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。2013年3月；58(3):522-8.
doi:10.1016/j.jhep.2012.11.011。 Epub 2012年11月21日。

miR-122通过靶向肝星状细胞和抑制P4HA1表达调节胶原蛋白生成

姜丽 1, 穆罕默德·加兹瓦尼, 张一飞, 陆建勤, 李吉龙, 杰凡, Chandrashekhar R甘地, 宋丽
附属公司

miR-122通过靶向肝星状细胞和抑制P4HA1表达调节胶原蛋白生成

姜丽等人。 肝脏病学杂志。 2013年3月。

摘要

背景和目标：微RNA（MicroRNAs，miRNAs）已被证明通过影响其靶基因表达而参与许多生物过程。miR-122在肝癌发生中已被广泛研究。然而，miR-122在肝纤维化中的作用尚不清楚。

方法：通过实时PCR评估miR-122、脯氨酸4-羟化酶亚基α-1（P4HA1）和CCAAT/增强子结合蛋白α（C/EBPα）的mRNA表达水平。采用Western blot和免疫荧光分析P4HA1、C/EBPα和I型胶原α1（COL1A1）的蛋白表达水平。MTT法检测细胞增殖。染色质免疫沉淀（ChIP）检测C/EBPα与miR-122启动子的结合活性。

结果：miR-122在反式激活的HSC和经CCl（4）治疗的小鼠肝脏中的表达显著降低。miR-122的过度表达抑制了LX2细胞的增殖。我们还证明P4HA1是miR-122的靶基因。在HSC和小鼠肝脏中，PAHA1的mRNA表达水平与miR-122的mRNA水平呈负相关。miR-122的过度表达通过靶向位于P4HA1 mRNA 3'-UTR的结合位点显著减弱了P4HA1的表达。我们进一步表明，miR-122过度表达导致胶原成熟度和ECM生成降低。最后，活化的HSC中C/EBPα与miR-122启动子的结合活性显著降低。

结论：我们的研究表明，miR-122可能在负性调节HSC胶原生成中发挥重要作用，并且在HSC中靶向表达miR-122可以代表一种治疗肝纤维化的新策略。

PubMed免责声明

利益冲突声明

利益冲突

参与本研究的作者声明，他们没有任何关于本手稿的资金或利益冲突的信息需要披露。

数字

图1
图1。miR-122在活化的HSC和纤维化肝脏中下调
（A） CCl处理的小鼠肝脏中miR-122的表达降低4（B）培养激活的大鼠HSC中miR-122的表达降低。（C） CBDL激活的大鼠HSC中miR-122的表达降低。用qPCR检测miR-122的表达。n=每组6个。结果表示为平均值±SE。第页<0.05.
图2
图2。miR-122过度表达抑制HSC增殖
（A） 用miR-122或对照miRNA转染LX2细胞。转染5天后，用MTT法检测细胞增殖。（B） 按照上述方法对细胞进行转染，然后去除血清。血清剥夺72小时后，通过MTT法测定细胞增殖。（C）密件抄送和IGFR-1型用qPCR检测miR-122转染LX-2细胞的mRNA表达。数值为三个独立实验的平均值±SE(第页<0.05). U.T，未经治疗。
图3
图3。miR-122通过靶向3′-UTR下调P4HA1的表达P4HA1型信使核糖核酸
（A） qPCR检测miR-122转染细胞中胶原1A1的mRNA表达。n=每组6个。CCl患者肝脏P4HA1的（B和C）mRNA（B）和蛋白（C）表达水平4-用qPCR和Western blot分析经处理或经油处理的CD-1小鼠。n=每组6个。用qPCR和Western blot分析培养的活化HSC中P4HA1的（D和E）mRNA（D）和蛋白（E）表达水平。n=每组6个。通过qPCR和Western印迹分析CBDL激活的HSC中P4HA1的（F和G）mRNA（F）和蛋白（G）表达水平。n=每组6个。用miR-122模拟物或非特异性对照miRNA模拟物转染（H和I）HSC。P4HA1型24 h后（h）用qPCR分析mRNA表达；治疗后36 h，用Western blot检测P4HA1的蛋白表达水平（I）。n=3。第页<0.05 (与。控制miRNA）。（J） 用荧光素酶构建物转染HSCP4HA1型-3′-UTR，在存在miR-122模拟物或非特异性对照miRNA模拟物的情况下。转染24小时后进行荧光素酶检测。（K） HSC转染有P4HA1型-在存在miR-122模拟物或非特异性对照miRNA模拟物的情况下，构建具有miR-122结合位点缺失的3′-UTR荧光素酶。转染24小时后进行荧光素酶检测。面板中显示的数据代表平均值±SE。n=3；第页<0.05 (与。控制miRNA）。U.T，未经治疗。
图4
图4。miR-122过度表达降低胶原蛋白成熟
用miR-122模拟物或非特异性对照miRNA模拟物转染HSC。转染后36小时，（A）用Western blot分析成熟Col1A1的表达，（B）在不渗透的情况下对I型胶原进行免疫荧光染色。棒材：50μm。U.T，未经治疗。
图5
图5。C/EBP表达减少一激活的HSC中可能导致miR-122的低表达
（A和B）mRNA表达水平HNF-4型（A） 和C/EBPα（B） ，在CCl的肝脏中4-用qPCR分析经处理或经油处理的CD-1小鼠。n=每组6个。（C和D）mRNA表达水平C/EBPα用qPCR检测培养中激活的HSC（C）和CBDL激活的HSCs（D）。n=每组6个。结果表示为平均值SE*第页<0.05. （E） Western blot检测CBDL激活的HSC中C/EBPα的蛋白表达水平。n=每组6个。（F） 用ChIP法分析CBDL激活的大鼠HSC中C/EBPα与miR-122启动子的结合活性。用qPCR分析含有推测C/EBPα结合位点的片段。结果表示为平均值SE*第页<0.05.
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