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.2015年8月3日；125(8):3147-62.
doi:10.1172/JCI81321。 Epub 2015年7月27日。

巨噬细胞介导急性心肌梗死心肌保护细胞后处理

杰弗里·德·库托, 刘伟新, 埃利尼·泽利欧, 孙白明, 努珀·麦加, 金泽秀明, Moshe Arditi公司, 爱德华多·马尔班

巨噬细胞介导急性心肌梗死心肌保护细胞后处理

杰弗里·德·库托等。 临床研究杂志. .

摘要

心脏缺血损伤会引发炎症级联反应，修复损伤并加剧疤痕组织的形成。心脏球衍生细胞（CDC）是一种从心脏活检中体外衍生出来的干细胞样细胞群；它们在急性心肌梗死（MI）中提供心脏保护和再生。虽然CDC在慢性环境中的再生作用已被广泛研究，但对于CDC如何提供被称为细胞后处理的心脏保护过程，人们知之甚少。在这里，我们使用缺血/再灌注（IR）损伤诱导MI的体内大鼠模型和体外共培养实验来研究CDC如何保护应激心肌细胞。与对照组动物相比，在IR后20分钟接受CDCs的动物在48小时测量时梗死面积减小。CDCs改变了缺血损伤后心肌白细胞的数量。具体来说，CDCs的引入减少了CD68+巨噬细胞的数量，并且这些CDCs分泌的因子使巨噬细胞极化为独特的心脏保护表型，而不是M1或M2。用氯膦酸钠系统性消耗巨噬细胞可消除CDC介导的心脏保护作用。通过体外共培养实验和IR后过继转移的大鼠模型，我们确定CDC条件巨噬细胞可减弱心肌细胞凋亡并缩小梗死面积，从而重申CDC治疗的有益效果。总之，我们的数据表明，CDC通过极化心脏内的效应巨噬细胞群来限制急性损伤。

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数字

图10
图10。M的收养转让疾病预防控制中心再灌注20分钟后，巨噬细胞可缩小梗死面积。
(A类)输液方案示意图。在给予PBS或DiI标记的M1、M2或M之前，大鼠经历45分钟的缺血，然后再灌注20分钟疾病预防控制中心巨噬细胞。IR损伤48小时后进行分析。(B类)经PBS或M1、M2或M处理的TTC染色心脏的代表性图像疾病预防控制中心巨噬细胞。(C)TTC染色心脏评估的显示梗死块和左室存活块百分比的汇总数据(n个=每组4-8只大鼠）。(D类)梗死边缘区DiI-标记巨噬细胞定位的代表性图像；在非损伤区域未观察到DiI标记的巨噬细胞。比例尺：50μm。图表描述了平均值±SEM。使用单向方差分析和Tukey多重比较测试确定统计显著性*P（P）< 0.05.
图9
图9。M的共培养疾病预防控制中心具有氧化应激NRVMs的巨噬细胞在体外保持心肌细胞活性。
(A类)体外方案示意图。用50μM H对NRVM施加压力2O（运行）2在15分钟内，将无血清培养基替换20分钟（以模拟再灌注），然后用DiO-标记M1、M2或M疾病预防控制中心巨噬细胞被引入NRVM。6小时后，收集细胞进行分析(n个=每组3人）。(B类)共培养细胞（M1、M2或M）的免疫印迹疾病预防控制中心带有H的巨噬细胞2O（运行）2-治疗后的NRVM）和NRVM阳性和阴性对照（有和没有H2O（运行）2分别）。此斑点的通道在同一凝胶上运行，但不连续。(C)M1、M2或M的TUNEL染色（红色）共培养物的代表性图像疾病预防控制中心巨噬细胞（绿色）和NRVM（白色）。比例尺：50μm。(D类)TUNEL的汇总定量分析+心肌细胞（CM）和来自M1、M2和M的活性有核心肌细胞疾病预防控制中心共同文化。(E类)汇总数据表明M1共培养中巨噬细胞数量增加，TUNEL增加+M2共培养物中的巨噬细胞。图表描述了平均值±SEM。使用单向方差分析和Tukey多重比较测试确定统计显著性*P（P）< 0.05.
图8
图8。BMDM向M1、M2或M的极化疾病预防控制中心体外表型赋予不同的表面标记表达和吞噬能力。
(A类和B类)流式细胞术检测的表面标记显示，M细胞上CD68、CD80和CD86表达减少，大小减小（正向散射）疾病预防控制中心巨噬细胞(n个=每组3人）。(C和D类)巨噬细胞群体中FITC荧光珠摄取的代表性流式细胞术直方图和混合定量分析(n个=每组3人）。图表描述了平均值±SEM。使用单向方差分析和Tukey多重比较测试确定统计显著性*P（P）< 0.05.
图7
图7。BMDM向M1、M2或M的极化疾病预防控制中心体外表型赋予不同的细胞因子基因表达和蛋白标记表达。
(A类)巨噬细胞极化为M1（IFN-γ/LPS）、M2（IL-4/IL-13）或M的典型相比较图像疾病预防控制中心（Transwell）表型。比例尺：100μm。(B类)巨噬细胞向M1、M2和M极化的基因表达谱疾病预防控制中心表型(n个=每组3人）。这些数据揭示了M1标记的经典上调(2个)和M2(精氨酸1,Pparg公司,Nfkb1号机组，以及Tgfb1型)巨噬细胞，但在M疾病预防控制中心(Il10号机组和Il4ra公司)巨噬细胞。(C和D类)描述M1和M2巨噬细胞与M的标记物的蛋白表达疾病预防控制中心巨噬细胞(n个=每组3人）。图表描述了平均值±SEM。使用单向方差分析和Tukey多重比较测试确定统计显著性*P（P）< 0.05.
图6
图6。从CDC治疗动物中分离出的心脏巨噬细胞具有独特的细胞因子特征。
(A类)CD68的代表性图像和混合定量分析+MI后48小时，从PBS和CDC处理的动物心脏组织中分离出巨噬细胞。免疫组织化学显示，分离出心脏巨噬细胞后，纯度>85%的CD68阳性(n个=每组3只大鼠）。比例尺：10μm。(B类)48小时后从梗死心脏分离的心肌巨噬细胞的基因表达谱。CDC治疗的心脏具有M1降低的心脏巨噬细胞(天花,2个,伊尔1a，以及伊尔1b)，但M2无变化(精氨酸1,Tgfb1型,Il10号机组，以及Pparg公司)巨噬细胞基因表达。图表描述了平均值±SEM。使用双向方差分析（ANOVA）以及Bonferroni或Sidak的多重比较测试来确定统计显著性*P（P）< 0.05. 巨噬细胞。
图5
图5。内源性巨噬细胞的系统性耗竭降低了CDC治疗的疗效。
(A类)使用Cl描述巨噬细胞耗竭方案的示意图2MDP脂质体。给动物静脉输注氯2在IR前1天和IR后1天评估MDP，然后在IR后48小时评估MDP(B类)CD45的代表性流式细胞仪图+CD68型+Cl脾脏和血液中的数量2MDP和PBS治疗的动物(n个=每组5只大鼠）。(C)来自Cl的典型TTC染色心脏2胰岛素抵抗48小时后，MDP和PBS治疗动物(D类)氯膦酸钠治疗导致梗死面积和(E类)与未经治疗的对照组相比，经PBS和CDC治疗的动物的心脏射血分数降低(n个=每组4-7只大鼠）。在Cl之前进行缺血前测量2MDP治疗。图表描述了平均值±SEM。使用Student’st吨测试和单因素方差分析，然后是Bonferroni的多重比较测试*P（P）< 0.05.
图4
图4。CDC治疗的动物CD68降低+IR后48小时巨噬细胞群。
(A类)亚群分析前梗死心肌内白细胞识别的门控策略。CD45型+细胞首次鉴定（FSC-A/CD45+)，然后排除死细胞（DAPI–). (B类)从梗死大鼠组织收集的流式细胞术数据显示CD68降低+CDC和PBS治疗心脏的人群(n个=每组4只大鼠）。(C)IR后2、6和48小时CDC和PBS处理动物梗死区内心脏的免疫组织化学染色(n个=每组4只大鼠）。比例尺：50μm。(D类)来自CD68的汇集数据+梗死组织中的细胞CIR后2、6和48小时(n个=每组4只大鼠）。(E类)IR后48小时血清中细胞因子MCP-1（CCL2）和IL-4的浓度(n个=每组4-8只大鼠）。图表描述了平均值±SEM。使用Student’st吨测试和双向方差分析，然后是Bonferroni的多重比较测试*P（P）< 0.05.
图3
图3。IR后输注CDC可减少心肌细胞死亡并改变组织促炎细胞因子的表达。
(A类)输液和组织采集方案示意图。在PBS或CDC给药之前，动物经历了45分钟的缺血，然后再灌注20分钟。在IR损伤2、6或48小时后，处死动物进行分析。(B类)经PBS或CDC治疗的心脏正常（N）、边缘（B）和梗死（I）区的裂解caspase-3、caspase-2、RIP1和GAPDH的代表性蛋白免疫印迹。(C)来自免疫印迹的汇总数据，包括B类显示CDC治疗心脏梗死区caspase-3激活和RIP1表达水平降低(n个=每组3-4只大鼠）。(D类)PBS和CDC治疗心脏梗死区TUNEL染色心脏组织的代表性图像。比例尺：50μm。(E类)心肌细胞定量评估D类在类似的图像中，CDC治疗的心脏在所有时间点的TUNEL阳性率降低(n个=每组3-4只大鼠）。(F类)在用CDCs治疗的心脏梗死区，MMP8和CXCL7的蛋白细胞因子表达升高(n个=每组3-4只大鼠）。图表描述了平均值±SEM。使用单向或双向方差分析以及Bonferroni的多重比较测试来确定统计显著性*P（P）< 0.05.
图2
图2。干细胞的急性心脏保护作用在IR后持续至少2周。
(A类)输液方案示意图。在输注CDCs或PBS对照之前，大鼠经历45分钟的缺血，然后再灌注20分钟。对动物进行为期2周的随访。(B类)PBS和CDC治疗动物在舒张和收缩期间左心室的典型超声心动图长轴图像。(C)PBS和CDC治疗动物梗死心脏的Masson三色染色。比例尺：2 mm(D类)Masson三色染色心脏的汇总数据C显示CDC治疗动物的梗死变薄较少(n个=每组4-5只大鼠）。(E类)对侧梗死区心肌细胞的免疫组织化学染色。细胞大小由具有中央定位细胞核（DAPI）的心肌细胞（α-肌动蛋白加小麦凝集素[WGA]）测定。比例尺：50μm。(F类)来自分析的汇总数据E类描述CDC治疗动物心肌细胞大小的减少(n个=每组5-7只大鼠）。图表描述了平均值±SEM。使用Student’st吨测试和双向方差分析，然后是Bonferroni的多重比较测试*P（P）< 0.05.
图1
图1。CDCs在再灌注20分钟内为缺血心肌提供心脏保护。
(A类)输液方案示意图。大鼠缺血45分钟，然后在输注CDCs（5×10）之前再灌注20分钟或120分钟（延迟注射）5每100μl的细胞数）或PBS控制（100μl）进入主动脉交叉钳夹期间的LV腔。48小时后对动物进行评估。(B类)通过超声心动图测量，CDC治疗动物在48小时时的射血分数显著保持，输注延迟20分钟，但不是120分钟(n个=每组4-5只大鼠）。FAC，分数变化面积。(C)IR损伤后48小时，动物的典型TTC染色心脏。(D类)TTC染色心脏的定量测量，表示为梗死重量、梗死重量、左室重量和左室存活重量的百分比(n个=每组5-6只大鼠）。(E类)PBS或CDCs（5×10）治疗48小时后大鼠分离的龙胆紫和TTC染色心脏的代表性图像5)和(F类)TTC染色心脏AAR（黑线）、梗死面积（灰线）和LV面积的定量分析(n个=每组6-7只大鼠）。(G公司)当分析回归的均匀性时，梗死质量百分比与AAR的线性回归显示无显著交互作用（F=0.23，P（P）=0.64），但校正后梗死块平均值之间的差异（F=84.5，P（P）<0.001）通过协方差分析。图表描述了平均值±SEM。使用单向方差分析和Bonferroni的多重比较测试确定统计显著性*P（P）< 0.05.
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    1. Entman ML等。早期心肌缺血过程中的炎症。FASEB J.1991；5(11):2529–2537.-公共医学
    1. Jordan JE，Zhao ZQ，Vinten-Johansen J.中性粒细胞在心肌缺血再灌注损伤中的作用。1999年心血管研究；43(4):860–878. doi:10.1016/S0008-6363（99）00187-X。-内政部-公共医学
    1. Simpson PJ，Lucchesi BR。自由基与心肌缺血再灌注损伤。实验室临床医学杂志，1987；110(1):13–30.-公共医学

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