跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2015年7月21日；11（7）：e1005386。
doi:10.1371/journal.pgen.1005386。 eCollection 2015年7月。

在一个患有非综合征性听力障碍的丹麦大家族中发现了一个新的携带CD164功能性无义突变的位点

Mette Nyegaard公司 1, Nanna D Rendtorff公司 2, 莫顿·S·尼尔森 三, 托马斯·科里登 三, Ditte Demontis公司 1, 安娜·斯塔纳夫斯卡 1, 安妮·海德曼 1, 安娜丽莎·布尼埃罗 4, 弗朗西斯科·尼奥拉 5, 迈克尔·托弗加德 6, 苏珊·米·利尔 7, 瓦西姆·艾哈迈德 8, 弗里德里克·普·威克曼 9, 克里斯汀·彼得森 10, 多尔特·格吕格 10, 雅普·奥斯特里克 11, 汉尼·克莱默 12, 尼尔斯·托梅鲁普 13, 莫滕·弗罗丁 5, Karen P钢铁公司 4, Lisbeth Tranebjrg 2, 安德斯·德·伯格鲁 1
附属公司

在一个非综合征性听力障碍丹麦大家庭中发现的一个新的功能性CD164无义突变位点

Mette Nyegaard公司等人。 公共科学图书馆-基因. .

摘要

非综合征性听力损伤（NSHI）是一种高度异质性疾病，有80多个已知的致病基因。然而，在临床环境中，大量NSHI家族的病因不明，这表明还有更多的基因有待确定。在本研究中，我们使用基于SNP的连锁分析和跟踪微卫星标记，在一个显性遗传NSHI的丹麦大家族中，在染色体6q15-21（LOD 5.1）上鉴定了一个新的位点（DFNA66）。通过位点特异性捕获和下一代测序，我们在CD164中发现了c.574C>T杂合无义突变（p.R192*）。该基因编码一种197个氨基酸的跨膜唾液酸幻觉（称为endolyn、MUC-24或CD164），广泛表达并参与细胞粘附和迁移。该突变与表型分离，在1200名丹麦对照个体和具有全基因组和外显子序列数据的数据库中均不存在。突变的预测效果是截断CD164细胞质尾部的最后六个C末端残基，包括一个高度保守的典型排序基序（YXXФ）。在受影响个体的全血中，我们通过RT-PCR发现野生型和突变的转录本，这表明突变转录本可以逃避无意义介导的衰变。HEK细胞的功能研究表明，截短的蛋白几乎完全保留在质膜上，而野生型蛋白主要针对溶酶体内隔间，这意味着内吞失败可能是一种疾病机制。在小鼠耳中，我们发现CD164在Corti器官的内外毛细胞以及耳蜗导管的其他位置表达。总之，我们已经确定了一个位于染色体6q15-21上的新的DFNA基因座，并暗示CD164是一个新的听力损伤基因。

PubMed免责声明

利益冲突声明

提交人声明，不存在相互竞争的利益。

数字

图1
图1。显性遗传非综合征性听力损伤（NSHI）新基因座的谱系、听力图和连锁峰。
（A） 丹麦一个中等听力障碍大家庭的家谱，先证者用箭头表示。除了那些有四位数ID的人外，所有人都可以获得DNACD164型突变c.574C>T（p.R192*）列在每个个体下面。个人（IV-21）的表型被设置为未知（以灰色显示），因为他听力损失的来源不确定。（B） 受影响家庭成员（个体IV-5）的代表性左右耳声像图。中频比低频和高频受影响更严重，称之为盆状或饼干状听力损失。显示每次分析时的个人年龄。（C） 在初始SNP阵列分析中发现了与染色体6q15-21的全基因组显著连锁，包括11个个体（图1A中黄色部分所示）。（D） 中c.574C>T突变的色谱图CD164型与健康对照个体相比，受影响家庭成员的第6外显子。术语参考RefSeq NM_006016.4(CD164型亚型1），核苷酸数+1为起始密码子ATG的A。
图2
图2。的等轴测图CD164型以及C末端YHTL排序基序的进化保守性。
（A） 在CD164的三种膜结合亚型使用的第6外显子中发现了无义突变。（B） CD164亚型1的示意图。该蛋白质包含两个由富含半胱氨酸的结构域分隔的粘蛋白样结构域[29]。通过NetOGlyc 4.0服务器预测潜在N-糖基化位点和预测的O-糖基化位置(http://www.cbs.dtu.dk/services/NetOGlyc网站/). 通过SMART数据库（SMART.embl-heidelberg.de）预测跨膜区的位置。（C） CD164不同物种氨基酸序列的比对显示了C末端区域的高度进化保守性，包括YHTL排序基序，该基序因无义突变而被删除。异构体4和1是在广泛的组织中最主要表达的异构体。可从GTEx门户访问亚型信息(http://www.gtexport.org/home/).
图3
图3。荧光蛋白融合到含有R192*突变的CD164 C末端结构域的膜定位。
将表达mCherry融合到野生型CD164的C末端区域（CTR）的质粒和eGFP融合到CD164-R192*的CTR或反之亦然.转染48小时后，使用共焦激光扫描显微镜，使用63×水浸物镜对细胞进行实时成像。（A） 构建物示意图（B）野生型融合蛋白（mCherry-CD164-WT-CTR）（红色）位于细胞内，而截短的融合蛋白（eGFP-CD164-R192*-CTR。（C） 当反转mCherry和eGFP（颜色交换）时，发现了相同的结果。
图4
图4。CD164 R192*内部化失败。
将稳定过度表达野生型CD164（CD164 WT）（A，C，E）和截短型CD164（CD164R192*）（B，D，F）的HEK细胞接种在载玻片上，并与抗CD164抗体在冰上孵育。接下来，将细胞固定（T0，0分钟）或在37°C的无抗体完全培养基中分别培养10（T10）和30（T30）分钟，然后固定。最后，使用Alexa Fluor 488标记的二级抗体（绿色）观察CD164。细胞核DNA用DAPI（蓝色）染色。使用40×油浸物镜在共焦激光扫描显微镜上进行成像。比例尺=6μm。
图5
图5。CD164和CD164 R192*形成异二聚体。
用空载体CD164和CD164 R192*瞬时转染HEK-293细胞，未标记或含有各种表位标签，并以各种组合进行转染。2天后，将细胞（A）在SDS-PAGE样品缓冲液中裂解，并使用抗人CD164抗体通过免疫印迹进行分析，或（B）在免疫沉淀缓冲液中裂解，然后使用指示的抗HA抗体从细胞裂解物中免疫沉淀CD164或CD164 R192*。使用所示抗体通过免疫印迹法分析免疫沉淀或免疫沉淀前裂解物的等分样品。在还原条件下进行SDS-PAGE。星号表示非特定带。
图6
图6。全长野生型-FLAG和R192*-HA标记CD164的内化。
共转染的HEK细胞表达带有FLAG表位（FLAG-CD164-WT）标记的野生型CD164和带有HA表位（HA-CD164-R192*）标记的截短内切层，将其接种在载玻片上。在用抗FLAG和抗HA抗体在冰上孵育后，细胞要么固定（T0，0分钟），要么在无抗体的完全培养基中分别孵育10（T10）和30（T30）分钟，然后固定。分别使用Alexa Fluor 488标记的第二抗体（绿色）和Alexa Fluor 568标记的第二抗体（红色）观察FLAG-CD164-WT（A，D，G）和HA-CD164-R192*（B，E，H）。细胞核DNA用DAPI（蓝色）染色。合并的图像如（C、F、I）所示。使用40×油浸物镜在共焦激光扫描显微镜上进行成像。比例尺=6μm。
图7
图7。CD164型c.574C>T（p.R192*）无义突变的转录本逃避NMD。
（A） 患者外周血序列cDNA的BLAT比对（在“您的BLAT搜索序列”轨迹中标记为“CD164转录本”）。该转录本不包含内含子序列，表明该序列来自mRNA。（B）c.574C>T突变的色谱图显示两个等位基因在外周血细胞中的表达相等，表明无义突变不会通过NMD降解
图8
图8。出生后第五天小鼠耳蜗中Cd164的表达。
免疫组织化学显示cd164在耳蜗神经元（A和C中的箭头）、Corti器官的内毛细胞（ihc）和外毛细胞（ohc）（C中的黑色箭头）、Kolliker器官的细胞（C中的红色箭头）、螺旋突起后侧壁的细胞（A中的开放箭头）中表达（棕色）血管纹（B）。比例尺：A:10μm，B，C:5μm。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

  • 常染色体显性非综合征性聋（DFNA）：一项综合叙述性综述。
    AldèM、Cantarella G、Zanetti D、Pignataro L、La Mantia I、Maiolino L、Ferlito S、Di Mauro P、Cocuzza S、Lechien JR、Iannella G、Simon F、Maniaci A。 AldèM等人。 生物医学。2023年6月1日；11(6):1616. doi:10.3390/生物医学11061616。 生物医学。2023 PMID：37371710 免费PMC文章。 审查。
  • 在疑似遗传病因的未定义临床条件下进行全外显子组测序的陷阱。
    Moresco G、Rondinone O、Mauri A、Costanza J、Santaniello C、Colapietro P、Micaglio E、Marfia G、Pesenti C、Grilli F、Rinaldi B、Prada E、Scuvera G、Villa R、Bedeschi MF、Miozzo MR、Milani D、Fontana L。 Moresco G等人。 基因基因组学。2023年5月；45(5):637-655. doi:10.1007/s13258-022-01341-x。电子出版2022年12月1日。 基因基因组学。2023 PMID：36454368
  • 更新CD164和LMX1A基因以加强其在常染色体显性遗传性听力损失中的致病作用。
    OziÉbło D、Lee SY、Leja ML、Sarosiak A、Bałdyga N、Skarżyński H、Kim y、Han JH、Yoo HS、Park MH、Choi BY、ołdak M。 Oziębło D等人。 人类遗传学。2022年4月；141(3-4):445-453. doi:10.1007/s00439-022-02443-y.电子出版2022年3月7日。 人类遗传学。2022 PMID：35254497
  • 人巨细胞病毒和HIV介导的巨噬细胞质膜重塑的综合分析。
    Businger R、Kivimäki S、Simeonov S、Vavoras Syrigos G、Pohlmann J、Bolz M、Müller P、Codrea MC、Templin C、Messerle M、Hamprecht K、Schäffer TE、Nahnsen S、Schindler M。 Businger R等人。 mBio公司。2021年8月31日；12（4）：e0177021。doi:10.1128/mBio.01770-21。Epub 2021年8月17日。 mBio公司。2021 PMID：34399625 免费PMC文章。
  • 暴露于随机定位机的人乳腺癌细胞生长和局部粘附分子的变化。
    Sahana J、Corydon TJ、Wehland M、Krüger M、Kopp S、Melnik D、Kahlert S、Relja B、Infanger M、Grimm D。 Sahana J等人。 前细胞发育生物学。2021年6月30日；9:672098. doi:10.3389/fcell.2021.672098。eCollection 2021年。 前细胞发育生物学。2021 PMID：34277614 免费PMC文章。
查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Hoefsloot LH、Feenstra I、Kunst HP、Kremer H（2014）《听力损伤的基因型-表型相关性：管理方法》。临床遗传学85:514–523。10.1111克.12339-内政部-公共医学
    1. Dror AA，Avraham KB（2009）《听力损失：遗传学和细胞生物学揭示的机制》。《基因年鉴》43:411-437。10.1146/anurev-genet-102108-134135-内政部-公共医学
    1. Brownstein Z，Bhonker Y，Avraham KB（2012）高通量测序，解读耳聋的遗传异质性。基因组生物学13:245 10.1186/gb-2012-13-5-245-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Rabbani B，Tekin M，Mahdieh N（2014）医学遗传学中全基因组测序的前景。《人类遗传学杂志》59:5-15。2014年10月18日/jhg.2013.14-内政部-公共医学
    1. Lenz DR，Avraham KB（2011）遗传性听力损失：从人类突变到机制。Hear Res 281:3–10。2016年10月10日/j.heares.2011.05.021-内政部-公共医学

出版物类型

补充概念