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.2012年11月；36(11):1851-62.
doi:10.1111/j.1530-0277.2012.01798.x。 Epub 2012年4月6日。

氧化应激调节KLF6Full及其剪接变体

拉奎尔·厄塔松 1, 弗朗西斯科·哈维尔·库贝罗, 娜塔莉亚·尼托
附属公司

氧化应激调节KLF6Full及其剪接变体

拉奎尔·厄塔松等。 酒精临床实验研究. 2012年11月.

摘要

背景：活性氧（ROS）的诱导是酒精肝毒性的中心机制。KLüppel-like factor 6（KLF6）是一种转录因子和抑癌基因，是对损伤的早期反应基因；然而，活性氧和酒精对KLF6诱导的影响尚不清楚。本研究的目的是研究两种来源的活性氧（ROS）、细胞色素P450 2E1（CYP2E1）、NAD（P）H醌氧化还原酶（NQO1）和酒精对KLF6（Full）表达的调节、剪接到KLF6_V1和KLF6~V2的作用以及对下游靶点TNFα的影响。

方法和结果：与对照细胞相比，CYP2E1表达的HepG2细胞中内源性ROS的产生诱导了KLF6（Full）及其剪接变体的mRNA和蛋白表达。与花生四烯酸（AA）、β-萘黄酮和H（2）O（2）等促氧化剂孵育可进一步增强KLF6（Full）及其剪接变体。维生素E（防止脂质过氧化）和二烯丙基硫（CYP2E1抑制剂）阻断了AA对KLF6（Full）及其剪接形式的影响。甲萘醌和百草枯，2种通过NQO1代谢的前氧化剂，以硫醇依赖的方式诱导KLF6（Full）mRNA。抗氧化剂和NQO1抑制剂抑制了KLF6（Full）及其剪接变异体mRNA的甲萘醌依赖性增加。此外，与对照组相比，慢性酒精喂养大鼠的原代肝细胞和肝脏脂质过氧化、H（2）O（2）和CYP2E1升高，但GSH较低，KLF6 mRNA的增加约2倍。抑制p38磷酸化进一步上调CYP2E1和AA对KLF6（Full）mRNA的影响，而抑制JNK和ERK1/2磷酸化均降低。KLF6_V1而非KLF6（完全）消融显著增加巨噬细胞TNFα水平；因此，TNFα成为KLF6_V1的下游靶点。

结论：活性氧对KLF6（Full）表达及其剪接变异体的调节的新作用可能在肝损伤和TNFα调节中发挥相关作用。

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数字

图1
图1。CYP2E1-表达细胞在缺乏或存在AA的情况下生成ROS
通过Western blot分析对照细胞和CYP2E1表达细胞的CYP2E2蛋白。信号的量化参考第一个控制，其赋值为1。以7-MFC为底物，通过荧光法监测CYP2E1活性。结果参考平均值±SEM(N个=3, **P（P）<0.01)（A）用pCi-Neo或pCi-Nee转染CYP2E1表达细胞-KLF6型完全向量和第2页第1页和GAPDH公司通过Northern blot分析表达（B）用0–30μM AA处理对照细胞和表达CYP2E1的细胞6小时（100%活力），并拍摄光显微照片（C）.细胞外h的时间-过程研究（1-9小时）2O（运行）2在0–30μM AA存在下（D）.细胞内H2O（运行）2和O2.−使用荧光探针DCFDA在25μM维生素E或5 mM二烯丙基硫（DAS）存在下30μM AA处理后6 h（E）和DHE（F）.（D）至（F）中的结果为平均值±SEM(N个=6; *P（P）<0.05和**P（P）AA-处理的<0.01与。未经处理，•P（P）<0.05, ••P（P）<0.01和•••P（P）CYP2E1表达细胞<0.001与。控制，■ ■ ■P（P）联合治疗<0.001与。AA处理）。
图2
图2。KLF6的表达完全及其在CYP2E1表达细胞中的拼接变体
的表达式KLF6型完全,KLF6_V1型和KLF6_V2型蛋白质经Western blot分析。信号的量化是指对照组中的平均信号，其赋值为1（A）.qRT-PCR用于KLF6型完全,KLF6_V1型和KLF6_V2型在对照细胞和CYP2E1表达细胞中（B）。在两个面板中，结果均表示为对照组的倍数增加，该对照组的数值为1（（B）中的虚线），并参考平均值±SEM(N个=3, ••P（P）<0.01和•••P（P）CYP2E1表达细胞<0.001与。控制）。
图3
图3。抗氧化剂增加KLF6完全
用15μM甲萘醌、100μM百草枯或100μMβ-萘黄素重复处理CYP2E1表达细胞6 h（A）或使用15μM甲萘醌进行长达24小时的时程研究（B）和KLF6型完全通过Northern blot分析评估表达情况。（A）中未处理的细胞和（B）中显示任何信号的第一个时间点的值为1。用30μM AA、20μM H处理对照细胞和CYP2E1表达细胞2O（运行）215μM甲萘醌或AA加H的组合2O（运行）2和AA加甲萘二酮6小时KLF6型完全通过Northern blot分析评估表达情况。斑点下所示信号的量化为N个=2.未经治疗的对照组的信号被赋值为1（C）.
图4
图4。抗氧化剂增加KLF6完全CYP2E1-表达细胞的拼接形式多于对照细胞
用30μM AA处理对照细胞和CYP2E1表达细胞（A）或使用15μM甲萘醌（B）持续6小时KLF6型完全及其拼接形式KLF6_V1型和KLF6_V2型通过qRT-PCR进行评估。结果表示为未经处理的对照组的倍数增加，数值为1（虚线），为平均值±SEM(N个=3; *P（P）<0.05, **P（P）<0.01和***P（P）治疗后<0.001与。控制和•P（P）<0.05, ••P（P）<0.01和•••P（P）CYP2E1表达细胞<0.001与。控制）。
图5
图5。抗氧化剂、NQO1和CYP2E1抑制剂可防止KLF6的增加完全及其拼接形式
表达CYP2E1的细胞与15μM甲萘醌孵育（A）和100μM百草枯（B）在没有或存在表达过氧化氢酶或SOD、2–10 mM GSH-EE、25μM维生素E和25μM双香豆素的腺病毒的情况下。表达CYP2E1的细胞也在0–0.2 mM BSO存在下与15μM甲萘醌孵育（C）和Northern blot分析用于评估KLF6型完全表达式。未处理细胞的值为1。对照细胞和CYP2E1表达细胞与0–30μM AA在25μM维生素E或5 mM二烯丙基硫（DAS）存在下孵育6 h，并表达KLF6型完全及其拼接形式KLF6_V1型和KLF6_V2型通过qRT-PCR进行评估（D）。结果表示为未经处理的对照组的倍数增加，该对照组的数值为1（虚线），为平均值±SEM(N个=3; **P（P）<0.01和***P（P）<0.001（对于经AA-处理的与。控制，•P（P）<0.05, ••P（P）<0.01和•••P（P）CYP2E1表达细胞<0.001与。控制和■P（P）<0.05,■ ■P（P）<0.01和■ ■ ■P（P）联合治疗<0.001与。AA处理）。
图6
图6。乙醇喂养大鼠的原代肝细胞和肝脏KLF6表达增加完全
H&E染色（A）喂食对照Lieber-DeCarli饮食的大鼠显示出最小的脂肪变性（左），而喂食乙醇的Lieber-DeCarli食物的大鼠则显示出门脉周围和中央周围的微小和宏观囊泡脂肪变性（右）（原始放大倍数=200倍）。细胞内和细胞外脂质过氧化水平（TBARS）（B），细胞内H2O（运行）2 （C）和GSH（D）Western blot分析对照组和乙醇喂养大鼠肝细胞中CYP2E1的表达（E）.诱导KLF6型完全肝细胞和全肝中的表达（F）用qRT-PCR法测定了乙醇喂养大鼠的血清。结果表示为未经治疗的对照组的折叠增加，其值为1。在所有面板中，结果均为平均值±SEM(N个=6–10, *P（P）<0.05, **P（P）<0.01和***P（P）乙醇<0.001与。控制）。
图7
图7。KLF6型完全应激激活激酶调节表达
对照细胞和CYP2E1表达细胞在p38（SB203580）、MEK1/2（PD95059）和PI3K（Wortmanin）磷酸化抑制剂存在下培养KLF6型完全通过Northern blot分析进行评估。未经处理的对照组被赋值为1（A）.qRT-PCR用于KLF6型完全在对照组和CYP2E1表达细胞中，用上述抑制剂孵育，并在没有抑制剂的情况下添加JNK磷酸化抑制剂SP60025（B）或存在30μM AA时（C）在所有面板中，结果表示为未经处理的对照细胞的倍数增加，数值为1，并参考平均值±SEM(N个=3; **P（P）AA-处理的<0.01与。控制，•P（P）<0.05, ••P（P）<0.01和•••P（P）CYP2E1表达细胞<0.001与。控制和■P（P）<0.05,■ ■P（P）<0.01和■ ■ ■P（P）共同治疗时<0.001与。AA处理）。
图8
图8。KLF6_V1消融上调AA存在下的TNFα
RAW 246.7巨噬细胞转染-982-肿瘤坏死因子α发起人。然后，与对照组进行联合转染，KLF6型完全或KLF6_V1型siRNA。在一些实验中，用30μM AA处理细胞3小时。转染48小时后，Luc活性通过转染效率校正，并用Renilla-Luc标准化（A）.通过ELISA测定各自上清液中分泌的TNFα（B）结果表示为平均值±SEM(N个=6;■P（P）<0.05,■ ■P（P）<0.01和■ ■ ■P（P）任何siRNA均<0.001与。控制和•P（P）<0.05, ••P（P）<0.01和•••P（P）<0.0 01 f或A A处理与。控制）。
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  • 研究资源：组成性雄激素受体和妊娠X受体异种生物信号的参考转录组。
    Ochsner SA、Tsimelzon A、Dong J、Coarfa C、McKenna NJ。 Ochsner SA等人。 摩尔内分泌学。2016年8月；30(8):937-48. doi:10.1210/me.2016-1095。Epub 2016年7月13日。 摩尔内分泌学。2016 PMID：27409825 免费PMC文章。
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    Hernández-Gea V、Hilscher M、Rozenfeld R、Lim MP、Nieto N、Werner S、Devi LA、Friedman SL。 Hernández-Gea V等人。 肝素杂志。2013年7月；59(1):98-104. doi:10.1016/j.jhep.2013.02.016。Epub 2013年2月26日。 肝素杂志。2013 PMID：23485523 免费PMC文章。

工具书类

    1. 比克JJ。克鲁珀因子：许多馅饼中有三个手指。生物化学杂志。2001;276(37):34355–8.-公共医学
    1. Black BE、Levesque L、Holaska JM、Wood TC、Paschal BM。识别结合Ran-GTP并调节核蛋白输出的NTF2相关因子。分子细胞生物学。1999;19(12):8616–24.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Blanchon L、Bocco JL、Gallot D、Gachon AM、Lemery D、Dechelotte P、Dastugue B、Sapin V。人类胎盘发育过程中KLF6和KLF4与妊娠特异性糖蛋白的共扩增。机械开发2001；105(1–2):185–9.-公共医学
    1. Bondy SC。乙醇毒性和氧化应激。毒物快报。1992;63(3):231–41.-公共医学
    1. Brenner DJ、Doll R、Goodhead DT、Hall EJ、Land CE、Little JB、Lubin JH、Preston DL、Preston RJ、Puskin JS、Ron E、Sachs RK、Samet JM、Setlow RB、Zaider M。低剂量电离辐射引起的癌症风险：评估我们真正了解的内容。美国国家科学院院刊，2003年；100(24):13761–6.-项目管理咨询公司-公共医学

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