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.2015年3月；29(3):1043-55.
doi:10.1096/fj.14-259515。 Epub 2014年12月2日。

共生微生物群具有肝脏保护作用，可预防小鼠肝纤维化

玛格达莱娜·玛扎戈娃 1, 王丽瑞 1, 安德鲁·安福拉 1, 马克斯·威斯米勒 1, 斯科特·莱斯利 1, 宫本由纪子 1, 拉尔斯·埃克曼 1, 苏拉杰·杜干纳 1, Wimal Pathmasiri公司 1, 苏珊·萨姆纳 1, 卡罗琳·韦斯特沃特 1, 大卫·A·布伦纳 1, 伯恩德·施纳布尔 2
附属公司

共生菌群具有肝保护作用并可预防小鼠肝纤维化

马格达莱娜·马扎戈娃等。 美国财务会计准则委员会J. 2015年3月.

摘要

细菌及其产物穿过肠道屏障的易位在肝病患者中很常见，有证据表明实验性肝纤维化依赖于细菌易位。我们研究的目的是研究常规和无菌（GF）C57BL/6小鼠的肝纤维化。通过在饮用水中给予硫代乙酰胺（TAA）21周或通过反复腹膜内注射四氯化碳（CCl4）来诱导慢性肝损伤。与常规小鼠相比，GF小鼠的肝纤维化程度增加。肝细胞表现出更多的毒素诱导的氧化应激和细胞死亡。这伴随着肝星状细胞的激活增加，但肝脏炎症介质没有显著差异。类似地，使用Myd88/Trif缺陷小鼠的基因模型（缺乏下游先天免疫信号）比野生型小鼠具有更严重的纤维化。分离的Myd88/Trif缺陷肝细胞在培养中更容易受到毒素诱导的细胞死亡的影响。总之，共生菌群可预防小鼠慢性肝损伤后的纤维化。这是首次描述共生菌群在维持肝内环境稳定和预防肝纤维化方面的有益作用的研究。

关键词：细菌移位；先天免疫系统；微生物组。

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数字

图1。
图1。
慢性肝损伤导致GF小鼠肝纤维化加重。GF和常规小鼠（Conv）在饮用水中用TAA处理21周。作为对照，GF和常规小鼠单独作为车辆（veh）饮用水。A类)肝胶原蛋白α1（I）（Col1a1）mRNA。B类,C类)胶原沉积通过天狼星红染色进行评估，并通过图像分析进行定量。图中显示了用天狼星红染色的代表性截面。D类,E类)肝脏SMA和Cyp2e1蛋白的蛋白质印迹。F类,G公司)细胞因子和趋化因子的肝脏基因表达*P（P）< 0.05; **P（P）< 0.01.
图2。
图2。
TAA给药后GF小鼠肝脏反应性氧化应激增加和肝细胞死亡。A类)对常规（Conv）和GF、载体和TAA处理小鼠的肝脏切片进行4-HNE免疫组化染色。显示了具有代表性的部分。B类)用Gadd153（CHOP）和微管蛋白抗体进行免疫印迹分析肝裂解物。使用ImageJ量化条带的强度，并将Gadd153蛋白水平归一化为微管蛋白水平作为负荷控制。C类)使用原位细胞死亡检测试剂盒（Roche）对肝切片进行染色以检测死亡的肝细胞。显示了具有代表性的部分。D类)对于阳性染色的细胞，对每个载玻片的40个高功率场（HPF）进行计数*P（P）< 0.05.
图3。
图3。
CCl对GF小鼠肝纤维化的增强作用4注射。用CCl治疗GF和常规（Conv）小鼠4总共12次。作为对照，GF和常规小鼠接受油（载体）注射。A类)肝胶原蛋白α1（I）（Col1a1）mRNA。B类,C类)胶原沉积通过天狼星红染色进行评估，并通过图像分析进行定量。图中显示了用天狼星红染色的代表性截面。D类,E类)肝脏SMA和Cyp2e1蛋白的蛋白质印迹。F类,G公司)细胞因子和趋化因子的肝脏基因表达。(H（H）)血浆ALT水平*P（P）≤ 0.05; **P（P）< 0.01.
图4。
图4。
Myd88/Trif缺陷小鼠更容易受到毒素诱导的肝纤维化的影响。C57BL/6和Myd88−/−/特里夫LPS2/LPS2给小鼠注射油作为对照或CCl4总共12次。A类)肝胶原蛋白α1（I）（Col1a1）mRNA。B类,C类)胶原沉积通过天狼星红染色进行评估，并通过图像分析进行定量。图中显示了用天狼星红染色的代表性截面。D类,E类)肝脏SMA和Cyp2e1蛋白的蛋白质印迹。F类,G公司)细胞因子和趋化因子的肝脏基因表达。H（H）)血浆ALT水平。WT，野生型*P（P）< 0.05.
图5。
图5。
毒素诱导的细胞死亡在培养的Myd88/Trif缺陷肝细胞中更高。从C57BL/6和Myd88中分离出非实质和实质肝细胞−/−/特里夫LPS2/LPS2老鼠。A类)原代肝星状细胞（HSC）培养5天。纤维化基因（SMA、Col1a1和TGF）的表达-β1） 用定量PCR分析增殖标记物（PCNA）和Ccl2。显示了4种不同肝星状细胞分离的平均值。B类)在用LPS（100 ng/ml）或poly（I:C）（10μg/ml）持续3 h。LPS和poly（I:C）诱导IL-1的表达β和TNF-α用定量PCR分析。显示了3种不同Kupffer细胞隔离的平均值。C类)用LPS（100 ng/ml）或poly（I:C）（10μg/ml）持续6小时。IL-1β和TNF-α用定量PCR分析。显示了3种不同Kupffer细胞隔离的平均值。D类)用CCl处理小鼠原代肝细胞4（0.5 mM）持续24小时CCl4-通过测定上清液中的ALT和测定细胞死亡率来评估诱导的细胞死亡。显示了6种不同肝细胞分离的平均值*P（P）< 0.05; **P（P）< 0.01; ***P（P）< 0.001.
图6。
图6。
GF和Myd88/Trif缺陷肝细胞中Cyp26a1基因的表达。A类)GF和常规小鼠（Conv）在饮用水中用TAA处理21周。作为对照，GF和常规小鼠单独饮用饮用水作为载体。肝脏Cyp26a1 mRNA表达。B类)用CCl治疗GF和常规（Conv）小鼠4总共12次。作为对照，GF和常规小鼠接受油（载体）注射。肝脏Cyp26a1 mRNA表达。C类)从C57BL/6和Myd88中分离出肝细胞−/−/特里夫LPS2/LPS2小鼠并用CCl处理4（1mM）持续24小时。Cyp26A1mRNA表达。显示了6种不同肝细胞分离的平均值。D类)液相色谱-质谱/质谱用于定量GF和传统小鼠给药载体或TAA血浆中IPA的水平。E类)粪便中的梭状芽孢杆菌簇I通过定量PCR测定*P（P）< 0.05; **P（P）< 0.01.
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