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.1989年10月;7(9):980-2, 984-6, 989-90.

用于基因转移和表达的改良逆转录病毒载体

附属公司

用于基因转移和表达的改良逆转录病毒载体

A D米勒等。 生物技术. 1989年10月.

摘要

我们描述了一组基于鼠逆转录病毒的载体,其中包括用于插入cDNA的独特克隆位点,使得cDNA可以由逆转录病毒长末端重复序列、人巨细胞病毒的直接早期启动子或猿病毒40早期启动子驱动。载体携带从替代启动子表达的新霉素磷酸转移酶基因作为可选标记。构建这些载体的目的是阻止剩余病毒序列合成病毒蛋白,在引入逆转录病毒包装细胞后产生高滴度病毒库,并消除与逆转录病毒封装细胞中存在的病毒DNA的同源重叠,以防止辅助病毒的产生。描述了产生高滴度病毒的方法。

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数字

图1
图1。逆转录病毒载体N2和LNL6
缩写为:LTR,逆转录病毒长末端重复;SD,剪接供体;SA,剪接受体;ψ+,扩展包装信号;pA,聚腺苷化位点。箭头指示转录起始位点和转录方向。
图2
图2。PA317细胞和逆转录病毒载体中病毒序列的比较
顶部是复制能力强的鼠病毒AM-MLV的图表,该病毒由MoMLV通过替换环境价值和部分波尔MoMLV与两栖病毒4070A的区域(14)。PA317细胞和载体中的序列与辅助病毒对齐,以显示其起源。垂直交叉阴影框显示了PA317细胞中病毒DNA与逆转录病毒载体之间的59-bp同源区域,其中同源重组事件可以将功能性5′逆转录病毒序列添加到PA317中缺陷的辅助病毒DNA中。当ψ+的3′端存在额外的同源性时,该区域的重组将添加带有终止密码子的5′病毒序列,其中堵住起始密码子应该是,因此是非功能性的。3′端不存在同源重叠。缩写分别为PBS−和PBS+,负链和正链引物结合位点;pA,多聚腺苷化信号;SV40,来自SV40的晚期多聚腺苷化信号;LTR,逆转录病毒长末端重复序列;ΔLTR,LTR,5′端缺失;ψ+,逆转录病毒包装信号。箭头指示转录起始位点和转录方向。
图3
图3。改良逆转录病毒载体
箭头表示转录起始位点和转录方向,pA表示多聚腺苷酸化信号。显示了cDNA插入的独特克隆位点。所有载体中的序列由5′LTR和来自MoMSV的通过541碱基的序列、来自MoMLV的566-1038碱基的序列、非逆转录病毒序列和来自MoMLV的通过3′LTR的7774碱基的序列组成。逆转录病毒序列号如所述(21)。这个序列来自转座子Tn5(3),蛋白质编码区为交叉阴影。插入前去除细菌启动子。SV表示Pvu公司II至后面的SV40中包含早期启动子的III片段(8,20)。CMV表示余额我要圣诞节包含直接早期启动子的人巨细胞病毒III片段(5)。独特巴姆HI站点将SV40和CMV启动子与LNSX和LNCX中的基因序列,允许用其他序列简单替换这些启动子。

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引用人

工具书类

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