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.1989年5月;86(10):3728-32.
doi:10.1073/pnas.86.10.3728。

基因组测序揭示了活性启动子中的5-甲基胞嘧啶游离结构域和预先施加的甲基化模式的扩散

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基因组测序揭示了活性启动子中的5-甲基胞嘧啶游离结构域和预先施加的甲基化模式的扩散

M总计等。 美国国家科学院程序. 1989年5月.

摘要

先前的研究表明,与腺病毒2型(Ad2)DNA晚期E2A启动子帽位点相关的+24、+6和-215位的三个5'-CCGG-3'序列的甲基化与其活性呈负相关。在本研究中,我们使用基因组测序方法检测5’-CG-3'序列中的5-甲基-2'-脱氧胞苷(m5dC)残基,而不是5’-CCGG-3'(Hpa II)位点。整合Ad2 DNA的晚期E2A启动子的基因活性所需的约180个碱基对区域内所有5'-CG-3'序列的甲基化模式在携带该启动子处于激活或非激活状态的细胞系中测定。在细胞系HE1和uc2中,晚期E2A启动子是活性的,并且+24和-160位之间的所有13个5’-CG-3’序列都是非甲基化的。在HE2细胞系中,相同的启动子被永久关闭,所有5'-CG-3'序列在两条链中都被甲基化。因此,在晚期E2A启动子中约180个碱基对的区域内,这些细胞系的反向相关性是完美的。在细胞系mc23和mc40中分析了相同的启动子片段,其中晚期E2A启动子-氯霉素乙酰转移酶(CAT)基因构建物在体外5'-CCGG-3'甲基化和随后的转染后被基因组固定。在mc23细胞系中,预先施加的甲基化模式是稳定的,CAT基因是不活跃的。基因组测序证实了5'-CCGG-3'序列中存在m5dC,并揭示了甲基化沿着整个启动子向邻近的5'-CG-3'顺序扩散。其中一些位点被半甲基化。在细胞系mc40中,120个整合拷贝中的几个在+24和+6位脱甲基,但启动子在-50位上游的一些拷贝中甲基化。细胞株mc40表达CAT基因。

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引用人

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    1. 美国国家科学院院刊1977年12月;74(12):5350-4-公共医学
    1. 《维罗尔杂志》。1987年12月;61(12):3710-20-公共医学
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