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.2015年1月；16(1):67-74.
doi:10.1038/ni.3046。 Epub 2014年11月24日。

甲基转移酶Setdb2介导病毒诱导的细菌重叠感染敏感性

克里斯托弗·施利厄 1, 伊丽莎白·K·弗林 # 2, 博扬·维拉戈斯 # 1, 乌多丘库·里奇森 # 1, 萨维塔·斯瓦米南坦 三, 贝里斯拉夫·博斯尼亚克 4, 丽莎·鲍尔 1, 理查德·K·坎达萨米 1, 伊莎贝尔·M·格里斯哈默 1, 林赛·科萨克 1, 弗兰克·施密茨 三, 弗拉基米尔·利特瓦克 5, 詹姆斯·西森斯 三, 亚历山大·勒彻 1, 阿纳尼亚·巴塔查里亚 1, 克塞尼亚·卡米纳 1, 安娜·L·特里维特 2, 利诺·特萨罗洛 2, 伊尔迪科·梅斯特里 6, 阿纳斯塔西亚·赫拉迪克 1 7, 多伦·默克尔 8 9, 斯特凡·库比切克 1, 西尔维娅·克纳普 1 7, 米歇尔·爱泼斯坦 4, 大卫·E·赛默 # 2 10, 德雷姆 # 三, 安德烈亚斯·伯塔勒 1
附属公司

甲基转移酶Setdb2介导病毒诱导的细菌重叠感染敏感性

克里斯托弗·施利厄等。 自然免疫. 2015年1月.

摘要

免疫反应受到严格控制，以确保有效清除病原体，同时避免组织损伤。在这里，我们报道Setdb2是流感病毒感染期间诱导的唯一蛋白赖氨酸甲基转移酶。Setdb2的表达依赖于I型干扰素的信号传导，Setdb2抑制编码中性粒细胞引诱剂CXCL1和其他转录因子NF-κB靶基因的基因表达。这与Setdb2在Cxcl1启动子上的占据相一致，在没有Setdb2的情况下，组蛋白H3 Lys9（H3K9me3）的三甲基化减少。带有Setdb2低形态基因陷阱结构的小鼠在无菌性肺部炎症期间表现出中性粒细胞浸润增加，并且在感染流感病毒后对细菌重叠感染不太敏感。这表明Setdb2介导的I型干扰素和NF-κB通路之间的调节性串扰是病毒诱导的细菌重叠感染易感性的重要机制。

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数字

图1
图1
Setdb2是由流感病毒感染和TLR刺激以IFNAR1依赖的方式诱导的。(一)WT小鼠经鼻感染流感病毒或模拟治疗。18小时后，使用H1N1特异性抗体对肺切片进行染色。H1N1感染地区用箭头表示。比例尺，250μm。显示了3只小鼠的代表性图像。(b条)与未感染对照组（UI）相比，流感病毒感染（PR8）时肺中蛋白赖氨酸甲基转移酶（PKMT）的表达谱（n=6，2个实验独立合并）。图中显示了分别与未感染小鼠相比（左）对数2倍变化的热图图（右）稳健多阵列平均值（RMA）。(c（c）)重量，伊夫纳1–/–,Irf7型–/–和统计1–/–小鼠经鼻感染流感病毒（PR8）或模拟治疗（Ctrl）。18小时后收集肺组织，通过实时PCR检测Setdb2的表达。散射斑点表示Setdb2（设置db2）与未感染WT小鼠相比，单个小鼠的表达。数据点来自两个独立实验。(d-f型)BMDM来自伊夫纳–/–和WT小鼠未经治疗（Ctrl）(d日)感染流感病毒（PR8，MOI 10）(e（电子）)用干扰素β、干扰素γ或干扰素λ刺激，或(（f）)用指定的TLR激动剂PAM3、poly（I:C）和LPS刺激。Setdb2（设置db2）mRNA表达在刺激后8小时通过实时PCR定量，并显示为与未经处理的WT细胞相比的折叠诱导。显示了两个类似独立实验中的一个的生物学三倍。对于蛋白质检测，分析Setdb2的表达(d日)分别8小时(e、 （f）)使用Setdb2特异性单抗克隆7H7F11进行免疫印迹刺激24小时后。干扰素刺激蛋白Zbp1和肌动蛋白的特异性抗体分别用作诱导和负载的对照。(d、 e（电子）)免疫印迹显示了两个典型实验中的一个实验结果。(立方英尺)通过非配对t检验计算统计显著性。显著的p值显示如下：*p≤0.05，**p≤0.01，***p≤0.001，****p≤0.0001。
图2
图2
设置db2燃气轮机/燃气轮机巨噬细胞显示包括CXCL1在内的NF-κB靶基因亚群的表达增加。(一)脾脏和肺组织以及骨髓源性巨噬细胞（BMDM）Setdb2（设置db2）燃气轮机/燃气轮机使用Setdb2特异性单克隆抗体7H7F11通过免疫印迹分析Setdb2的表达。肌动蛋白作为负载控制。(b条)用poly（I:C）处理BMDM 0、2和8小时，并使用每种条件的生物三倍体通过RNAseq进行表达谱分析。WT和WT之间（左）差异基因表达的热图插图Setdb2（设置db2）燃气轮机/燃气轮机所有蛋白编码基因的BMDM，分别（右）显示了与各自基因型的未处理BMDM相比，在2小时和8小时的表达谱。NF-κB靶基因显示为灰色方框。来自WT或Setdb2（设置db2）燃气轮机/燃气轮机小鼠要么未经治疗（Ctrl）(c、 d日)用指定的TLR激动剂和IFN-β或(e、 （f）)感染流感病毒（PR8，MOI 10）。(c、 e（电子）)Cxcl1公司刺激2小时后通过实时PCR定量mRNA表达。(d、 （f）)刺激8小时后，用ELISA测定CXCL1分泌量。显示了两个类似独立实验中的一个的生物学三倍。(立方英尺)通过非配对t检验计算统计显著性。显著的p值显示如下：*p≤0.05，**p≤0.01，***p≤0.001，****p≤0.0001。
图3
图3
Setdb2绑定到Cxcl1公司启动子区，与H3K9三甲基化相关。(a-c公司)WT或设置db2燃气轮机/燃气轮机在准备细胞进行染色质免疫沉淀（ChIP）之前，用poly（I:C）刺激BMDM 2小时或不处理（Ctrl）。通过实时PCR定量显示启动子元件的特异性富集，即Cxcl1启动子（prom）和Cxcl 1外显子1（ex1）。数据被描述为从两个独立实验中重复测量的归一化恢复到WT中的最高值(一,b条)，和一个实验(c（c）). 分别使用一个实验中的空珠子作为模拟（M）。(一)使用Setdb2特异性mAb克隆7H7F11的内源性Setdb2的ChIP。(b条)H3K9me3的ChIP。(c（c）)H3K9ac的ChIP。通过非配对t检验计算统计显著性。显著的p值显示如下：*p≤0.05，**p≤0.01，***p≤0.001，****p≤0.0001。
图4
图4
Setdb2（设置db2）燃气轮机/燃气轮机在脂多糖诱导的中性粒细胞模型中，小鼠的肺部炎症加剧。WT和Setdb2（设置db2）燃气轮机/燃气轮机小鼠用LPS鼻内激发4小时或模拟治疗（Ctrl）。(一)提取激发小鼠和对照小鼠的总肺RNA，并分析其表达Cxcl1公司通过实时PCR。(b条)进行支气管肺泡灌洗（BAL），并通过ELISA分析BAL液上清液中的CXCL1。(c-e公司)对BAL液细胞总数、中性粒细胞和巨噬细胞进行定量。将单个实验的细胞数归一化为LPS刺激的WT小鼠的相应平均值（相对数=细胞数/平均值重量+LPS). 分散斑点代表从3个独立实验中汇集的单个小鼠。采用非配对t检验进行统计分析。显著的p值显示如下：*p≤0.05，**p≤0.01，***p≤0.001，****p≤0.0001。
图5
图5
Setdb2介导流感病毒诱导的与肺炎链球菌.WT和Setdb2（设置db2）燃气轮机/燃气轮机小鼠要么未经治疗（Ctrl），要么感染亚致死剂量的流感病毒（PR8），要么再次感染肺炎链球菌（SP）PR8感染后5天。(一)Cxcl1公司流感病毒感染5天后，通过实时PCR对肺组织中的RNA进行定量。(b-d（英国）)WT和Setdb2（设置db2）燃气轮机/燃气轮机SP重叠感染16小时后收获小鼠。超感染小鼠接受~2×104SP的CFU(b条)BAL液CXCL1 ELISA结果和中性粒细胞计数(c（c）)肺组织和(d日)显示BAL油液。(电子-k)感染~2×10后2天三SP、WT和CFUSetdb2（设置db2）燃气轮机/燃气轮机处死小鼠(e（电子）)拍摄肺部图像（尺寸为1cm）。根据大体病理学程度排列肺部。(（f）)从右肺叶测定肺湿重，并将其归一化为第0天的体重。虚线表示三个未感染肺部的平均肺重量与体重之比。(克)WT和WT左肺叶代表性切片的H&E组织学染色Setdb2（设置db2）燃气轮机/燃气轮机展示的是老鼠。低倍率比例尺为200μm，高倍率为50μm。(小时)肺切片的组织病理学评分（参见方法). (我)的表达式伊尔6实时荧光定量PCR检测肺组织mRNA表达。图表显示伊尔6与未感染WT小鼠相比的折叠诱导。(j个)ELISA检测IL-6蛋白水平。(k个)细菌负荷被确定为右肺叶组织匀浆中的CFU。散点印迹代表来自(a、 电子-k)一个或(b-d（英国）)两个混合实验。(f、 k个)展示两个类似实验中的一个。通过非配对t检验计算统计显著性。显著p值如下所示：*p≤0.05，**p≤0.01，***p≤0.001，***p≤0.0001。
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中的注释

  • 阻止刽子手。
    Wack A.公司。 Wack A.公司。 自然免疫学。2015年1月；16(1):6-8. doi:10.1038/ni.3055。 自然免疫学。2015 PMID：25521671 没有可用的摘要。

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