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.2013年12月19日；54(13):8237-50.
doi:10.1167/iovs.13-12581。

活体自适应光学成像和体外表征活体小鼠视网膜周细胞的形态和形貌

杰西·沙莱克 1, 英庚, HoanVu Nguyen公司, 大卫·R·威廉姆斯
附属公司

活体自适应光学成像和体外表征活体小鼠视网膜周细胞的形态和形貌

杰西·沙莱克等。 投资眼科视觉科学. .

摘要

目的：对活体眼睛中的视网膜周细胞进行非侵入性成像，并对成年小鼠视网膜中NG2阳性细胞的地形和形态进行表征。

方法：使用双通道自适应光学扫描激光检眼镜（AOSLO）对表达荧光周细胞（NG2，DsRed）的转基因小鼠进行成像。单通道近红外光血管灌注成像。第二个通道同时成像荧光视网膜周细胞。还使用宽视野眼底镜对小鼠进行成像。为了确认活体成像，用常规荧光显微镜对五只眼睛进行剜除和平板成像。相对于视盘量化细胞地形图。

结果：我们从NG2阳性细胞中观察到强烈的DsRed荧光。AOSLO显示荧光血管壁细胞覆盖了活体视网膜中的所有血管。细胞在较大的小静脉上呈星状，在小动脉上呈带状。在视网膜循环的最小毛细血管上发现表明周细胞的NG2阳性细胞。广域SLO能够快速评估NG2阳性分布，但对细胞计数的分辨率不足。活体外显微镜显示，NG2阳性毛细血管周细胞在离视盘0.3 mm以上的偏心距（视网膜区域515±94个细胞/mm（2））处的地形相对均匀。

结论：我们首次提供了活体动物视网膜周细胞的高分辨率图像。亚细胞分辨率使毛细血管上NG2阳性细胞的形态学鉴定能够显示视网膜周细胞的典型特征和地形。本报告为未来跟踪和量化活视网膜中周细胞的形态、形态和功能的研究提供了基础，特别是在微血管疾病的进展中。

关键词：自适应光学；毛细血管；糖尿病性视网膜病变；微血管网；神经血管耦合。

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数字

图1
图1
AOSLO捕获的血管灌注和NG2 DsRed细胞的体内成像。左侧：两个动物的图像显示了视网膜内部最浅的血管分层。周围组织中可见视网膜神经纤维束的痕迹。血管图像是运动对比增强的，明亮的像素显示出强烈的时间变化，表明活跃的血管循环中的血细胞在运动。中部：同步荧光通道捕获DsRed荧光。NG2细胞与血管系统紧密相连。小于6μm的血管显示细胞稀疏且分布均匀，与周细胞的形态一致(箭头). 大于10μm的血管显示细胞密集聚集，与周细胞或血管壁细胞覆盖的小动脉和小静脉一致(箭头).赖特：血管运动对比度的伪彩色合并图像(洋红)和NG2荧光(绿色).比例尺：50微米。
图2
图2
体内血管灌注和周细胞的同步成像。(A类)宽视野HRA Spectralis图像显示大约30°视野的小鼠视网膜。叠加(黑暗的)是运动对照AOSLO场，显示微级别分辨率的毛细血管灌注。(B类)使用AOSLO的体内双通道成像。通道1收集显示毛细血管灌注的近红外运动对比度(洋红，移动血细胞）。通道2同时显示DsRed荧光（周细胞，绿色). (C类)5°AOSLO区域显示周细胞与灌注毛细血管的联系。蒙太奇是从一个单一的毛细管分层。
图3
图3
视网膜中央动脉出现时NG2阳性细胞。左侧：AOSLO图像显示了视盘血流的运动对照图像。视网膜中央动脉（CRA）的出现是所有流向视网膜内侧的血液的点源。从这一点开始分支的小动脉（A）标记在黄色的多个小静脉的静脉回流（V）标记在蓝色AOSLO视频中根据血流方向识别血管。中部：DsRed荧光显示微静脉上有点状标记(蓝色箭头)，小动脉标记相对密集(黄色箭头)以及视网膜中央动脉周围的环形带。赖特：合并后的图像显示了相邻的荧光结构(绿色)视网膜中央动脉周围与视网膜血管分流(洋红).比例尺：50微米。
图4
图4
三种毛细管分层中视网膜周细胞的深度分辨成像。AOSLO的共焦性使得能够沿着光轴进行薄的光学切片(Z轴=6μm）。在玻璃体（视网膜神经纤维层附近）、中间（内丛状层附近）和巩膜（外丛状层旁边）成像相同的视网膜视野。红外运动对比观察到三种不同的毛细血管分层(左边). 同时捕获DsRed荧光(中间的)各层显示周细胞。周细胞在三个微血管层中的每一层与血管共定位(正确的，个容器洋红和NG2细胞绿色). 这个最下面一行显示伪彩色最大投影图像，其中黄色的=vitread，红色=中间，和青色=巩膜平面。三层毛细血管网也显示三层周细胞覆盖。AOSLO提供的光学切片可以消除两个重叠的NG2细胞表面的歧义(绿色箭头)否则，这将被解释为非焦点仪器中的一个单元。比例尺：25微米。
图5
图5
HRA Spectralis的无红和NG2荧光图像。(A类)小鼠的无红成像显示血管对比度较弱，尤其是较小的微血管。同一位置的荧光成像显示血管网周围NG2 DsRed细胞的密度。DsReds增强了血管结构的对比度，而在无红成像中很难分辨。(B类)Q宽场合成图像显示了HRA光谱中光学可及场的马赛克表示，鼠标005的视角超过100°。数据来自两只小鼠M005和M006的三个视网膜。比例尺：15°视角，或约500μm。
图6
图6
NG2 DsRed荧光在整个成年期仍存在于视网膜壁细胞中。左侧：从出生后第44天到279天，周细胞显示出AOSLO成像的强荧光。在相同的激励功率和相机增益设置下采集图像。赖特：HRA Spectralis成像还显示，在中晚期成年期，视网膜上有较强的标记检测。AOSLO图像，比例尺：50μm或大约1.5°的视角。人力资源部比例尺：500μm或15°视角。
图7
图7
左侧视盘附近小动脉和小静脉的放射状形态。中间可见一个小静脉（V），两侧有两个小动脉（A）。微静脉由壁细胞形态识别，壁细胞形态显示NG2血管覆盖更稀疏，细胞呈星状。体细胞和树突状突起都可以被识别。小静脉两侧可见两条小动脉。视网膜各处的小动脉呈带状，表明壁细胞有密集的胞体和围绕血管周长的方向性突起。赖特毛细血管上的NG2细胞形态显示出均匀分布的外观，重叠最小。体细胞经常从毛细血管中伸出，突起不完全覆盖毛细血管内皮。过程在相邻周细胞之间延伸数十微米。Soma常位于毛细血管分支点(箭头)而其他则位于毛细血管分支的中间(箭头). 图像来自一只9个月大的NG2小鼠，代表了我们观察到的每个视网膜，无论其年龄在出生后的第44天到第568天。图像场以40倍放大率拍摄。
图8
图8
绘制每个视网膜区域毛细血管和A/V周细胞的密度，作为视网膜偏心率的函数.(A类)人工识别并计数视网膜扁平支架上的NG2周细胞。在笛卡尔空间平铺36个以上的高倍视野，记录细胞相对于视盘的位置（坐标空间=0,0）。每100μm使用一个径向箱对视盘各个方向的周细胞进行计数（为了清晰起见，在单个象限中显示了样本分析覆盖图，右上角). 计算了两组周细胞：毛细血管周细胞(蓝色)定义为血管壁周细胞小于7μm，小动脉/静脉壁周细胞大于或等于7μm（A/V，灰色数据）。在多个焦平面上进行细胞计数，这确保了所有周细胞都被计数，无论视野深度如何。毛细血管周细胞均匀分布于椎间盘附近不以较大A/V密度为主的区域。所示数据包括三只动物五个视网膜的平均值±1 SD(B类)毛细血管周细胞被量化为基本方向的函数。四个象限中的密度估计值在相对于椎间盘的所有视网膜方向上具有相同的总体分布特征。中的数据(B类)是两只动物四个视网膜的平均值。
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    1. Laties AM，Rapoport SI，McGlinn A.恒河猴脑血管而非视网膜血管的高血压破裂。眼科学杂志。1979; 97: 1511–1514-公共医学
    1. 库瓦巴拉T，科根DG。视网膜血管模式。六、 视网膜毛细血管壁细胞。眼科学杂志。1963; 69: 492–502-公共医学
    1. Frank RN、Turczyn TJ、Das A.视网膜和脑毛细血管的周细胞覆盖率。投资眼科视觉科学。1990; 31: 999–1007-公共医学

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