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.2011年11月3日10:135。
doi:10.1186/1476-4598-10-135。

一项综合基因组分析揭示了微RNA和基因表达与人类乳腺癌细胞耐药性的相关性

山本优助 1, Yusuke Yoshioka先生, 卡霍·米诺拉, 高桥良美, 富田武下, Toshiki Taya公司, Reiko Horii公司, 福冈弥弥生, 加藤隆, 小坂信义, Ochiya高弘
附属公司

一项综合基因组分析揭示了微RNA和基因表达与人类乳腺癌细胞耐药性的相关性

山本优助等。 Mol癌症. .

摘要

背景：癌症耐药性的获得导致了治疗失败，但其机制尚未阐明。最近的观察表明，染色体改变引起的异常表达的microRNA（miRNA）在癌症的发生和发展中起着关键作用。在这里，我们进行了综合基因组分析，结合基于阵列的比较杂交、miRNA和基因表达微阵列来阐明耐药机制。

结果：通过MCF7-ADR中的基因组方法；作为一种耐药乳腺癌细胞系，我们的结果反映了耐药的独特特征，包括通过基因组扩增的MDR1过度表达和miRNA-介导的TP53INP1下调。通过对12个表达下调且基因组区域被删除的miRNA进行功能增益研究，我们发现miR-505是一种新型的肿瘤抑制miRNA，通过诱导凋亡抑制细胞增殖。我们还发现，Akt3与miR-505呈负相关，调节MCF7-ADR的药物敏感性。

结论：这些发现表明，各种基因和miRNA协同调节癌细胞的耐药性，因此耐药性的获得受到基因组状态、基因和miRNA表达变化的复杂控制。

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数字

图1
图1
综合基因组分析以阐明MCF7-ADR（耐药乳腺癌细胞系）的耐药性（A）综合基因组分析的示意图。在获得乳腺癌细胞（MCF7；亲本细胞系和MCF7-ADR；耐药细胞系）耐药性的过程中，出现了大量的基因组改变，如扩增或缺失，以调节基因和miRNA的表达。基于aCGH，我们选择了miRNAs和基因组畸变区上的基因，以进一步分析其靶基因及其相关联的通路生物信息学（B）MCF7和MCF7-ADR与正常人类女性基因组的aCGH分析。蓝线表示正常vs.MCF7，红线表示正常vs.MCF7-ADR（顶部）。放大或删除的基因组区域（折叠变化>3）突出显示（底部）。（C） 位于扩增或缺失基因组区域的基因和miRNAs数量（FC>3）。（D和E）位于异常基因组区域的基因的表达趋势。426个来自MCF7扩增区的基因和6个来自MCF7-ADR扩增区的基因绘制在每个散点图的左侧面板中。来自MCF7缺失区域的6个基因和来自MCF7-ADR缺失区域的25个基因绘制在每个散点图的右侧面板中。
图2
图2
MDR1的基因组扩增和过度表达，以及TP53INP1的一些miRNA调节（A）与MCF7相比，MCF7-ADR中多药耐药基因（MDR1）区域扩增20倍。（B和C）分别通过微阵列和实时PCR检测MCF7-ADR中MDR1基因的过度表达。（D） Targetscan预测的miRNA靶基因散点图。MCF7-ADR中超过15%的上调miRNA（74个miRNA）被预测可能与这些基因的3'-UTR结合。其中三种蛋白（TP53INP1、PURB和TRPS1）的表达水平明显不受调控。（E） 可能与TP53INP1基因3'UTR结合的miRNAs散点图。（F和G）通过实时PCR确认TP53INP1基因、miR-130和miR155的表达。在实验中，用一式三份的决定因素计算标准差。
图3
图3
乳腺癌细胞上调和下调miRNA的通路富集分析（A）MCF7和MCF7-ADR的GO分析图。在与MCF7及MCF7-AD的比较中，预测5，137个基因和3，579个基因分别为74个上调miRNA和32个下调miRNA的miRNA靶候选基因。利用这些预测基因，选择了富集路径，如表S1所示。（B） Wnt信号通路。在Wnt信号通路图中绘制了74个miRNA靶基因（左），绘制了32个miRNA-靶基因（右）。红色方框表示高表达基因，绿色方框表示低表达基因。
图4
图4
MCF7-ADR耐药相关miRNA的筛选（A）基于aCGH的MCF7和MCF7-ADR基因组状态的直接比较。修改后的图1B显示了MCF7和MCF7-ADR之间基因组状态的差异（FC>2）。（B） 与MCF7相比，MCF7-ADR中位于扩增或缺失基因组区域的基因和miRNAs数量（FC>2）。（C） 位于MCF7-ADR中缺失基因组区域的49个miRNA的散点图。（E） MCF7-ADR中缺失和下调的12个miRNAs（miR-23b、miR-25、miR-27b、miR93、miR-106b、miR189、miR-489、miR-505、miR-542-5p、miR-565、miR652和let-7d）重叠，是MCF7-AD中耐药的候选基因，稳定表达荧光素酶。所有miRNAs均在20 nM下转染。转染72小时后，通过MCF7-ADR-Luc细胞中的荧光素酶活性评估细胞生长(n个=每组3-6人）。P<0.05。
图5
图5
miR-505通过诱导MCF7-ADR细胞凋亡抑制细胞生长（A）图像显示在72小时内用miR-505（顶部）和对照miRNA（底部）转染的典型MCF7-ADR细胞。（B） 与MCF7相比，MCF7-ADR miR-505位点的DNA拷贝数被删除。（C） 进行实时RT-PCR分析以确定miR-505在亲本细胞系MCF7和耐药细胞系MCF 7-ADR中的表达水平。误差栏表示单个实验中三次测定的标准偏差。P<0.05。（D） ●●●●。转染72小时后，在miR-505或对照miRNA-转染的MCF7-ADR细胞中检测到在DOC（1 nM）存在或不存在的情况下caspase-7活性。n=6，P<0.001。（E） 通过Hoechst染料染色，在DOC（1 nM）存在或不存在的情况下，对浓缩和碎片凋亡细胞进行计数。n＝4，P＜0.05。显示平均值±S.D。（F） 凋亡细胞核凝聚和碎裂的图像。用miR-505（顶部）或对照miRNA（底部）转染72小时后，观察到浓缩细胞和碎片细胞。白色箭头显示培养物中的凋亡细胞。
图6
图6
Akt3的表达与miR-505呈负相关，与MCF7-ADR细胞的耐药性相关（A）MCF7-ADR细胞中上调的Akt3基因2个探针的散点图。（B） miR-505或对照miRNA-转染细胞中Akt3的实时RT-PCR分析。用miR-505或对照miRNA转染72小时后，测定Akt3的表达水平。表达水平归一化为GAPDH表达水平。N=9，显示平均值±S.D。（C） 在1、10和20 nM DOC条件下，Akt3下调诱导MCF7-ADR细胞生长停滞。通过荧光素酶活性计算细胞生长。n=3，*，P<0.05，0.01.
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    1. Leslie EM、Deeley RG、Cole SP。多药耐药蛋白1、MRP1（ABCC1）和相关转运体的毒理学相关性。毒理学。2001;167:3–23. doi:10.1016/S0300-483X（01）00454-1。-内政部-公共医学
    1. Renes J，de Vries EG，Jansen PL，Muller M.MRP家族的（病理）生理功能。抗药性更新。2000;3:289–302. doi:10.1054/drup.2000.0156。-内政部-公共医学
    1. Leonessa F，Clarke R.ATP结合盒转运体与乳腺癌耐药。内分泌相关癌。2003;10:43–73. doi:10.1677/erc.0.0100043。-内政部-公共医学
    1. Ambros V.动物microRNA的功能。自然。2004;431:350–355. doi:10.1038/nature02871。-内政部-公共医学

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