Prospective isolation of a bipotential clonogenic liver progenitor cell in adult mice

doi:10.1101/gad.2029411

.2011年6月1日；25(11):1193-203.

doi:10.1101/gad.2029411。

在成年小鼠中前瞻性分离一种双潜能克隆原性肝祖细胞

克雷格·多雷尔¹, 劳拉·埃尔克, 乔纳森·舒格, 珍妮尔·科普, 帕梅拉·卡纳迪, 艾伦·J·福克斯, 斯米尔诺娃, 安德鲁·邓肯, 米尔顿·J·费内戈尔德, 麦克·桑德, 克劳斯·凯斯特纳, 马库斯·格朗普

附属公司

PMID： 21632826
PMCID公司：项目经理1110957
内政部： 2029411年10月10日

在成年小鼠中前瞻性分离一种双潜能克隆原性肝祖细胞

克雷格·多雷尔等。基因开发. 2011.

.2011年6月1日；25(11):1193-203.

doi:10.1101/gad.2029411。

作者

附属

¹俄勒冈干细胞中心，俄勒冈健康与科学大学，波特兰，美国。

PMID： 21632826
PMCID公司：项目经理1110957
内政部： 2029411年10月10日

摘要

成人肝干/祖细胞的分子鉴定由于缺乏真正的特异性标记物而受到阻碍。为了分离假定的成人肝祖细胞，我们使用细胞表面标记抗体，包括MIC1-C3，从正常成年小鼠或卵圆细胞应答小鼠中分离肝细胞亚群，并在体外测试其形成胆道集落的能力。在正常或卵圆细胞损伤的肝脏中，强健的克隆形成活性仅限于抗原定义为CD45（-）/CD11b（-）/CD31（-）/MIC1-1C3（+）/CD133（+）/CD26（-）的胆管细胞亚群，频率分别为34或25之一。基因表达分析表明，Sox9仅在正常肝细胞的这一亚群中表达，相对于损伤肝中的其他细胞组分，其含量高。使用Sox9creER（T2）-R26R（YFP）小鼠的体内谱系追踪显示，在祖细胞驱动的肝脏再生过程中增殖的细胞是表达Sox9的前体的后代。对来自正常和DDC（3,5-二乙氧羰基-1,4-二氢吡啶或1,4-二氢-2,4,6-三甲基-3,5-吡啶二甲酸二乙酯）处理的肝脏的祖细胞富集和祖细胞贫化细胞中的基因表达进行了基于阵列的全面比较，揭示了肝祖细胞的新的潜在调节因子。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
基于FACS的小鼠肝NPC亚群分离。与正常细胞分离的细胞(A类)或DDC受伤(B类)肝脏经酶分散、抗体标记并通过FACS分类。连续门控显示了细胞大小事件（FSC vs.SSC）、非造血/内皮事件（CD45/CD11b/CD31 vs.FSC）和导管细胞（MIC1-C3 vs.FSC）的顺序选择。分别使用碘化丙啶标记和尺寸排除法排除死细胞和碎片。MIC1-C3型⁺根据CD26和CD133的表达将细胞分为三个亚组分（R1–R3）；通过FSC/SSC上的后向散射显示R1–R3中细胞的大小/粒度特征。

**图2。**
小鼠肝细胞集落显示肝细胞和导管细胞类型的标记。(*A–D*)FACS-分类CD45产生的四个代表性单个菌落⁻/11亿⁻/31⁻/MIC1-C3型⁺/26⁻显示单元格；指出了每个群体的基因表达测量*在下面*表达数据表示为相对于GAPDH和β-actin管家基因平均值的qRT-PCR测量线性化ΔCt值。白蛋白和HNF4a是肝细胞分化的标志物，而CK19和CFTR是导管相关的。相位对比图像显示为100×。(*E–H（E–H）*)其他菌落生长在培养箱载玻片上，并用血统标记抗体标记。用Cy3荧光显示抗体标记，用Hoechst 33342标记细胞核。放大200倍。

**图3。**
小鼠肝细胞亚群分析揭示了具有祖细胞基因表达的导管亚群。从FACS分离的肝细胞和NPC人群中获得的qRT-PCR结果计算为相对于GAPDH和β-actin平均值的ΔCt值；指出了每个细胞亚群中的相对表达。检测到的给定基因的总信号在被比较人群中所占的比例显示在*Y（Y）*轴。(A类,C类)正常肝细胞和NPC中导管、肝细胞和祖细胞相关基因的表达水平(A类)或DDC受伤(C类)比较肝脏。(B类,D类)MIC1-C3三个亚群中导管、肝细胞和祖细胞相关基因的表达水平⁺正常NPC(B类)或DDC受伤(D类)比较肝脏。*Sox9指数*和*福克斯J1*表达仅限于MIC1-C3⁺/CD133型⁺/CD26型⁻导管亚群。使用了从三个单独的细胞分离实验中获得的材料的两次重复qRT-PCR分析数据。

**图4。**
小鼠鼻咽癌亚群微阵列评估基因表达的层次聚类。使用726个不同表达的探针对全球基因表达谱进行分析，这些探针在任何细胞类型对之间的倍数变化至少为3。（UT）未处理；（DDC）卵圆细胞诱导。

**图5。**
DDC诱导的导管反应产生的细胞是*Sox9指数*-表达前体。YFP表达式在中可视化*Sox9creER公司^T2段; R26R型^YFP公司*小鼠注射三苯氧胺后9周。(A类,B类)在此期间接受正常饮食的对照小鼠的肝脏切片。(C类,D类)收获前最后2周，DDC处理的小鼠肝脏切片诱导卵圆细胞激活。（PT）入口三联体。YFP的流式细胞术检测⁺肝细胞(电子)和导管细胞(*G公司*)从三苯氧胺治疗的肝脏灌注中恢复*Sox9creER公司^T2段; R26R型^YFP公司*显示鼠标。(F类)隔夜培养后对分选的肝细胞进行相位对比和荧光成像，以确认其身份和YFP荧光。(*H（H）*)YFP公司⁺群体是由这些动物的克隆祖细胞发起的，这表明*Sox9指数*表达或表面标记具有相同的特性。放大倍数：A类,C类, 100×;F类,*H（H）*,我, 400×;B类,D类, 500×.

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1. 克莱顿E，《福布斯》SJ 2009。肝Sca-1祖细胞的分离和体外扩增。生物化学与生物物理研究通讯381:549–553-公共医学
1. Dennis G Jr、Sherman BT、Hosack DA、Yang J、Gao W、Lane HC、Lempiki RA，2003年。DAVID：用于注释、可视化和集成发现的数据库。基因组生物学4:3 doi:10.1186/gb-2003-4-5-p3-公共医学
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