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.2013年10月30日:3072。
doi:10.1038/srep03072。

CD200R信号转导抑制巨噬细胞促血管生成基因表达并抑制脉络膜新生血管

Shintaro Horie公司 1, 斯科特·罗比, 刘健, 吴伟康, 罗宾·阿里, 詹姆斯·班布里奇, 林赛·B·尼克尔森, Manabu Mochizuki公司, 安德鲁·迪克, 大卫·A·科普兰
附属公司

CD200R信号转导抑制巨噬细胞促血管生成基因表达并抑制脉络膜新生血管

Shintaro Horie公司等人。 科学代表. .

摘要

巨噬细胞迅速受到同源和可溶性信号的调节，以获得在炎症、伤口愈合和血管生成过程中传递特定功能的表型。抑制性CD200R信号是否调节促血管生成巨噬细胞表型，从而抑制眼部新生血管尚不清楚。CD200R缺陷型骨髓衍生巨噬细胞（BMMΦ）用于证明，当用PGE2或RPE条件（富含PGE2）培养基刺激时，缺乏这种抑制性受体的巨噬细胞表现出增强的Vegfa、Arg-1和Il-1β水平。当与PGE2条件下的CD200R（-/-）BMMΦ共培养时，HUVECs中的内皮管形成增加，并且在CD200R缺陷小鼠中激光诱导的脉络膜新生血管形成增强。进一步证实，通过CD200R的信号转导导致BMMΦ血管生成和促炎表型的下调。在激光诱导的脉络膜新生血管模型中研究了该通路的翻译电位。靶向髓系浸润的CD200R激动剂单克隆抗体局部传递可改变巨噬细胞表型并抑制促血管生成基因表达，从而抑制病理性血管生成和CNV的发展。

PubMed免责声明

利益冲突声明

这项工作得到了安德伍德信托捐赠计划赠款和登喜路医疗信托基金（赠款编号：R128/1109）的资助。A.D.D.和R.R.A.的部分支持由摩尔菲尔德眼科医院NIHR生物医学研究中心和伦敦大学学院眼科研究所提供。JWB由NIHR研究教授支持。

数字

图1
图1。PGE后CD200R缺陷的巨噬细胞表现出明显的促血管生成表型2刺激。
（A） 、（C）、（D）素食主义者，精氨酸1和Il1βmRNA表达分别由定量RT-PCR测定；（B） WT和WT细胞上清液产生的VEGF蛋白CD200R型−/−前列腺素E刺激的巨噬细胞2经ELISA测定，持续6小时。信使RNA水平归一化为18srRNA。数据表示为平均值±SEM，n=3*两组之间P<0.05，***P<0.0005。
图2
图2。CD200R信号缺失导致巨噬细胞VEGF表达增强，以应对RPE-衍生PGE2.
（A） 前列腺素E2用ELISA法测定培养6–24小时的小鼠B6RPE-07细胞的分泌。（B）维格夫在24小时后收集的RPE条件培养基中培养6小时的BMMΦmRNA表达。18srRNA用作内部对照。（C） WT或CD200R1中VEGF表达的相对平均荧光强度（MFI）−/−巨噬细胞。（D） 在RPE上清液或对照培养基中培养24 h的BMMΦ的典型共焦图像。细胞固定并渗透，然后用抗VEGF抗体进行免疫训练。比例尺：20μm。数据表示为平均值±SEM，n≥3*组间P<0.05，**P<0.005。
图3
图3。CD200R缺陷巨噬细胞增强的促血管生成表型促进血管生成。
（A） 单独培养的HUVEC细胞的代表性图像，或在WT或CD200R型−/−预先用PGE2刺激巨噬细胞24小时。（B） 单独培养或在WT或CD200R型−/−PGE是否刺激巨噬细胞2数据表示为平均值±SEM，n=3，*p<0.05**p<0.005***组间p<0.0005。（C） 来自WT和CD200R型−/−激光照射后第7天，用CD11b（绿色）和异凝集素B4（IB4）（红色）对小鼠进行免疫染色。（D） 共焦图像计算的平均CNV面积。数据表示为平均值±SEM，n=每个菌株26个病灶*p<0.05。
图4
图4。促进CD200R信号传导抑制巨噬细胞的促血管生成基因表达谱。
使用适应的在体外吞噬试验，将由B6-RPE07细胞在95°C下加热15分钟制备的坏死RPE细胞添加到BMMΦ中，BMMΦ用10-或25μg/ml DX109或同型对照单克隆抗体预先孵育2小时。在与坏死RPE孵育24小时后清洗并收集BMMΦ，提取RNA进行RT-qPCR分析，以确定精氨酸-1和Il-1β基因表达。Gapdh公司用作标准化控制。数据表示为平均值±SEM，n=3*p<0.05***p<0.0005。
图5
图5。DX109治疗改变CNV的促血管生成基因特征并减少Iba-1的浸润+巨噬细胞。
在C57BL/6J野生型小鼠中激光诱导CNV后，立即进行DX109或同种对照单克隆抗体的玻璃体内注射。（A） RT-pPCR分析精氨酸-1,Ccl2公司,抄送2和Il-1β激光和注射后第3天收集的RPE/脉络膜组织中的基因表达。Gapdh公司用作标准化控制。数据以平均值±SEM表示，每个治疗组n=6*p<0.05**p<0.005，***p<0.0005同种型与DX109相比。（B） 用Iba-1对第3天的代表性RPE/脉络膜平片进行免疫染色，并根据共聚焦图像计算Iba-1的平均荧光强度（MFI）。数据以平均值±SEM表示，每个治疗组n=12个病灶**p<0.005。（C） 用IB4对代表性RPE/脉络膜平板进行免疫染色，并根据共焦图像计算平均CNV面积。数据表示为平均值±SEM，n=8个损伤*p<0.05。
图6
图6。DX109治疗可减少CNV病变的发展。
激光诱导CNV后立即玻璃体内注射DX109或同种对照单克隆抗体（A），或（B）在C57BL/6J野生型小鼠激光诱导后第3天注射，并在第7天和第14天通过眼底荧光素血管造影确定平均病变大小。每个时间点的图表显示了激光和注射DX109或同型对照单克隆抗体后的平均病变大小。荧光血管造影早期阶段的结果显示（高荧光+/−SEM的平均面积；n=54个检查的病变），*p<0.05，**p<0.005。血管造影的代表性图像显示在每个时间点的下方。与同种小鼠相比，接受DX109的小鼠在激光照射后7天和14天的平均病变大小分别显著减小（A）30%和39%，以及（B）在激光照射14天时显著减小42%。
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