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.1990年10月15日;265(29):17764-70.

培养近端肾小管上皮细胞和分离线粒体中肾线粒体谷氨酰胺酶的生物合成和加工

附属公司
  • PMID: 2211660
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培养近端肾小管上皮细胞和分离线粒体中肾线粒体谷氨酰胺酶的生物合成和加工

S Y佩雷拉等。 生物化学杂志. .
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摘要

大鼠肾近端小管上皮细胞的原代培养用于表征线粒体谷氨酰胺酶的生物合成和加工。当细胞在20μm羰基氰化物间氯苯腙存在下用[35S]甲硫氨酸标记时,只有一种与谷氨酰胺酶mRNA的初级翻译产物共迁移的72kDa肽被免疫沉淀。在较低浓度的羰基氰化物间氯苯腙下,合成了具有成熟谷氨酰胺酶和71-kDa肽特征的68-和65-kDa-肽。脉冲相实验表明,72-kDa细胞溶质前体可以被定量追踪以产生成熟的线粒体物种。观察到的动力学表明,71-kDa物种是输入途径中的中间产物。此外,65-kDa谷氨酰胺酶肽的合成速度比68-kDa-肽更快,这两种肽的最终合成比例分别为3:1。这些结果表明,四聚谷氨酰胺酶的一个亚基可能受到共价修饰。体外加工的特点是将分离的大鼠肝线粒体与谷氨酰胺酶前体孵育,谷氨酰胺酶是由酸化大鼠肾多聚(A+)RNA的体外翻译产生的。该系统产生了相同的加工反应序列。71-kDa中间产物的体外形成需要跨膜电位。谷氨酰胺酶的中间体和成熟形式都在线粒体中回收,并且对胰蛋白酶消化具有抗性。因此,谷氨酰胺酶前体迅速转移到线粒体内膜上,并经初步加工产生中间产物。随后对中间体进行处理,以产生构成成熟酶的两个肽。

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