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.2016年4月；75(4):721-9.
doi:10.1136/annrheumdis-2015-208093。 Epub 2015年11月26日。

类风湿关节炎相关自身抗体介导骨丢失的新型趋化因子依赖性分子机制的鉴定

阿基兰·克里希纳穆尔西 1, 维杰·约书亚 1, Aase Haj Hensvold公司 1, 陶金 2, 孟孙 1, 南希·维瓦尔 1, 吉米·伊特伯格 三, 玛丽安·恩格斯特伦 1, 卡蒂亚·费尔南德斯·科尔奎拉 1, 哈立德·阿马拉 1, 马林·马格努森 2, 古斯塔夫·威格布拉德 4, Jungo Kato加藤 4, 胡安·米盖尔·吉梅内斯·安德拉德 5, 凯里·泰森 6, 斯蒂芬·拉佩基 6, 卡琳·伦德伯格 1, 塞尔吉乌·博格丹·卡特里娜 7, Per Johan Jakobsson公司 1, 卡米拉·斯文森 4, 维维安娜·马尔姆斯特罗姆 1, 拉尔斯·克拉雷斯科 1, 海蒂·瓦哈玛 1, 安卡·卡特里娜 1
附属公司

类风湿关节炎相关自身抗体介导骨丢失的新型趋化因子依赖性分子机制的鉴定

阿基兰·克里希纳穆尔西等。 类风湿关节炎. 2016年4月.

勘误表in

摘要

目标：类风湿关节炎（RA）特异性抗瓜氨酸蛋白/肽抗体（ACPA）出现在疾病发作之前，与骨骼破坏有关。我们旨在剖析ACPA在破骨细胞（OC）激活中的作用，并确定此过程中的关键细胞介质。

方法：从RA患者的滑液和外周血中分离出多克隆ACPA。从RA患者的单个SF B细胞中分离出单克隆ACPA。OCs是由含有或不含ACPA的血细胞前体发育而来的。我们通过免疫组织化学方法分析瓜氨酸靶点和肽基精氨酸脱氨酶（PAD）酶的表达，并通过细胞计数珠阵列分析细胞上清液。在OC培养物中测试抗白细胞介素（IL）-8中和抗体和pan-PAD抑制剂的作用。将单克隆ACPAs注射到小鼠体内，用显微CT分析Repaixin阻断CXCR1/2前后的骨结构。

结果：PAD的蛋白质瓜氨酸化对OC分化至关重要。多克隆ACPA通过PAD依赖的IL-8介导的自分泌环增强OC分化，该自分泌环被IL-8中和完全消除。从RA患者的单个SF B细胞中提取的、具有明显表位特异性的人单克隆ACPA，其中一些（但不是全部）可促进细胞培养中的OC分化。将单克隆ACPA转移到小鼠体内诱导的骨丢失被IL-8拮抗剂repaixin完全逆转。

结论：我们对瓜氨酸化和PAD酶在OC分化和ACPA诱导OC激活过程中的关键作用提供了新的见解。我们的研究结果表明，IL8-依赖性OC激活可能是ACPA阳性RA关节特异性炎症开始的早期事件。

关键词：Ant-CCP；自身抗体；早期类风湿性关节炎。

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数字

图1
图1
多克隆（抗CCP2亲和纯化）和单克隆（单个B细胞衍生）抗瓜氨酸蛋白/肽抗体（ACPAs）诱导破骨细胞（OC）活化和骨吸收。（A） 成熟OCs的酒石酸耐受性酸性磷酸酶（TRAP）染色，成熟OCs取自健康个体CD14阳性单核细胞的Mφ，并在0.1µg/mL浓度的非ACPA流通IgG或ACPA IgG（ACPA）存在下培养（原始放大200倍）。该图表示OC（≥3个细胞核的TRAP阳性细胞）数量的增加倍数和吸收区域的增加倍数。这些值代表三个独立实验的平均值±SEM。（B） 成熟OCs的TRAP染色和磷酸钙再吸收区的显微可视化，在四种单克隆ACPA（即B02、D10、B09和C07）和一种浓度为1µg/mL。这些图表表示OC（≥3个细胞核的TRAP阳性细胞）数量的增加倍数和吸收区域的增加倍数。这些值代表四个独立实验的平均值±SEM。（C） 图表表示OC中刺激性B02和非刺激性B09 ACPA的剂量滴定实验（≥3个细胞核的TRAP阳性细胞数）和骨吸收实验（吸收面积，%）的平均值±SEM。（D） 成熟OCs的TRAP染色和在存在D10、B02和E02抗体Fab片段（1µg/mL）的情况下磷酸钙再吸收区域的显微可视化。（N＝4）。这些图表示OC（≥3个细胞核的TRAP阳性细胞）数量的增加和吸收区的增加。这些值代表四个独立实验的平均值±SEM*p＜0.05。
图2
图2
破骨细胞（OC）分化不同阶段瓜氨酸靶标和肽基精氨酸脱氨酶（PAD）酶的表达。（A） 免疫组织化学图像显示，在CD14阳性单核细胞前体细胞向Mφ和成熟OCs分化的不同阶段，瓜氨酸化靶点的棕色3,3-二氨基苯甲醛（DAB）染色。载玻片用murinised单克隆抗瓜氨酸蛋白/肽抗体（ACPAs）（mB02、mD10、mC07）和单克隆对照抗体（mE02）染色，并用苏木精复染（CD14阳性单核细胞和成熟OC的原始放大倍数为500倍，中期放大倍数为250倍）。（B） 共聚焦显微镜图像显示在成熟OC中用单克隆murinised ACPAs（mE02，mB02，mD10，mC07）和蓝色4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）核染色进行红色荧光染色。（C） 共聚焦显微镜图像显示成熟OC中多克隆ACPA的红色荧光染色、抗CD68抗体的绿色荧光和DAPI的蓝色核染色。（D） 免疫组织化学图像显示，在CD-14阳性单核细胞前体细胞向Mφ和成熟OCs分化的不同阶段，PAD2和PAD4表达呈棕色DAB染色。用苏木精对载玻片进行复染（原始放大250倍）。（E） 通过向精氨酸涂层板中添加Mφ和OC细胞裂解物，使用基于抗体的检测方法测量PAD活性，然后通过ELISA测量去离子精氨酸的量。该图表示以mU/mg蛋白质表示的PAD酶活性。这些值代表两个独立实验的平均值±SEM。（F） 免疫组织化学图像显示成熟OC中瓜氨酸化靶点的棕色DAB染色，在培养开始时添加PAD抑制剂（Cl-amidine）进行培养或不进行培养。用鼠化单克隆ACPA（mB02）和单克隆对照抗体（mE02）对载玻片进行染色，并用苏木精进行复染（原始放大250倍）。
图3
图3
肽基精氨酸脱氨酶（PAD）酶对破骨细胞生成和抗瓜氨酸蛋白/肽抗体（ACPA）介导的作用至关重要。（A） PAD抑制（PADi，Cl-脒）剂量依赖性地抑制破骨细胞（OC）的分化和成熟，而无任何细胞毒性作用。图中显示了OC（含≥3个细胞核的抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）阳性细胞）数量的减少倍数和培养上清液中LDH释放的增加倍数。这些值代表平均值±SEM。（B） PADi不会影响SF迁移或存活。图中显示滑膜成纤维细胞迁移指数和培养上清液中LDH释放的倍数增加。这些值代表平均值±SEM。（C） 在OC培养开始时添加PADi可阻止ACPA诱导的OC活化和磷酸钙再吸收。这些图表示OC（≥3个细胞核的TRAP阳性细胞）数量的增加倍数。这些值代表三个独立实验的平均值±SEM。图像通过OCs表示吸收区域（原始放大40倍）。（D） PADi的剂量滴定表明，早期PAD抑制（在OC培养开始时）低至0.2μM的PADi抑制ACPA介导的破骨细胞生成，但不再刺激OC的分化。图中显示OC（≥3个细胞核的TRAP阳性细胞）数量的倍数减少。这些值代表平均值±SEM。（E） 晚期PAD抑制（OC培养结束前3天）抑制ACPA介导的破骨细胞生成，但不抑制OC的非刺激分化。这些图表示OC（≥3个细胞核的TRAP阳性细胞）数量的增加倍数。这些值代表平均值±SEM。*p＜0.05。
图4
图4
白细胞介素（IL）-8是抗瓜氨酸蛋白/肽抗体（ACPA）驱动破骨细胞生成的重要介质。（A） 细胞计数珠阵列显示，ACPA（而非控制IgG）增加了成熟破骨细胞（OCs）培养上清液中IL-8的释放。这些值代表三个独立实验的平均值±SEM。（B） 细胞计量珠阵列显示，Mφ衍生的OC培养物在成熟早期的时候IL-8水平较高，随着时间的推移，IL-8进一步增加。在所有测试时间点，ACPA（而非对照IgG）增加了培养上清液中IL-8的释放。该图显示了三个受试供体之一的细胞培养上清液中IL-8浓度的典型时间动力学变化。这些值代表平均值±SEM。（C） 外源性添加的IL-8以剂量依赖的方式增加破骨细胞的生成。这些值代表平均值±SEM。（D） 中和抗IL-8抗体剂量依赖性地抑制Mφ衍生OCs的成熟。图中显示OC（≥3个细胞核的抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）阳性细胞）数量减少了倍。这些值代表三个独立实验的平均值±SEM。（E） 在低至1μg/mL的剂量下，抗IL-8中和抗体完全消除了ACPA的作用。图中显示OC（≥3个细胞核的TRAP阳性细胞）数量增加了倍。这些值代表三个独立实验的平均值±SEM。（F） 早期（培养的前三天）和晚期（培养的最后三天）添加抗IL-8中和抗体（1μg/mL）都完全消除了ACPA的作用。这些图表示OC（≥3个细胞核的TRAP阳性细胞）数量的增加倍数。这些值代表平均值±SE。（G） 抗IL-8中和抗体而非抗肿瘤坏死因子（TNF）-α（adalimumab）抗体在高达10μG/mL的浓度下消除了ACPA的作用。图中显示OC（≥3个核的TRAP阳性细胞）数量增加了倍。这些值代表三个独立实验的平均值±SEM*p＜0.05。
图5
图5
抗瓜氨酸蛋白/肽抗体（ACPAs）可在体内诱导全身性骨丢失，而白细胞介素（IL）-8的抑制可逆转这种情况。对照组小鼠（A，n=7）和注射ACPA的小鼠（B，n=9）的胫骨干骺端典型2D micro-CT图像。（B） 显示骨小梁骨密度（BMD，D）、骨小梁数（E）、骨体积分数（骨体积/组织体积，F）和皮质组织密度（TMD，G）定量评估的图表。这些值代表平均值±SEM*p＜0.05。
图6
图6
肽基精氨酸脱氨酶（PAD）依赖破骨细胞（OC）的分化和成熟的示意图，允许通过抗瓜氨酸蛋白/肽抗体（ACPA）进行初始OC靶向，并连续释放白细胞介素（IL）-8。OC前体（OCPs）存在于骨髓中，可以发育为成熟OC。在OCP的分化和激活过程中，由于富含钙的微环境中PAD活性增加，细胞瓜氨酸化逐渐增加。循环中存在的ACPA可以到达骨髓中成熟的OCP并与之结合，导致OC活性增加，并通过IL-8依赖的自分泌环进行连续的骨吸收。在第二步中，IL-8将到达关节并启动炎症细胞特别是中性粒细胞的化学吸引和迁移。这些中性粒细胞在ACPA存在下释放出中性粒细胞胞外陷阱，进一步导致关节炎症的发生，其他炎症细胞（如巨噬细胞）的局部积聚和滑膜成纤维细胞的激活，导致滑膜炎症。NET，中性粒细胞胞外陷阱。
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    1. Rantapää-Dahlqvist S、de Jong BA、Berglin E等人。抗环瓜氨酸肽和IgA类风湿因子的抗体可预测类风湿关节炎的发展。大黄性关节炎2003；48:2741–9. 10.1002/第11223条-内政部-公共医学
    1. de Hair MJ、van de Sande MG、Ramwadhdoebe TH等。患类风湿关节炎风险个体的滑膜特征：对理解临床前类风湿关节病的意义。类风湿性关节炎2014；66:513-22。10.1002/第38273条-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. van der Helm-van Mil AH、Verpoort KN、Breedweld FC等。瓜氨酸蛋白抗体与类风湿关节炎临床进展的差异。关节炎研究与治疗2005；7:R949–958。1767年10月186日-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Syversen SW、Goll GL、van der Heijde D等人。类风湿关节炎放射学进展预测和抗突变瓜氨酸波形蛋白抗体的作用：一项为期10年的前瞻性研究结果。《大黄年鉴》2010；69:345–51. 2009年10月1136/日-内政部-公共医学

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