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比较研究
.1988年4月;106(4):1141-9.
doi:10.1083/jcb.106.4.1141。

小鼠肝和Madin-Darby犬肾细胞紧密连接蛋白ZO-1的特性

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比较研究

小鼠肝和Madin-Darby犬肾细胞紧密连接蛋白ZO-1的特性

J M安德森等。 J细胞生物学. 1988年4月.

摘要

ZO-1最初由单克隆抗体技术鉴定,是第一个与紧密连接特异性相关的蛋白质。在这里,我们描述并比较了小鼠肝脏和Madin-Darby犬肾(MDCK)上皮细胞系ZO-1的物理特性。通过SDS-PAGE/免疫印迹分析测定,ZO-1多肽在小鼠组织中的表观尺寸为225 kD,在犬源性MDCK细胞中的表见尺寸为210 kD。两种来源的ZO-1均通过6 M尿素或高pH条件从分离的质膜中得到最佳溶解;用0.3 M KCl进行部分溶解。非离子洗涤剂Triton X-100和辛基β-D-吡喃葡萄糖苷不能溶解ZO-1。这些溶解度特性表明ZO-1是一种外周相关膜蛋白。通过凝胶过滤和免疫亲和层析相结合,从[35S]蛋氨酸代谢标记的MDCK细胞中纯化ZO-1至电泳均匀性。纯化ZO-1的s20,w为5.3,Stokes半径为8.6nm。这些值表明纯化的ZO-1是不对称单体分子。以不纯蛋白提取物为特征的小鼠肝脏ZO-1的相应值为6 s20、w和9 nm。ZO-1是MDCK细胞中的一种磷酸蛋白,代谢标记为[32P]正磷酸盐;对纯化的ZO-1中的磷酸氨基酸的分析显示只有磷丝氨酸。通过Scatchard分析两种不同的125I-mAbs与来自肝脏的SDS固溶蛋白和固定在硝化纤维素上的MDCK细胞的竞争性和饱和结合,确定ZO-1表位数。26 ng-mAb/mg肝脏和63 ng/mg MDCK细胞蛋白出现饱和结合。假设只有一个表位/ZO-1分子,这相当于每个MDCK细胞有30000个ZO-1。

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参考文献

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出版物类型

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