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.2013年3月14日;495(7440):251-4.
doi:10.1038/nature12005。

二肽基肽酶4是新出现的人类冠状病毒-EMC的功能受体

附属公司

二肽基肽酶4是新出现的人类冠状病毒-EMC的功能受体

V斯大林·拉吉等。 自然. .

摘要

大多数人冠状病毒可引起轻度上呼吸道疾病,但在免疫缺陷患者中可能与更严重的肺部疾病相关。然而,SARS冠状病毒导致严重的下呼吸道疾病,死亡率接近10%,并有系统性传播的证据。最近,在严重且有时致命的下呼吸道感染患者中发现了另一种冠状病毒(人类冠状病毒-伊拉斯谟医学中心(hCoV-EMC))。病毒基因组分析显示与蝙蝠中发现的冠状病毒有密切关系。在此,我们确定二肽基肽酶4(DPP4;也称为CD26)是hCoV-EMC的功能受体。DPP4与来自易感Huh-7细胞裂解物的hCoV-EMC尖峰蛋白的受体结合S1域特异性共纯化。针对DPP4的抗体抑制人原代支气管上皮细胞和Huh-7细胞的hCoV-EMC感染。人类和蝙蝠(Pipistrellus pipisterrellus)DPP4在非易感COS-7细胞中的表达使hCoV-EMC感染成为可能。不同物种进化上保守的DPP4蛋白作为功能受体的使用为hCoV-EMC的宿主范围潜力提供了线索。此外,这将极大地有助于我们了解这种新出现的人类冠状病毒的发病机制和流行病学,并可能有助于制定干预策略。

PubMed免责声明

利益冲突声明

V.S.R.、B.J.B.、R.A.M.F.、A.D.M.E.O.和B.L.H.是与本工作相关的专利申请的发明人。

数字

图1
图1。hCoV-EMC S1与细胞的结合与hCoV-EMC感染相关。
d日,左面板显示了hCoV-EMC S1–Fc与Vero结合(红线)的FACS分析(),COS-7(b),呼-7(c)和蝙蝠细胞(d日). 猫冠状病毒S1-Fc蛋白(蓝线)和模拟细胞(灰色阴影)作为对照。在中间的面板中,使用识别非结构蛋白NSP4的抗血清观察hCoV-EMC感染的细胞。在右侧面板中,使用TaqMan测定法定量感染后0、20和40小时感染细胞上清液中的hCoV-EMC RNA水平,并将其表达为基因组当量(GE;组织培养感染剂量的一半(TCID50)每毫升)。错误栏指示s.e.m.PowerPoint幻灯片
图2
图2。hCoV-EMC S1绑定到DPP4。
、Huh-7细胞裂解物与hCoV-EMC和SARS-CoV S1-Fc蛋白孵育,亲和分离蛋白在非还原条件下进行蛋白质电泳。箭头表示使用hCoV-EMC S1-Fc蛋白特异性分离的~110-kDa DPP4蛋白的位置。b将hCoV-EMC和SARS-CoV S1–Fc蛋白模拟培养或与可溶性DPP4(sDPP4)或可溶性ACE2(sACE2)孵育,然后分离蛋白A sepharose亲和性,并在非还原条件下进行蛋白电泳。PowerPoint幻灯片
图3
图3。DPP4存在于hCoV-EMC敏感细胞系和人支气管上皮细胞上。
用编码人DPP4(hDPP4)、bat DPP4或对照质粒(pcDNA)的质粒转染COS-7细胞,检测S1结合情况,并用抗DPP4的多克隆抗血清进行染色。b同样,对COS-7、Huh-7、Vero和bat细胞与相同的DPP4抗血清(蓝线)或对照正常山羊血清(灰峰)进行反应性测试。c,d日,在原代人支气管上皮细胞培养中也发现DPP4表达(红色)(c)和人支气管组织(d日)并且似乎局限于不表达β-微管蛋白IV(绿色)的非纤毛细胞的顶面。e(电子)在hCoV-EMC感染的原代人支气管上皮细胞培养物中检测到双标记病毒RNA(青色),并且似乎局限于表达DPP4(红色)的非纤毛细胞。使用针对β-微管蛋白IV(纤毛细胞;绿色)、DPP4(红色)、dsRNA(hCoV-EMC;青色)和DAPI(细胞核;蓝色)的抗体进行染色。所有比例尺均为10μm。PowerPoint幻灯片
图4
图4。DPP4对病毒感染至关重要。
,通过DPP4抗体抑制hCoV-EMC感染Huh-7细胞。使用TaqMan分析测试在2小时(开放栏)和20小时(填充栏)收集的上清液中是否存在hCoV-EMC RNA。三个不同实验的代表性结果显示为ΔCt值(单向方差分析测试*P(P) < 0.05;n个=3/组),正常山羊,正常山羊血清。bDPP4抗体以剂量依赖性的方式阻断人原发性细支气管上皮细胞的感染,并在感染后2 h(开放条)和20 h(填充条)分析样本(单向方差分析测试*P(P) < 0.05;n个=每组3人)。c用编码人DPP4(hDPP4)、bat DPP4或对照质粒(pcDNA)的质粒转染COS-7细胞,以1倍的感染倍数接种hCoV-EMC,静置1h。细胞在感染后8 h(原始放大倍数×200)洗涤两次并染色,或在2 h(开条)收集上清液,20使用TaqMan分析测试h(黑条)和40 h(蓝条)是否存在hCoV-EMC RNA(d日). 三个不同实验的代表性结果表示为GE(TCID50毫升−1)值(单向方差分析测试*P(P) < 0.05;n个=每组4个)。所有错误栏代表s.e.m.PowerPoint幻灯片

中的注释

  • 公共卫生:广泛接受冠状病毒。
    Gallagher T,佩尔曼S。 Gallagher T等人。 自然。2013年3月14日;495(7440):176-7. doi:10.1038/495176a。 自然。2013 PMID:23486053 免费PMC文章。

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