摘要
产生一种可溶性的人类FAD合成酶（亚型2；hFADS2），并将其作为重组His-tagged蛋白纯化至同质性。该酶与1摩尔FAD产物紧密结合，尽管是非共价的。从“分离”蛋白质中完全释放FAD需要大量变性。用温和的共沸物处理可以制备一种75:25的载脂蛋白/全蛋白混合物，从而可以估计结合FAD对蛋白质稳定性的贡献，并评估FAD释放是否需要结构重排。在周转条件下，该酶催化ATP和FMN的FAD组装，并以更低的速率催化FAD的焦磷酸水解。详细研究了这两种反应的几个机理特征，以及它们对环境条件的依赖性（pH、温度、对金属的依赖性）。我们的数据表明，FAD的释放可能代表整个催化循环的速率限制步骤，导致FAD合成和向客户提供载脂蛋白的过程可能受到严格控制。
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