A functional sequence-specific interaction between influenza A virus genomic RNA segments

doi:10.1073/pnas.1314419110

.2013年10月8日；110(41):16604-9.

doi:10.1073/pnas.1314419110。 Epub 2013年9月25日。

甲型流感病毒基因组RNA片段之间的功能序列特异性相互作用

西里尔·加瓦齐¹, 马蒂厄·伊弗, 凯瑟琳·伊塞尔, 雷蒙德·普·史密斯, 曼纽尔·罗莎·卡拉特拉瓦, 布鲁诺·李纳, 文森特·莫里斯, 罗兰·马奎特

附属公司

PMID： 24067651
预防性维修识别码：项目经理3799358
内政部： 10.1073/pnas.1314419110

甲型流感病毒基因组RNA片段之间的功能序列特异性相互作用

西里尔·加瓦齐等。美国国家科学院程序. 2013.

.2013年10月8日；110(41):16604-9.

doi:10.1073/pnas.1314419110。 Epub 2013年9月25日。

作者

西里尔·加瓦齐¹, 马蒂厄·伊弗, 凯瑟琳·伊塞尔, 雷蒙德·普·史密斯, 曼纽尔·罗莎·卡拉特拉瓦, 布鲁诺·李纳, 文森特·莫里斯, 罗兰·马奎特

隶属关系

¹法国斯特拉斯堡大学建筑与建筑研究所，国家科学研究中心，法国斯特拉斯布尔生物研究所，67084。

PMID： 24067651
预防性维修识别码：项目经理3799358
内政部： 10.1073/pnas.1314419110

摘要

甲型流感病毒每年都会引起流感疫情，偶尔还会引发严重疫情。它们的基因组被分割成八个片段，这提供了进化优势，但使基因组包装复杂化。人们怀疑存在一种选择性包装机制，即每个病毒RNA的一个拷贝被特异地包装到每个病毒粒子中，但其分子细节仍不清楚。在这里，我们通过体外实验确定了a型禽流感病毒的两个病毒基因组RNA片段之间的直接分子间相互作用。通过使用沉默的跨补体突变体，我们证明这种相互作用发生在感染细胞中，是病毒最佳复制所必需的。破坏这种相互作用不会影响突变病毒的HA滴度，这表明产生了相同数量的病毒颗粒。然而，它非特异性地降低了病毒颗粒中病毒RNA的量，导致空病毒颗粒增加了八倍。竞争实验表明，这种相互作用有利于相互作用的病毒RNA片段的共包装。我们确定的相互作用涉及以前未指定为包装信号的区域，并且在甲型流感病毒中没有广泛保守。结合以往的研究，我们的实验表明，病毒RNA片段可以通过形成序列依赖的超分子相互作用网络来促进A型流感病毒基因组的选择性包装。这些相互作用缺乏保守性可能会限制不同甲型流感病毒之间的基因重组。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

**图1。**
体外鉴定介导vRNAs 2和8相互作用的nts。(A类)通过天然琼脂糖凝胶电泳分析WT-vRNAs之间的相互作用以及vRNA8中末端缺失的影响。(B类)vRNA 8中的内部缺失。(*C1类*和*指挥与控制*)vRNA 2的内部缺失。(D类)vRNA 8与寡核苷酸的映射。(*E、上部*)vRNAs 2和8之间的互补性；(中部)预测相互作用序列的干环结构；以及(下部)vRNA 2中引入的点突变^静音和8^静音. (F类)靶向vRNAs 2和8的寡核苷酸。(*G公司*)点反式-vRNAs 2或/和8的互补突变。分子间复合物由一个大箭头标记。凝胶上方以灰色表示复合物形成减少的条件。

**图2。**
WT和突变病毒的复制。(A类)组织培养感染剂量50（TCID₅₀)野生型和突变型病毒。(B类)感染WT或突变病毒的MDCK细胞上清液中vRNA 7的拷贝数。中的数据A类和B类来自三个独立的实验（生物复制）；每个实验重复进行(A类)或一式三份(B类)（技术复制）。结果报告为平均值±标准偏差**P（P）*< 0.05; ***P（P）*<0.01****P（P）*< 0.001. (C类)对病毒上清液的等分样品进行血凝分析。对两个独立系列的样品（生物复制品）进行了四次分析（技术复制品），得出了相同的结果。

**图3。**
WT和突变病毒的交叉截面。电子显微镜观察WT和突变病毒。显示完整矩阵层的交叉部分没有与内部vRNP对应的任何点，用红色圈出。

**图4。**
感染后24和48小时收集的WT和突变病毒颗粒中vRNAs 2、6、7和8的相对数量。对于vRNA定量，所有病毒相对于细胞培养上清液中vRNA7的数量进行标准化，WT病毒中的所有vRNAs设置为100%。数据来自三个独立实验，一式三份(n个=3），表示为平均值±SEM。

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[10] Coloma R等。生物活性流感病毒核糖核蛋白复合物的结构。《公共科学图书馆·病理学》。2009;5（6）：e1000491。-项目管理咨询公司-公共医学

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