Purification and direct transformation of epithelial progenitor cells from primary human prostate

doi:10.1038/nprot.2011.317

.2011年5月；6(5):656-67.

doi:10.1038/nprot.2111.317。 Epub 2011年4月21日。

人前列腺上皮祖细胞的纯化及直接转化

安德鲁·戈尔茨坦¹, 贾斯汀·德雷克, 黛娜·L·伯恩斯, 大卫·S·芬利, Hong Zhang（张红）, 罗伯特·雷特, 黄娇缇, 欧文·N·威特

附属公司

PMID： 21527922
预防性维修识别码：项目经理3092477
内政部： 10.1038/nprot.2011年11月17日

人前列腺上皮祖细胞的纯化及直接转化

安德鲁·戈尔茨坦等。 Nat协议. 2011年5月.

.2011年5月；6(5):656-67.

doi:10.1038/nprot.2111.317。 Epub 2011年4月21日。

作者

安德鲁·戈尔茨坦¹, 贾斯汀·德雷克, 黛娜·L·伯恩斯, 大卫·S·芬利, Hong Zhang（张红）, 罗伯特·雷特, 黄娇缇, 欧文·N·威特

附属

¹美国加利福尼亚州洛杉矶加利福尼亚大学分子生物学研究所。

PMID： 21527922
预防性维修识别码：项目经理3092477
内政部： 10.1038/nprot.2011年11月17日

摘要

上皮细胞转化已在实体肿瘤生物学研究的许多动物模型中得到证实。然而，几乎没有证据表明人类上皮细胞转化之前没有通过遗传影响（如SV40 T抗原）永生，因此限制了我们对可以转化幼稚人类上皮的事件的了解。在这里，我们描述了我们实验室开发的一种系统，该系统可以直接转化新分离的初级人类前列腺上皮细胞，而无需经过培养或永生化。前列腺组织取自患者，良性组织与恶性组织分离。良性和恶性组织一夜之间通过机械和酶分解成单个细胞，并根据表面抗原的差异表达分离免疫细胞和上皮亚群。用表达癌基因的慢病毒转导上皮祖细胞，并与诱导基质结合用于体内研究。移植到免疫缺陷小鼠体内后8-16周，可以评估病变的发展，组织学分类为良性前列腺、前列腺上皮内瘤变和腺癌。

PubMed免责声明

数字

**图1。单细胞组织制备**
（a）病理学核心实验室对组织进行标记。（b）用剪刀手动去除组织的标记边缘（插图显示修剪的边缘），（c）并称量剩余的未标记组织。（d）将组织转移到组织培养皿中，将其切成小块。（e）经过通宵消化后，样品中含有红细胞（左），这些红细胞可以被溶解以留下剩余的细胞（右）。（f）单个游离细胞可以通过血细胞仪进行计数。

**图2。净化基底细胞、管腔细胞和免疫细胞亚群的门控策略**
FACS图显示了用于根据前向散射（FSC）和侧向散射（SSC）隔离总单元的选通策略，以及使用SSC宽度与面积来排除双重波。如前所述，总细胞可以通过CD49f和Trop2的表达进行分析。更复杂的分类策略包括分离免疫细胞（CD45⁺)和上皮细胞（Trop2⁺). CD45+组分由CD8+淋巴细胞和CD8-免疫细胞组成，而Trop2+上皮可细分为基底层（Trop2⁺CD49f型^你好CD24型^洛/+)和管腔（Trop2⁺CD49f型^洛CD24型⁺)分数。

**图3。第三代慢病毒和包装载体示意图**
慢病毒载体（顶部）表达您感兴趣的基因以及荧光色标记物，如GFP或RFP，用于滴度和表达体内包装载体（pVSVg、pMDL、pRev）对于慢病毒产品的正确组装是必要的。请看提布赖西娅，等。（2006），以获取有关该系统以及如何高效生产高滴度慢病毒的更多详细信息。

**图4。体内良性前列腺和转化前列腺的再生**
（a）未经基因操作的基底细胞产生具有前列腺特异性抗原（PSA）表达的表型良性腺体，表明向管腔谱系分化。比例尺，100μm。（b）操纵基底细胞表达选定的癌基因可能会产生恶性病变，其特征是PSA染色增加和基底细胞丢失。比例尺，100μm。（c）良性组织转录因子p63和AR染色的高倍图像显示存在不同层的p63+AR低基底细胞和p63-AR+管腔细胞。比例尺，25μm。

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参考文献

1. Lawson DA等人。基底上皮干细胞是前列腺癌发生的有效靶点。美国国家科学院院刊107:2610–5。-项目管理咨询公司-公共医学
1. Goldstein AS，Huang J，Guo C，Garraway IP，Witte ON。前列腺癌起源细胞的鉴定。科学。2010;329:568–71.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Mulholland DJ等。Lin-Sca-1+CD49f高干/祖细胞是Pten-null前列腺癌模型中的致瘤细胞。2009年癌症研究；69:8555–62.-项目管理咨询公司-公共医学
1. Barker N等人，将隐窝干细胞作为肠癌的原发细胞。自然。2009;457:608–11。-公共医学
1. Vries RG、Huch M、Clevers H.干细胞与胃癌和肠癌。Mol Oncol公司。2010;4:373–84.-项目管理咨询公司-公共医学

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[1] Lawson DA等人。基底上皮干细胞是前列腺癌发生的有效靶点。美国国家科学院院刊107:2610–5。-项目管理咨询公司-公共医学

[2] Lawson DA等人。基底上皮干细胞是前列腺癌发生的有效靶点。美国国家科学院院刊107:2610–5。-项目管理咨询公司-公共医学

[3] Goldstein AS，Huang J，Guo C，Garraway IP，Witte ON。前列腺癌起源细胞的鉴定。科学。2010;329:568–71.-项目管理咨询公司-公共医学

[4] Goldstein AS，Huang J，Guo C，Garraway IP，Witte ON。前列腺癌起源细胞的鉴定。科学。2010;329:568–71.-项目管理咨询公司-公共医学

[5] Mulholland DJ等。Lin-Sca-1+CD49f高干/祖细胞是Pten-null前列腺癌模型中的致瘤细胞。2009年癌症研究；69:8555–62.-项目管理咨询公司-公共医学

[6] Mulholland DJ等。Lin-Sca-1+CD49f高干/祖细胞是Pten-null前列腺癌模型中的致瘤细胞。2009年癌症研究；69:8555–62.-项目管理咨询公司-公共医学

[7] Barker N等人，将隐窝干细胞作为肠癌的原发细胞。自然。2009;457:608–11。-公共医学

[8] Barker N等人，将隐窝干细胞作为肠癌的原发细胞。自然。2009;457:608–11。-公共医学

[9] Vries RG、Huch M、Clevers H.干细胞与胃癌和肠癌。Mol Oncol公司。2010;4:373–84.-项目管理咨询公司-公共医学

[10] Vries RG、Huch M、Clevers H.干细胞与胃癌和肠癌。Mol Oncol公司。2010;4:373–84.-项目管理咨询公司-公共医学

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