跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2013:4:2823.
doi:10.1038/ncomms3823。

命运追踪显示肝星状细胞是肝纤维化的主要贡献者，与病因无关

英格玛·梅德拉克 1, 克里斯汀·C·苏 # 1, 朱利安·斯特罗格 # 1, 彼得·休伯纳 1, 穆雪茹 1, 戴安娜·赫·达皮托 2, Jean-Philippe普拉德 1, 罗伯特·施瓦贝 1 2
附属公司

命运追踪显示肝星状细胞是肝纤维化的主要贡献者，与病因无关

英格玛·梅德拉克等。 国家通讯社. 2013.

摘要

尽管器官纤维化在慢性病中会导致显著的发病率和死亡率，但缺乏有关介导纤维化形成的特定细胞因子的详细知识阻碍了有效抗纤维化治疗的设计。不同的细胞来源，包括组织来源和骨髓来源的成纤维细胞、周细胞和上皮细胞，被认为会产生肌成纤维细胞，但它们的相对贡献仍存在争议，在器官和不同疾病之间存在着巨大差异。在这里，我们使用了一种标记99%肝星状细胞（HSC）（一种肝脏特异性周细胞群）的新型Cre转基因小鼠，以证明HSC在中毒性、胆汁淤积性和脂肪性肝病模型中产生82-96%的肌成纤维细胞。此外，我们排除了HSC在受损肝脏中作为兼性上皮祖细胞的功能。基于这些发现，HSC应被视为所有类型肝病抗纤维化治疗的主要细胞靶点。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。GFAPCre标记肝外和肝内胆管，但不标记HSC
答：。宏观图像显示，在肝外胆管、大脑和大脑切片中，hGFAPRe诱导的ZsGreen-Cre报告基因荧光（n=1）。B-C.公司。HSC是从表达ZsGreen（n=2）的hGFAPCre小鼠中分离出来的，可以是电镀的（B），也可以是流式细胞术（C）分析的。LratCre小鼠作为阳性对照（n=3）。D。从表达mTom/mGFP-Cre报告子的hGFAPCre小鼠中分离出HSC，并进行电镀（n=1）。E.公司。未经治疗的（n=1）、胆道造影的（n+1）和CCl切片4-治疗后的肝脏（n=2）进行结蛋白染色，共焦显微镜下显示ZsGreen和HSC标记结蛋白没有共同定位。F、。在FACS分类的hGFAP-Cre标记的ZsGreen阳性细胞中，有代表性的western blot（共3个）显示细胞角蛋白19表达，但无结蛋白表达。G.公司。hGFAPCre小鼠接受BDL（n=1）或CCl4治疗组（n=1）显示tdTomato Cre报告子和Col-GFP报告子之间没有重叠，因此排除了hGFAPCre标记细胞对产生ECM的肌成纤维细胞的贡献。小时。胆管样hGFAPCre小鼠的细胞角蛋白染色显示细胞角蛋白几乎完全重叠，标志着胆管增生，并且hGFAPCre诱导的ZsGreen表达（n=1）。一、。在小鼠Gfap启动子和mTom/mGFP Cre报告子下表达Cre的未经处理小鼠切片显示，肝脏中没有GFP表达。大脑作为阳性对照（入口）。比例尺，4 mm（A，左面板）、2 mm（A、上中面板和右面板）、200μm（A，下中面板和右侧面板）和50μm（B、D、E、G-I）。
图2
图2。LratCre有效标记肝星状细胞
答：。通过western blot检测Lrat在纯和未镀膜原代小鼠HSC（n=8）、肝细胞（n=2）、Kupffer细胞（n=2）、内皮细胞（nx2）和胆管细胞（n=2）中的表达.B至C。从表达ZsGreen Cre报告基因的LratCre阴性小鼠（n=2）和LratCre-阳性小鼠（n=3）中分离出HSC，并将其放置24小时（B），或使用维生素A（“VitA”，在紫色FACS通道中测定）荧光作为HSC标记物，通过流式细胞术（C）进行分析。D。使用共焦显微镜（n=4）在未经治疗的肝脏中测定LratCre诱导的ZsGreen表达和结蛋白的共定标E.公司。通过共焦显微镜测定未经治疗和CCl中LratCre诱导的ZsGreen表达和CD31（标记内皮细胞）、F4/80（标记巨噬细胞）、HNF4α（标记肝细胞）和细胞角蛋白（标记胆管细胞）的共定标4-治疗小鼠。比例尺100μm（B，D-E）。
图3
图3。肝星状细胞是CCl中肌成纤维细胞的主要来源4-诱导性肝纤维化
答：。未经治疗和CCl的代表性全肝荧光图像4-治疗组（n=3）显示CCl中LratCre标记的ZsGreen阳性宏观纤维化间隔4-治疗过的肝脏。B。CCl冷冻肝切片4-用结蛋白（上面板）或αSMA（中面板）对处理过的LratCre阳性小鼠进行染色，以通过共焦显微镜证明HSC标记物结蛋白或αSMA-和LratCre-诱导的ZsGreen的共同定位。共聚焦显微镜用于显示Col-GFP报告子的共同定位，标记激活的肌成纤维细胞，以及LratCre诱导的tdTomato表达（下面板）。来源于LratCre标记的ZsGreen阳性HSC的αSMA表达细胞在9x CCl诱导的纤维化中的定量4（n=4，上图）或Col-GFP表达细胞，这些细胞来源于9xCCl诱导的纤维化中标记为tdTomato阳性的LratCre HSC4治疗（n=4，下图）。C、。α-SMA与td番茄和Col-GFP在9xCCl中的共定标4-通过共焦显微镜检测诱导的肝纤维化，采用远红外二级抗体检测αSMA。D-E.公司。表达Cre诱导的白喉毒素受体（iDTR）的LratCre小鼠在CCl期间接受载体（n=4）或白喉毒素（DT，n=44-诱导肝纤维化。用免疫组织化学法测定αSMA和结蛋白的表达并量化（D），用qPCR（E）测定成纤维基因的表达。比例尺1 mm（A）、100μm（B-C）、200μm（D）。数据显示为平均值±标准偏差。*p<0.05；**p<0.01（通过学生t检验确定）。
图4
图4。肝星状细胞是淤胆性肝纤维化中肌成纤维细胞的主要来源
A-C.公司。14天胆管封闭（BDL）小鼠（A，ZsGreen n=3，tdTom/ColGFP n=4），9周龄Mdr2的肝脏切片让开小鼠（B，ZsGreen n=4，tdTom/ColGFP n=5）或0.1%DDC饮食治疗小鼠（C，Zs格林n=4、tdTom/ColGFP n=3）用结蛋白染色，以证明HSC标记物结蛋白和LratCre诱导的ZsGreent在共聚焦显微镜下的共定位（上面板）。共聚焦显微镜用于显示Col-GFP报告子的共同定位，标记激活的肌成纤维细胞，以及LratCre诱导的tdTomato表达（下面板）。D。两周龄BDL小鼠（上面板）和九周龄Mdr2的流式细胞仪图像让开（下面板）小鼠，共表达LratCre、tdTomato和Col-GFP。FACS图旁边的图像显示电镀后新分选的细胞。E.公司。在肝脏切片（14d BDL:n=4；Mdr2让开n=5；0.1%DDC饮食：n=3）或使用流式细胞术在非实质细胞组分中（14d BDL:n=4，Mdr2让开n=6）。F、。图像显示大小胆管被Col-GFP阳性和LratCre阴性的门静脉成纤维细胞包围。G.公司。对FACS分类的未电镀LratCre标记的tdTom阳性细胞和Col-GFP阳性细胞（HSC，n=5株）以及tdTom阴性细胞和Col-GFP阳性细胞（门静脉成纤维细胞样细胞，PFLC，n=6株）进行qPCR。小时。HSC和PFLC的代表性图像显示形态不同的细胞群。比例尺100μm（A-C）、10μm（D）、100μm（F）、50μm（H）。数据显示为平均值±标准偏差。*p<0.05；**p<0.01；***p<0.001（通过学生t检验确定）。
图5
图5。造血干细胞对新形成的肝细胞的产生没有贡献
A-G公司。通过共聚焦显微镜在未经治疗的小鼠（n=4）（A）、接受MCDE饮食三周然后在常规食物中恢复三周的小鼠（n=4）（B）、接受DDC饮食四周然后恢复三周的小鼠（n=3）（C）、，接受BDL治疗两周的小鼠（n=3）（D），9-15周龄的Mdr2ko小鼠（n=3）（E），或部分肝切除术后两周的鼠（n=2）（F）。共聚焦显微镜图像（G）定量了ZsGreen阳性的HNF4α表达肝细胞的数量。H-I.公司。从对照组小鼠（n=3）和接受三周MCDE饮食的小鼠（n=4）中分离出的原代肝细胞的代表性图像，然后恢复三周（H）。AAV8-TBG-Cre感染小鼠的阳性对照（“+ctrl”）显示ZsGreen阳性肝细胞（n=1）（H，右上插入）。罕见的ZsGreen阳性小细胞通过其特征性的含视黄醇的荧光脂滴（H，右下方插入物）被鉴定为HSC。ZsGreen阳性肝细胞定量（I）。比例尺，100μm。数据显示为平均值±标准偏差不显著（单向方差分析）。
图6
图6。LratCre标记的HSC不是骨髓衍生的
A-C.公司。将表达LratCre和mTom/mGFP-Cre报告基因的小鼠的骨髓移植到致命照射的野生型受体中。未处理（n=2），20×CCl4BMT后5-6个月处死（n=1）和3周BDL处理的小鼠，没有发现LratCre诱导的mGFP表达，因此排除了BM对LratCre-表达HSC生成的贡献。相反，表达mTom/mGFP的LratCre阳性小鼠作为阳性对照，显示丰富的mGFP信号（A）。通过脾脏中存在mTom阳性细胞（见插页）和表达F4/80阳性mGFP的肝巨噬细胞（B）的证明，证实了BMT的成功。从骨髓移植小鼠（n=1）分离的HSC没有mGFP信号或通过流式细胞术分析，而对照组显示丰富的mGFP（n=4）（C）。比例尺100μm。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

中的注释

类似文章

  • 小鼠纤维化肝中肌成纤维细胞的起源。
    Iwaisako K、Jiang C、Zhang M、Cong M、Moore Morris TJ、Park TJ、Liu X、Xu J、Wang P、Paik YH、Meng F、Asagiri M、Murray LA、Hofmann AF、Iida T、Glass CK、Brenner DA、Kisseleva T。 Iwaisako K等人。 美国国家科学院院刊2014年8月12日；111（32）：E3297-305。doi:10.1073/pnas.1400062111。Epub 2014年7月29日。 美国国家科学院院刊，2014年。 PMID：25074909 免费PMC文章。
  • Hedgehog-YAP信号通路调节谷氨酰胺分解以控制肝星状细胞的激活。
    Du K、Hyun J、Premont RT、Choi SS、Michelotti GA、Swiderska-Syn M、Dalton GD、Thelen E、Rizi BS、Jung Y、Diehl AM。 Du K等人。 胃肠病学。2018年4月；154（5）：1465-1479.e13。doi:10.1053/j.gastro.2017.12.022。Epub 2018年1月3日。 胃肠病学。2018 PMID：29305935 免费PMC文章。
  • 肝纤维化。
    Aydán MM，阿克萨勒肯塔基州。 Aydán MM等人。 Turk J胃肠病学。2018年1月；29(1):14-21. doi:10.5152/tjg.2018.17330。 Turk J胃肠病学。2018 PMID：29391303 免费PMC文章。 审查。
  • EphB2受体酪氨酸激酶通过激活肝星状细胞促进小鼠肝纤维化。
    Mimche PN、Lee CM、Mimcher SM、Thapa M、Grakoui A、Henkemeyer M、Lamb TJ。 Mimche PN等人。 科学报告，2018年2月7日；8(1):2532. doi:10.1038/s41598-018-20926-9。 2018年科学报告。 PMID：29416088 免费PMC文章。
  • 肝脏肌成纤维细胞的起源和功能。
    Wells RG、Schwabe RF。 Wells RG等人。 塞米恩肝病。2015年5月；35(2):97-106. doi:10.1055/s-0035-1550061。Epub 2015年5月14日。 塞米恩肝病。2015 PMID：25974896 审查。
查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Mehal WZ、Iredale J、Friedman SL。刮除纤维化：通往纤维化核心的高速公路。《国家医学》2011；17:552–553.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Gabbiani G.伤口愈合和纤维收缩疾病中的肌成纤维细胞。病理学杂志。2003;200:500–503.-公共医学
    1. Wynn TA，Ramalingam TR。纤维化机制：纤维化疾病的治疗转化。《自然医学》，2012年；18:1028–1040.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 巴塔勒R，布伦纳DA。肝纤维化。临床投资杂志。2005年；115:209–218.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Dranoff JA，Wells RG。门静脉成纤维细胞：未被充分认识的胆道纤维化介质。肝病学。2010;51:1438–1444.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型