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.2012年10月;21(5):1117-23.
doi:10.1007/s11248-012-9598-y。 Epub 2012年2月15日。

利用细菌人工染色体转基因技术将CreER(T2)表达靶向表达角蛋白8的小鼠简单上皮细胞

附属公司

利用细菌人工染色体转基因技术将CreER(T2)表达靶向表达角蛋白8的小鼠简单上皮细胞

李章等。 转基因研究. 2012年10月.

摘要

角蛋白8(K8)是一种II型角蛋白,与单层上皮中的I型角蛋白K18或K19相关。我们建立了一个细菌人工染色体(BAC)转基因小鼠系,表达插入内源性小鼠K8基因的三苯氧胺诱导的CreER(T2)。转基因小鼠系含有两份BAC转基因。为了确定CreER(T2)的表达特异性和诱导性,用Gt(ROSA 26)(ACTB-tdTomato-EGFP)荧光蛋白报告转基因小鼠系培育K8-CreER(T3)小鼠。我们证明了CreER(T2)和内源性K8基因具有相同的表达模式,并且三苯氧胺可以在所有K8表达组织中有效地诱导CreER的酶活性。该小鼠系将有助于研究简单上皮细胞发育和稳态中的基因功能,以及研究上皮癌组织谱系层次和起源细胞的身份。

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图1
图1
图表产生K8–CreER的战略T2段靶向BAC克隆。转基因,包括CreERT2段将IRES–GFP表达盒cDNA和Zeocin耐药基因插入BAC克隆RP23-234D2中K8基因的AUG翻译起始密码子。Zeocin在BAC重组过程中作为阳性选择标记。IRES公司内部核糖体进入位点。GFP公司绿色荧光蛋白
图2
图2
CreER表达的代表性定量RT-PCR分析T2段5周龄K8–CreER组织光谱中的GFP和内源性K8基因T2段BAC转基因小鼠。条形图显示了每个基因的任意相对表达水平,由膀胱中的表达水平标准化
图3
图3
不同小鼠组织内源性K8表达的免疫组织化学分析。酒吧=100微米
图4
图4
从K8到CreER组织中GFP表达的荧光显微镜分析T2段; 用三苯氧胺(2mg/40g/只小鼠/天,连续4天)和载体(玉米油)处理的mTmG小鼠。白色箭头显示剩余泄漏CreERT2段胸腺中的活性。酒吧=100微米
图5
图5
定量基因组DNA PCR分析表明K8–CreERT2段 线含有2份转基因。误差线代表来自2只野生型和3只转基因小鼠的结果的平均值和STD

类似文章

引用人

参考文献

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