Preparation and use of MitoPY1 for imaging hydrogen peroxide in mitochondria of live cells

doi:10.1038/nprot.2013.064

.2013年6月；8(6):1249-59.

doi:10.1038/nprot.2013.064。 Epub 2013年5月30日。

MitoPY1的制备及其在活细胞线粒体过氧化氢成像中的应用

布莱恩·迪金森¹, 薇薇安·S·林, 克里斯托弗·J·张

附属公司

PMID： 23722262
PMCID公司：项目经理4096497
内政部： 1038/nprot.2013.064年10月10日

MitoPY1的制备及其在活细胞线粒体过氧化氢成像中的应用

布莱恩·迪金森等人。 Nat Protoc公司. 2013年6月.

.2013年6月；8(6):1249-59.

doi:10.1038/nprot.2013.064。 Epub 2013年5月30日。

作者

布莱恩·迪金森¹, 薇薇安·S·林, 克里斯托弗·J·张

附属

¹美国加州大学伯克利分校霍华德·休斯医学院化学、分子与细胞生物学系。

PMID： 23722262
PMCID公司：项目经理4096497
内政部： 1038/nprot.2013.064年10月10日

摘要

线粒体过氧化物黄1（MitoPY1）是一种小分子荧光探针，可选择性地追踪活生物样本的线粒体，并通过启动荧光增强对过氧化氢（H（2）O（2））的局部通量作出响应。这种双功能染料使用一个三苯基膦靶向基团和一个基于硼酸盐的分子开关来选择性地响应线粒体内的H（2）O（2），而不是竞争性活性氧物种（ROS）。MitoPY1可用于测量细胞培养和组织模型中的线粒体H（2。在本方案中，我们描述了MitoPY1的合成以及如何使用这种化学工具来可视化活细胞中的线粒体H（2）O（2）。MitoPY1的制备预计需要7-10天，而涉及培养哺乳动物细胞显微镜的检测可以在1-2天内完成。

PubMed免责声明

数字

图1
线粒体过氧黄1（MitoPY1）。(一)合成方案。(b条)显示H的方案₂O（运行）₂-介导激活MitoPY1。

图2
5μM MitoPY1对H的荧光开启响应₂O（运行）₂.时间点表示添加100μM H后的0、5、15、30、45和60分钟₂O（运行）₂.在503 nm处激发。

图3
线粒体H成像₂O（运行）₂在含有MitoPY1的活细胞中。将10μM MitoPY1在37°C的DPBS中加载HeLa细胞45分钟。然后将培养基换成含有25 nM Mitotracker Deep Red和1μM Hoechst的新鲜DPBS。添加H后₂O（对照）或100μM H₂O（运行）₂，将细胞在37°C下培养60分钟。(一–d日)然后用MitoPY1对对照细胞成像(一)，Mitotracker深红色(b条)、覆盖MitoPY1（绿色）、Mitotracker深红色（红色）和Hoechst（蓝色）(**c（c）**)或亮场和赫斯特（蓝色）叠加(d日). 比例尺，40μm。(**e（电子）**–小时)H（H）₂O（运行）₂-处理后的细胞用MitoPY1成像(**e（电子）**)，Mitotracker深红色(**（f）**)、覆盖MitoPY1（绿色）、Mitotracker深红色（红色）和Hoechst（蓝色）(克)或亮场和赫斯特（蓝色）叠加(小时). 比例尺，40μm。(我–我)H区域₂O（运行）₂-处理过的细胞表示为**e（电子）**放大，显示MitoPY1(我)，Mitotracker深红色(j个)、覆盖MitoPY1（绿色）、Mitotracker深红色（红色）和Hoechst（蓝色）(k个)或亮场和赫斯特（蓝色）的叠加(我). 比例尺，10μm。

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