亚砜或JQ1/I-BET-151（500 nM）处理72 h的LX-2细胞的细胞衰老。(F类)用二甲基亚砜或JQ1/I-BET-151（500 nM）处理LX-2细胞72小时后进行PDGFRB和CCND1 RT-qPCR分析。数据表示至少三次独立实验的平均值±SEM，共三次。星号表示具有统计学意义的差异（学生t吨测试*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001). （比例尺，50μM。）
图4。
图4。
BRD4抑制可防止肝纤维化。(A类)天狼星红(左侧)苏木精和曙红（H&E，赖特)4周载体肝脏染色[玉米油加2-羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD），n个=5]，JQ1（玉米油加JQ1 50 mg/kg i.p。，n个=5），四氯化碳（CCl40.5 mL/kg加上HP-β-CD i.p。，n个=10）和CCl4加上JQ1(n个=8）处理的C57BL/6J小鼠。（比例尺，250μm）(B类)所述肝脏样本中选定的纤维化前基因的折叠变化A类使用日志对行和列进行欧几里德聚类2-转化的mRNA-Seq表达数据，n个=每个治疗组3个。(C类)ACTA2免疫组织化学在肝脏样本中的描述A类.纤维化的量化标准(D类)H&E染色（Ishak评分）(E类)羟脯氨酸含量，以及(F类)天狼星红染色。(G公司)ACTA2免疫组化染色定量C类数据表示平均值±SEM。统计意义如所示。
图S5。
图S5。
预防性肝纤维化模型的血清ALT和基因表达分析。(A类)预防性肝纤维化模型的给药方案。(B类)肝损伤用血清ALT测定(C类)肝脏Col1a1、Acta2、Tgfβ1和Timp1基因表达水平的qRT-PCR测量。数据表示平均值±SEM。星号表示统计显著差异（学生t吨测试*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001).
图5。
图5。
抑制BRD4对肝纤维化的治疗益处。(A类)治疗性肝纤维化模型的给药方案。(B类)6周龄C57BL/6J小鼠（CCl）的肝脏4,n个= 10; CCl公司4+JQ1、，n个=10）天狼星红染色(左侧)苏木精和曙红（H&E，赖特). （比例尺，250μm）纤维化定量(C类)H&E染色（Ishak评分）(D类)天狼星红染色，以及(E类)羟脯氨酸含量。(F类)肝脏表达第1a1列和倾倒1通过qRT-PCR测量。(G公司)HSC活化，通过ACTA2免疫组织化学测定。(H（H）)ACTA2免疫组化染色定量G公司. (我)肝脏表达学报2通过qRT-PCR测量。(J型)模型描述了BETs对肝纤维化的表观遗传控制。数据表示平均值±SEM。星号表示统计显著差异（学生的未配对t吨测试**P（P）< 0.01, ***P（P）< 0.001).
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中的注释

  • 肝脏：调节肝纤维化前转录。
    托马斯·H·。 托马斯·H·。 Nat Rev胃肠肝素。2016年2月；13(2):62-3. doi:10.1038/nrgastro.2015.222。Epub 2015年12月23日。 Nat Rev胃肠肝素。2016 PMID：26695083 没有可用的摘要。

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    1. Friedman SL、Sheppard D、Duffield JS、Violette S。纤维化疾病的治疗：接近起跑线。2013年《科学与运输医学》；5（167）：167sr1。-公共医学
    1. 韦恩助教。纤维化的细胞和分子机制。病理学杂志。2008;214(2):199–210.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Bataller R，Brenner DA。肝纤维化。临床投资杂志。2005;115(2):209–218.-项目管理咨询公司-公共医学
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