跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

HTTP服务器

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并且被安全地传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2011年10月15日；25(20):2125-36.
doi:10.1101/gad.17276711。 Epub 2011年10月6日。

NF-κB对衰老相关分泌表型的控制促进衰老并增强化疗敏感性

钱玉琛 1, 克劳迪奥·斯库波, 小窝王, 方雪萍, 布莱恩·巴尔格利, 杰西卡·博尔登, 普雷姆·普雷姆斯里鲁特, 罗伟军（Weijun Luo）, 阿古斯汀·奇卡斯, Cheng S Lee先生, 斯科特·C·科根, 斯科特·W·洛
附属公司

NF-κB对衰老相关分泌表型的控制促进衰老并增强化疗敏感性

钱玉琛等。 基因开发. .

摘要

细胞衰老是肿瘤发生的有力屏障，有助于某些化疗药物的抗肿瘤活性。衰老细胞经历由RB和p53控制的稳定细胞周期阻滞，此外，还表现出衰老相关分泌表型（SASP），涉及产生因子来加强衰老阻滞，改变微环境，并触发对衰老细胞的免疫监测。通过对衰老染色质的蛋白质组学分析，我们确定核因子-κB（NF-κB）亚单位p65是积累在衰老细胞染色质上的主要转录因子。我们发现NF-κB作为SASP的主调节器，影响的基因数量超过RB和p53的总和。在培养的成纤维细胞中，NF-κB的抑制导致自然杀伤（NK）细胞逃避免疫识别，并与p53失活协同作用以绕过衰老。在小鼠淋巴瘤模型中，NF-κB抑制绕过治疗诱导的衰老，产生耐药性、早期复发和生存率降低。我们的结果表明，NF-κB控制衰老程序的细胞自主性和非细胞自主性方面，并确定NFκB的肿瘤抑制功能有助于癌症治疗的结果。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
NF-κB在衰老细胞中被激活。(A类)质谱鉴定的18种转录因子的散点图（已鉴定蛋白质的完整列表，请参阅补充表1）。该行表示的值为年=x个这意味着生长和衰老细胞的表达是相同的。(B类)增加p65与衰老染色质部分的结合。从H-Ras诱导的生长（包含空载体，缩写为V）和衰老IMR-90细胞中分离出染色质组分V12版本并使用所示抗体进行Western blotting分析。H3被用作负荷控制。(C类)衰老细胞中Ser 536上p65的过度磷酸化。生长和H-Ras的全细胞裂解物V12版本-使用所示抗体通过Western blotting分析诱导的衰老IMR-90细胞。p53、p16的积累墨水4a和第15页墨水4b蛋白质被显示为衰老标记。总p65用作负载对照。(D类)衰老细胞显示p65的核移位和积累。H-Ras诱导IMR-90细胞生长和衰老V12版本或足叶乙甙（100μM）用抗p65抗体进行免疫染色(顶部面板）并用DAPI进行埋头染色(底部面板），以显示SAHF形成。(E类)使用所示抗体通过Western blotting分析生长期和足叶乙甙诱导的衰老IMR-90细胞的全细胞裂解物。(F类)p65的核移位与衰老相一致。含有Ras的IMR-90细胞V12版本-ER用4-OHT（200μM）处理指定时间。用抗p65抗体对细胞进行免疫染色(顶部面板）并用DAPI进行埋头染色(底部面板）。(G公司)与下述条件平行的细胞全细胞裂解物F类收集并使用所示抗体进行Western blotting分析。
图2。
图2。
NF-κB介导SASP。(A类)IMR-90细胞感染了带有或不带有H-Ras的指示shRNAs第12版以抗萤火虫荧光素酶（Luc.）的.shRNA作为对照。在完成选择后8天收集全细胞裂解物，并使用所示抗体进行Western blotting分析。总ERK用作负荷控制。(B类)IMR-90细胞差异表达基因的层次聚类分析，这些差异表达基因分别表达带有和不带有H-Ras的shRNAV12版本使用经Western blotting（shp65-1）显示出最佳击倒效率的shRNA对抗p65。(C类)p65功能丧失后显著下调基因的GO分析(P（P）< 0.05). 通过比较带有shRNA和p65的样本与H-Ras中荧光素酶的样本，确定差异表达基因V12版本-诱导IMR-90细胞衰老。(D类)包含GO术语“免疫反应”的基因热图。p65缺失显著下调免疫反应基因(P（P）= 3.7 × 10−2本杰米尼修正）。(E类)p65功能的抑制可消除衰老细胞中IL-6、IL-8、CXCL1和ICAM-1的诱导作用。提取总RNA并用RT-qPCR对所示转录物进行引物集分析。表达标准化为β-肌动蛋白的表达，并表示为相对于生长的IMR-90细胞的倍数变化。数值为两个独立样本的平均值+扫描电镜，带有三份qPCR。（矢量）矢量；（右）H-RasV12版本; 抗荧光素酶（Luc.）shRNA；（p65-1和p65-2）两个针对p65的shRNA。(F类)NF-κB抑制剂BAY11-7082（BAY）也可阻止衰老细胞中IL-6、IL-8、CXCL1和ICAM-1的诱导。IMR-90细胞感染了带有或不带有H-Ras的指示shRNAsV12版本选择完成后8天，在收获前用10μM BAY11-7082处理衰老的IMR-90细胞2 d。表达归一化为β-肌动蛋白的表达，并表示为相对于生长细胞（包含载体）的折叠变化。数值为具有三份qPCR的两个独立样本的平均值+SEM。(G公司)NF-κB是NK细胞识别和杀伤所必需的。表达所示载体的IMR-90细胞与YT细胞（人类NK细胞系）共培养12小时。将附着的活的衰老细胞用结晶紫染色。在外径595处进行结晶紫定量，并将细胞毒性百分比计算为存在YT细胞时相对于在没有YT细胞的情况下培养的衰老细胞的结晶紫吸光度。数值代表三个独立实验的平均值+SEM；（*）P（P）<0.05使用学生的t吨-测试。
图3。
图3。
κB与p53协同作用促进衰老。(A类)用于同时敲除p65和p53的多顺反子shRNA结构的示意图。（Tan）串联发夹。使用经Western blotting（shp65-1）显示出最佳击倒效率的shRNA对抗p65。(B类)p53和p65表达的共同抑制。IMR-90细胞感染了指示的shRNAs和H-RasV12版本选择后8天收集全细胞裂解产物，并使用所示抗体进行Western blotting分析。Tubulin显示为加载控件。(C类)p53和p65的共同抑制绕过衰老。感染带有或不带有H-Ras的指定shRNAs的IMR-90细胞V12版本对BrdU掺入后8天进行分析。数值代表两个独立实验的平均值+SEM；(*)P（P）<0.005，使用学生的t吨-测试。(D类)用指示的shRNA和H-Ras感染的IMR-90细胞V12版本选择后8d，在增加细胞密度的条件下进行电镀。细胞再培养2周，用结晶紫染色，并分析菌落形成。(E类)IMR-90细胞被指示的shRNAs感染，并被H-Ras触发衰老V12版本或100μM足叶乙甙。选择后8天，对细胞进行SA-β-半乳糖活性测定。数值代表三个独立实验的平均值+SEM；(*)P（P）<0.05使用学生的t吨-测试。(F类)BJ细胞感染了指示的shRNAs和H-RasV12版本触发衰老。选择后8天检测细胞SA-β-gal活性。数值代表三个独立实验的平均值+SEM；(*)P（P）<0.05使用学生的t吨-测试。(G公司)BJ细胞感染了带有或不带有H-Ras的指示shRNAsV12版本在选择后8天对细胞进行BrdU掺入分析。数值代表三个独立实验的平均值+SEM；（*）P（P）<0.05使用学生的t吨-测试。
图4。
图4。
使用四环素调节的p65 shRNA生成Myc-Bcl-2驱动的淋巴瘤(A类)携带Rosa-rtTA和TRE-shRNA的4-5周龄雌性小鼠的骨髓被Myc和Bcl-2共表达载体感染。将细胞移植到含有IL-7的前B细胞培养基中1周。(B类)Dox治疗6天后，有效降低p65。单元格来自A类使用或不使用Dox（1μg/mL）处理指定时间，收集全细胞裂解物并使用指定抗体进行Western印迹分析。分类B220+以野生型动物的细胞作为对照。(C–E类)受体动物的淋巴母细胞肿瘤。淋巴结苏木精伊红染色(C类)，脾脏(D类)和肝脏(E类)显示淋巴母细胞疾病。（W） 脾白髓；（R） 脾红髓；淋巴瘤浸润两者。(F类)Myc-和Bcl-2-驱动的前B细胞对化疗药物诱导的凋亡具有抵抗力。单元格来自A类未经治疗或用ADR（250 ng/mL）或ABT-737（10μM）在体外治疗24小时。收集全细胞裂解物，并使用所示抗体通过Western blotting进行分析。(G公司)化疗药物治疗不会导致体内坏死。对患有Dox淋巴瘤的小鼠进行治疗或单次给予200μL剂量的CTX（30 mg/mL）。7天后，收集淋巴结，制备单细胞悬液，分类CD43−B细胞，并使用所示抗体进行免疫印迹分析。
图5。
图5。
NF-κB的抑制作用损害了药物诱导的衰老。(A类)NF-κB的激活发生在化疗诱导的衰老淋巴瘤中。对接受或未接受Dox治疗的淋巴瘤小鼠注射单剂量200μL CTX（30 mg/mL）(n个每种情况下=2，CTX未处理对照除外）。收集这些小鼠的淋巴结，并对其进行CD43分类−制备A细胞、B细胞和全细胞裂解物并使用指示的抗体通过蛋白质印迹进行分析。(B类)p65功能的丧失绕过了药物诱导的衰老。注射CTX后7天，采集非Dox（p65表达）和非Dox小鼠（p65敲除）的淋巴结，冷冻切片，分析SA-β-gal活性，并用曙红进行复染。(C–F类)差异表达NF-κB靶点的热图(C类)，细胞周期(D类)，DNA复制(E类)和细胞因子-细胞因子受体相互作用基因(F类)在每种指定条件下（有关基因的完整列表，请参阅补充表3）。(G公司)抑制p65功能可促进CTX治疗后的细胞生长。CTX注射7天后，将200μL BrdU溶液（10 mg/mL）腹腔注射（i.p.）非Dox（p65表达）和on-Dox（p65敲除）小鼠，2 h后处死。采集这些小鼠的淋巴结，冷冻切片，BrdU免疫染色（红色），DAPI免疫染色（蓝色）。值表示至少三只独立动物的平均值+SEM；(*)P（P）<0.05使用学生的t吨-测试。(H（H）)p65功能丧失可消除NK细胞浸润。注射CTX后7天，采集非Dox（p65表达）和非Dox小鼠（p65敲除）的淋巴结，制备单细胞悬液，并通过流式细胞术分析是否存在特定免疫细胞类型。总CD45.2的百分比+显示单元格。值表示至少三只独立动物的平均值+SEM；(*)P（P）<0.05使用学生的t吨-测试。
图6。
图6。
NF-κB抑制导致小鼠淋巴瘤化疗耐药和生存率低下。(A类)p65功能丧失导致化疗耐药淋巴瘤。通过CTX治疗后淋巴瘤可触及性测定的无瘤生存率的Kaplan-Meier分析。第0天等于CTX治疗日。曲线反映了off-Dox（p65-expressing）（黑线，n个=15）和Dox（p65击倒）（红线，n个=15）携带淋巴瘤的小鼠接受CTX治疗。(B类)化疗后p65功能丧失导致预后不良。CTX治疗后开/关Dox淋巴瘤小鼠的Kaplan-Meier生存分析(n个=每组10）。第0天等于接受CTX治疗的那一天。(C类)在注射CTX后3周，处死接受或未接受Dox治疗的淋巴瘤荷瘤小鼠，并对其进行GFP成像。虽然非Dox小鼠（p65表达）的淋巴瘤退化到检测不到的水平，但非Dox鼠（p65敲除）的淋巴瘤持续存在。(D类)p65功能的抑制导致耐药淋巴母细胞肿瘤。注射CTX后开/关Dox病动物脾脏和肝脏的苏木精和伊红染色。使用Dox（p65敲低）的小鼠表现出更具攻击性的淋巴母细胞疾病。(E类)对注射CTX后开/关Dox病动物的脾脏进行解剖和称重。值表示每组至少四只独立动物的平均值+SEM；(*)P（P）<0.05使用学生的t吨-测试。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

中的注释

类似文章

查看所有类似文章

引用人

  • 衰老的胶质细胞与线粒体功能障碍和脂质积聚有关。
    Byrns CN、Perlegos AE、Miller KN、Jin Z、Carranza FR、Manchandra P、Beveridge CH、Randolph CE、Chaluvadi VS、Zhang SL、Srinivasan AR、Bennett FC、Sehgal A、Adams PD、Chopra G、Bonini NM。 Byrns CN等人。 自然。2024年6月；630(8016):475-483. doi:10.1038/s41586-024-07516-8。Epub 2024年6月5日。 自然。2024 PMID：38839958 免费PMC文章。
  • 凋亡信号调节激酶1促进衰老和衰老过程中的炎症反应。
    Odawara T、Yamauchi S、Ichijo H。 Odawara T等人。 公共生物。2024年6月5日；7(1):691. doi:10.1038/s42003-024-06386-0。 公共生物。2024 PMID：38839869 免费PMC文章。
  • 细胞衰老在炎症和再生中的作用。
    Saito Y、Yamamoto S、Chikenji TS。 Saito Y等人。 燃烧再生。2024年6月3日；44(1):28. doi:10.1186/s41232-024-00342-5。 燃烧再生。2024 PMID：38831382 免费PMC文章。 审查。
  • LARP7过度表达可缓解主动脉衰老和动脉粥样硬化。
    杨鹏、吴斯、李毅、娄毅、熊杰、王毅、耿Z、张斌。 Yang P等人。 《细胞分子医学杂志》，2024年6月；28（11）：e18388。doi:10.1111/jcmm.18388。 《细胞分子医学杂志》，2024年。 PMID：38818612 免费PMC文章。
  • NDR激酶家族：衰老的重要调节因子。
    Jonischkies K、Del Angel M、Demiray YE、Loaiza Zambrano A、Stork O。 Jonischkies K等人。 前摩尔神经科学。2024年5月13日；17:1371086. doi:10.3389/fnmol.2024.1371086。eCollection 2024年。 前摩尔神经科学。2024 PMID：38803357 免费PMC文章。 审查。
查看所有“被引用”文章

参考文献

    1. Acosta JC、O’Loghlen A、Banito A、Guijarro MV、Augert A、Raguz S、Fumagalli M、Da Costa M、Brown C、Popov N等，2008年。通过CXCR2受体的趋化因子信号传导增强衰老。手机133:1006–1018-公共医学
    1. Basseres DS，Baldwin AS 2006。核因子-κB和κB激酶抑制剂途径在肿瘤发生和发展中的作用。癌基因25:6817–6830-公共医学
    1. Batsi C、Markopoulou S、Vartholomatos G、Georgiou I、Kanavaros P、Gorgoulis VG、Marcu KB、Kolettas E，2009年。慢性NF-κB激活通过抑制DNA损伤检查点反应延迟RasV12诱导的人成纤维细胞过早衰老。机械老化发展130:409–419-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Beausejour CM、Krtolica A、Galimi F、Narita M、Lowe SW、Yaswen P、Campisi J 2003。逆转人类细胞衰老：p53和p16通路的作用。EMBO J 22:4212–4222-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Campisi J 2005年。衰老细胞、肿瘤抑制和器官老化：好公民，坏邻居。手机120:513–522-公共医学

出版物类型