跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2012年1月；23(2):247-57.
doi:10.1091/mbc。E11-09-0774。 Epub 2011年11月23日。

MINOS1是有丝分裂蛋白复合物的保守成分，是线粒体功能和嵴组织所必需的

Alwaleed K Alkhaja公司 1, 丹尼尔·詹斯, 米罗斯拉夫·尼科洛夫, 米莱娜·武科蒂奇, 奥列克桑德·利托夫琴科, 费比安·卢德维格, 沃尔夫冈·施利布斯, 迪特马尔·里德尔, 亨宁·厄劳布（Henning Urlaub）, 斯特凡·雅各布斯, 马库斯·德克尔
附属公司

MINOS1是有丝分裂蛋白复合物的保守成分，是线粒体功能和嵴组织所必需的

Alwaleed K Alkhaja公司等。 分子生物学细胞. 2012年1月.

摘要

线粒体的内膜特别富含蛋白质，具有独特的形态特征，包括大的内陷、线粒体嵴和靠近外膜的内界膜。线粒体内膜蛋白似乎在内膜中分布不均匀，而是组织成功能不同的亚室。内膜的组织是如何实现的尚不清楚。我们鉴定了MINOS1/MIO10（C1orf151/YCL057C-A），一种保守的线粒体内膜蛋白。mio10-突变酵母细胞在非发酵碳源上生长受到影响，表现出线粒体形态改变。在超微结构水平上，突变线粒体表现出内膜组织的缺失。蛋白质组学分析表明，MINOS1/Mio10是人类和酵母线粒体中丝裂霉素/Fcj1复合物的一种新成分。因此，我们的分析揭示了对线粒体内膜组织机构组成的新见解。

PubMed免责声明

数字

图1：
图1：
MINOS1和Mio10是保守的线粒体内膜蛋白。（A） Mio10同源物的比对（ClustalW 2.0.11）。黑匣子表示至少有四个物种中存在相同的残留物；灰色方框表示类似的氨基酸（艾德曼等。, 1991).Sc公司,酿酒酵母;银,棉蚜;编号,粗糙脉孢菌;嗯,小家鼠；Hs公司,智人。（B） 组织酿酒酵母Mio10.黑盒，预测跨膜结构域（TM）。（C） 免疫荧光法检测MINOS1和亲环素D在Vero细胞中的亚细胞定位。棒材，10μm。（D） MINOS1亚线粒体定位和（E）膜结合的Western blot分析材料和方法（F）通过Western blotting分析Mio10的亚线粒体定位和（G）膜结合。T表示总数；S和P表示超速离心后的上清液和颗粒。TX-100，Triton®声波风廓线仪X-100；PK，蛋白酶K。
图2：
图2：
MINOS1和Mio10与F无关1F类0ATP酶。（A） 细胞色素免疫共沉淀c（c）氧化酶（COX）和F1F类o个洋地黄素溶解后分离的HEK293T线粒体ATP酶。洗脱液通过SDS-PAGE和Western blotting进行分析。合计1.5%；洗脱液，100%。（B） 孤立野生型（WT）和Atp20ZZ公司线粒体溶解并进行IgG色谱。用SDS-PAGE分析总组分和洗脱组分，然后用所示抗体进行免疫印迹分析。总计，3%；洗脱液，100%。（C） 重量，mio10Δ,atp20（atp20）Δ和atp2（atp2）在可发酵（葡萄糖）和不可发酵（甘油）培养基上连续10倍稀释液中发现Δ酵母细胞。（D） 来自WT的线粒体（Mito），mio10Δ、和fcj1型Δ用SDS-PAGE分离，Western blotting分析。（E） WT和mio10Δ经BN-PAGE分离，Western blotting分析。星号表示非特异性交叉反应。
图3：
图3：
线粒体形态在百万分之十Δ. 荧光显微镜分析酿酒酵母野生型，atp20（atp20）Δ,10百万Δ和fcj1型用质粒pVT100U-mitoGFP转化的Δ（A–D）细胞（Westermann和Neupert，2000）以可视化线粒体形态。使用配备100倍物镜和异硫氰酸荧光素过滤器的DeltaVision Spectris荧光显微镜分析细胞。在聚焦细胞的中间平面后，每幅图像以0.5μm的间隔拍摄10–15张Z截面图像。使用softWoRx对图像进行反褶积。棒材，2.5μm。
图4：
图4：
Mio10和MINOS1是Fcj1/Mitofilin（MINOS）复合物的一部分。（A） 从WT和Mio10-链霉亲和素FLAG（Mio10旧金山)被溶解并受到条纹-转氨酶-脑葡萄糖色谱法。洗脱液在SDS-PAGE上分离，并用胶体考马斯染色。每个凝胶条被切成23片，用胰蛋白酶消化蛋白质。肽通过MS分析。（B）总提取物和洗脱液组分斯特雷普-使用野生型或Mio10的Tactin-Sepharose色谱法旧金山线粒体提取物用SDS-PAGE分离并用Western blotting分析。总计3.0%；洗脱液，100%。（C） WT和Mio10的可溶性线粒体旧金山通过尺寸排除色谱进行分离，并通过Western blotting进行分析。（D） 重量，mio10Δ、和fcj1型在合成可发酵（葡萄糖）和合成不可发酵（甘油）培养基上连续10倍稀释液中发现Δ酵母细胞。（E） SILAC方法分析含MINOS1复合物的示意图概述。在含有轻或重同位素的培养基中生长的HEK293T细胞的线粒体被溶解，并与MINOS1抗体或对照抗体进行共免疫沉淀（Co-IP）。将洗脱液混合，用SDS-PAGE分离，并用胶体考马斯染色。将凝胶条切成23片，用胰蛋白酶消化蛋白质。通过LC-MS/MS分析肽。（F）通过Co-IP和SILAC-MS鉴定MINOS10-相关蛋白。通过MaxQuant和Mascot使用IPI人类蛋白数据库分析LC-MS/MS中的RAW MS文件。对Maxquant的结果进行分析，并用R进行可视化。红色圆点表示富集的蛋白质具有高标准化的重/轻比值（H/L）。前进，F（H，MINOS1；L，控制）；反转，R（H，对照；L，MINOS1；反转比率以进行绘图）。（G） 将分离自HEK293T细胞的线粒体溶解，并用MINOS1和对照抗体Total（1.5%）进行Co-IP；洗脱100%。洗脱液用SDS-PAGE分离并用Western blotting分析。（H） HEK239T细胞的可溶性线粒体通过大小排阻色谱进行分离，并通过Western blotting进行分析。星号表示非特异性交叉反应。
图5：
图5：
Cristae形态在10百万Δ. （A） 电子显微镜酿酒酵母重量，atp20（atp20）Δ,10百万Δ和fcj1型高压冷冻后的Δ细胞（HPF）。（B） 基于HPF固定WT（n=49）电子显微镜图像的不同类型线粒体的统计分析，atp20（atp20）Δ（n=51），10百万Δ（n=61），以及fcj1型Δ（n=57）单元格。正常、中间和类离子线粒体类型的详细视图。（C） WT的电子显微镜，atp20（atp20）Δ,百万分之十Δ和fcj1型KMnO后的Δ细胞4固定。（D） WT的详细视图，第20页Δ,10百万Δ和fcj1型Δ线粒体如C.Bars所示，1μm（A，C），200 nm（B，D）。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Arnold I、Bauer MF、Brunner M、Neupert W、Stuart RA。酵母线粒体F1F0-ATPase：新的亚基e与Tim11相同。FEBS信函。1997;411:195–200.-公共医学
    1. Arnold I、Pfeiffer K、Neupert W、Stuart RA、Schägger H。酵母线粒体F1F0-ATP合成酶作为二聚体存在：三种二聚体特异性亚单位的鉴定。EMBO J.1998；17:7170–7178.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Arnold I，Pfeiffer K，Neupert W，Stuart RA，Schägger H.酵母线粒体j亚基分离和ATP18基因断裂的ATP合成酶。生物化学杂志。1999;274:36–40.-公共医学
    1. Arselin G、Giraud MF、Dautant A、Vaillier J、Brèthes D、Coulary-Salin B、Schaeffer J、Velours J。e亚基跨膜结构域的GxxxG基序参与线粒体膜中酵母ATP合酶复合体的二聚/齐聚。欧洲生物化学杂志。2003;270:1875–1884.-公共医学
    1. Arselin G、Vaillier J、Salin B、Schaeffer J、Giraud MF、Dautant A、Brèthes D、Velours J。酵母ATP合成酶亚基e和G量的调节改变线粒体嵴形态。生物化学杂志。2004;279:40392–40399.-公共医学

出版物类型