Sumoylation of transcription factor Gcn4 facilitates its Srb10-mediated clearance from promoters in yeast

doi:10.1101/gad.184689.111

.2012年2月15日；26(4):350-5.

doi:10.1101/gad.184689.111。

转录因子Gcn4的Sumoylation促进其Srb10介导的酵母启动子清除

伊曼纽尔·罗索尼娜¹, 莎拉·邓肯, 詹姆斯·曼利

附属公司

PMID： 22345516
预防性维修识别码：下午3289883
内政部： 10.1101/gad.184689.111

转录因子Gcn4的Sumoylation促进其Srb10介导的酵母启动子清除

伊曼纽尔·罗索尼娜等。基因开发. 2012.

.2012年2月15日；26(4):350-5.

doi:10.1101/gad.184689.111。

作者

伊曼纽尔·罗索尼娜¹, 莎拉·邓肯, 詹姆斯·曼利

附属

¹哥伦比亚大学生物科学系，美国纽约10027。

PMID： 22345516
预防性维修识别码：项目经理3289883
内政部： 10.1101/gad.184689.111

摘要

小泛素相关修饰物（SUMO）是一种保守因子，在翻译后调节参与许多细胞过程的蛋白质，包括基因转录。我们之前证明，启动子结合因子在酵母中诱导基因激活期间发生酰化，但这些因子的特性以及酰化在其功能中的作用尚不清楚。这里我们显示，转录激活物Gcn4在两个特定赖氨酸残基上以取决于其结合DNA的能力的方式被酰化，这表明酰化发生在Gcn4与目标启动子结合之后。重要的是，这有助于在RNA聚合酶II募集后从这些启动子中清除激活物，从而防止靶基因的不当转录。此外，我们表明，清除sumoylated Gcn4需要蛋白激酶和介体复合物亚单位Srb10，将激活物去除与目标基因转录联系起来。我们的研究表明，蛋白sumoylation在转录激活过程中发挥了意想不到的作用。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
Gcn4在Lys 50和Lys 58处被酰化。(A类)通过HA和SUMO免疫印迹分析未经处理的细胞或通过添加SM诱导表达Gcn4-HA的细胞的HA免疫沉淀（参见补充图S1）。（星号）推测的sumoylated Gcn4亚型；（开放圆圈）未酰化的Gcn4亚型。(B类)对表达Gcn4-HA突变体或对照的诱导细胞进行HA免疫沉淀分析，如A类（ΔCT40）Gcn4缺乏40个C端氨基酸；（Ig）免疫球蛋白带。(C类)Gcn4结构图，显示可能的sumoylation位置（环绕S）。（DBD）DNA-结合域。

**图2。**
Gcn4-sumoylation有助于其清除活化的靶启动子。(A类,B类)野生型（wt）或K50,58R/sumoylation位点突变（mt）Gcn4-Flag和RNAP II占用的ChIP分析*ARG1*(A类)和*中央处理器2*(B类)在诱导后的指定时间启动子。粗网格线表示背景级别（即背景上的单倍）。*P（P）*-值（参见材料和方法）显示在括号中*在上面*相关的成对钢筋。(C类)标记和对照细胞全细胞提取物的GAPDH免疫印迹，诱导表达Gcn4-Flag-wt或Gcn4-Flag-mt 10分钟。在显示的暴露条件下，使用Flag标签，可以在野生型样品中检测到单一SUMO亚型（～70 kDa）。（†）非特定波段。(D类)CDK（Pho85或Srb10）磷酸化依赖性泛素介导的降解调节启动子结合或未结合Gcn4的模型。有关说明，请参阅文本。(E类)提取物的HA免疫印迹分析*电话85*或*pho85Δ*用DMSO或MG132处理的细胞，诱导表达Gcn4-HA-wt或Gcn4-HA-mt，然后用Stop Mix处理，如图所示。

**图3。**
Srb10在激活过程中起到清除靶启动子中Gcn4的作用，这是由Gcn4酰化促进的。(A类)标记和对照GAPDH免疫印迹分析*SRB10型*（+）或*srb10Δ*（Δ）在指定的持续时间和添加停止混合后诱导的细胞。(B类,C类)Gcn4-Flag或RNAP II占用的ChIP分析*ARG1公司*(B类)和*CPA2公司*(C类)发起人*SRB10型*或*srb10Δ*诱导后细胞达到指定时间。(D类)ChIP分析B类和C类，在中执行*srb10Δ*如图所示，表达Gcn4-wt或Gcn4-mt的细胞。

**图4。**
阻断Gcn4 sumoylation会导致*ARG1*在不存在Pho85的情况下。(A类)Gcn4-Flag或RNAP II占用的ChIP分析*ARG1公司*和*CPA2公司*发起人*pho85Δ*如图所示，诱导表达Gcn4-wt或Gcn4-mt后16分钟。(B类)RT-PCR分析*ARG1公司*和*CPA2公司*转录水平*pho85Δ*如图所示，诱导Gcn4-wt或Gcn4-mt表达后的细胞。数值标准化为Gcn4-wt表达细胞的指示基因转录水平。(C类)所示菌株的生长比较。在含有指示水平SM（1×0.5μg/mL）的培养基上，以五倍稀释系列发现菌株，并在指示的时间内生长。(D类)模型表明Gcn4 sumoylation在其Srb10介导的清除靶启动子中的作用。（1,2）启动子结合的Gcn4招募转录复合物，包括Srb10作为介体、Ubc9和SUMO的一部分，以激活目标启动子。转录启动后，Ubc9对Gcn4（3）进行酰化，标记其通过Srb10磷酸化介导的途径（4）清除，清除Gcn4的启动子和可能的其他因子（5），从而使启动子（1）重新激活。

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