跳到主页面内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2011年7月；31(7):1625-33.
doi:10.1161/ATVBAHA.11227827。 Epub 2011年4月28日。

血管内皮中β-catenin和T细胞特异性转录因子信号转导的血流动力学激活调节纤维连接蛋白的表达

布拉德利·D·盖尔芬德 1, 朱莉娅·梅勒, 安德鲁·普赖尔, 迈克尔·卡恩, 帕梅拉·德·肖佩·博茨, 布莱恩·瓦姆霍夫, 布雷特·布莱克曼
附属公司

血管内皮中β-catenin和T细胞特异性转录因子信号转导的血流动力学激活调节纤维连接蛋白的表达

布拉德利·D·盖尔芬德等。 动脉硬化血栓血管生物. 2011年7月.

摘要

目标：本研究的目的是评估β-catenin/T-cell-specific transcription factor（TCF）信号在动脉粥样硬化发展中的活性及其对血管内皮纤维连接蛋白的调节。

方法和结果：组织学染色证实β-catenin在病变发生之前和期间优先定位于动脉粥样硬化主动脉内皮。转基因报告基因研究表明，内皮细胞中TCF转录活性水平的增加在解剖学上与β-连环蛋白核定位和纤连蛋白沉积相关。内皮细胞暴露于人源性动脉粥样硬化剪切应力诱导β-连环蛋白的核定位、TCF的转录激活和纤连蛋白的表达。纤维连接蛋白表达的激活需要β-catenin、TCF和转录辅激活因子CRBP-binding蛋白。最后，我们确定血小板内皮细胞粘附分子-1是构成性β-连环蛋白和糖原合成酶激酶-3β活性的关键调节因子。

结论：这些数据揭示了动脉粥样硬化中内皮细胞β-catenin/TCF信号通路的新组成性激活，以及通过血流动力学剪切应力调节纤维连接蛋白。

PubMed免责声明

利益冲突声明

披露：作者没有利益冲突披露。

数字

图1
图1
βcat的内皮亚细胞定位取决于主动脉区域的动脉粥样硬化易感性。(A类)En脸C57BL/6小鼠主动脉不同区域内皮βcat染色。图像采集自主动脉弓和降主动脉的大曲率和小曲率。大曲率、小曲率和降主动脉的图像分别代表3只、6只和6只小鼠。(B类)En脸βcat在8～13wk ApoE的动脉粥样硬化保护（下降）和动脉粥样硬化（小曲率）区域的染色-/-主动脉。箭头表示βcat被排除在降主动脉内皮细胞核之外。(C类)喂食8～13wk ApoE的饮食中弯曲度较大（i～iii）和较小（iv～vi）的早期动脉粥样硬化病变内皮细胞中的βcat核定位-/-主动脉。为了检测核蓄积，对主动脉横截面进行荧光染色，并成像βcat（红色）、细胞核（蓝色）和组织自体荧光（绿色）（i，iv）。细胞核（ii，v）和βcat（iii，vi）的单通道图像显示了独特的染色模式。箭头表示单个内皮细胞核。（*）表示新生动脉粥样硬化病变。(D类)22周西方饮食喂养ApoE中内皮细胞核βcat的定量分析-/-将三只不同小鼠（×，□，Δ）的单个内皮细胞核分离为无病变（健康）组和病变抑制（病变）组，然后评估其相对核βcat表达。水平虚线表示给定组中所有原子核的几何平均值。误差条代表±SD*第页<10-5个.
图2
图2
动脉粥样硬化倾向主动脉中TCF/LEF的优先激活。(A类)En脸TCF/LEF报告基因TOPGAL转基因小鼠的分析。混合背景CD1:B6杂合转基因报告小鼠在主动脉弓的动脉粥样硬化保护大曲度和动脉粥样硬化保护小曲度内评估lacZ的相对表达。主动脉环荧光染色以检测lacZ的表达，并量化染色强度。（n=3*第页<0.05). (B类)动脉粥样硬化早期主动脉中的TCF/LEF激活。在喂食12-20周TOPGAL的日粮的早期动脉粥样硬化病变中评估LacZ的表达+/-/阿波（ApoE）-/-小鼠采用免疫组织化学石蜡包埋切片。（i） 早期动脉粥样硬化病变的代表性主动脉横截面。lacZ表达的更高放大率图像（ii，iii）。（iv）无一级抗体染色对照。（v） TOPGAL空，ApoE-/-作为非特异性对照，对同窝鼠进行lacZ表达染色。(C类)早期动脉粥样硬化中纤连蛋白表达与TCF/LEF活性相关。与下列内容相邻的部分(B类)纤维连接蛋白表达染色。纤维连接蛋白表达的高倍图像（ii，iii）。（iv）同种型染色对照。
图3
图3
剪切应力差异调节内皮细胞中βcat核定位和TCF/LEF转录激活。(A类)之前测量的颈总动脉（受保护）和颈内动脉窦（俯卧）的人源剪切应力剖面示意图。通过方法一节中描述的锥板细胞培养设备，将内皮细胞暴露于这些血液动力学剪切应力曲线中指定的时间。(B类)通过Western blot评估HUVEC核裂解物暴露于受保护和易受剪切应力24小时后的相对βcat水平。使用TBP（TATA-Binding Protein，TATA-结合蛋白）确保负载均衡*第页<0.05，n=3(C类)用转染TOP-Flash的BAEC评估不同剪切应力下TCF/LEF转录活性。暴露于受保护或易受剪切应力下16小时后测量荧光素酶活性*第页<0.05，n=4-6。
图4
图4
易受剪切应力影响的内皮细胞中纤维连接蛋白基因的表达依赖于TCF/LEF转录。(A类)用空腺病毒（Ad-empty）或含显性阴性N末端缺失TCF-4（Ad-DN-TCF4）的腺病毒治疗的HUVEC暴露于动脉粥样硬化保护或动脉粥样硬化剪切应力24小时。采用RT-PCR检测纤维连接蛋白mRNA水平。表达归一化为β-2-微球蛋白*第页<0.05时，†p<0.01，n=4-6。(B类)在Ad-Empty或Ad-DN-TCF4存在的情况下，将HUVEC暴露于受保护或易受剪切应力下24小时，通过Western blot分析纤维连接蛋白蛋白的表达*第页<0.05†p<0.01，n=3-4。(C类)βcat在内皮细胞中直接与人纤维连接蛋白启动子结合。在用抗βcat抗体或兔IgG（模拟）对照品下拉后，对近端人纤维连接蛋白启动子进行PCR扩增。上游控制是指近端纤维连接蛋白启动子上游2kb区域的PCR扩增*p<0.05，n=6。(D类)β-cat染色定位于野生型MEC的细胞-细胞边界（左），但在敲除细胞中不存在（中）。用Xβ-cat-Eng重组并用抗工程抗体染色的敲除细胞显示定位于细胞-细胞边界（箭头所示），显示粘附连接处的适当结合。(E类)MEC暴露于24小时的动脉粥样硬化血液动力学和纤维连接蛋白水平*第页<0.05 n=3。(F类)在施加剪切应力期间，HUVEC用DMSO或5μM化合物ICG-001或IQ-1处理，以分别抑制β-cat/CBP和β-cat-p300相互作用。通过聚合酶链式反应和蛋白质印迹评估纤连蛋白mRNA和蛋白质水平*第页<0.05，n=3-7。(G公司)HUVEC用Ad-Empty或Ad-DN-TCF4与NF-κB报告子联合预处理，并暴露于动脉粥样硬化剪切应力24小时。剪切应力暴露后，评估裂解物的荧光素酶活性。†p<0.01，n=4。
图5
图5
PECAM-1在动脉粥样硬化之前和期间对核βcat定位和GSK-3活性的调节。(A类)En脸喂ApoE的日粮中动脉粥样硬化区βcat和PECAM-1的荧光染色-/-和PECAM-1-/-阿波（ApoE）-/-动脉粥样硬化斑块形成前的主动脉（8周）。(B类)喂食PECAM-1的8-13周周周周日粮小曲率的横截面-/-阿波（ApoE）-/-主动脉。对组织进行免疫染色，并对βcat（红色）、细胞核（蓝色）和组织自体荧光（绿色）（i）进行成像。细胞核（ii）和βcat（iii）的单通道图像显示细胞核/βcat共定位减少（与图1B相比）。箭头表示单个内皮细胞。(C类)用打乱的siRNA（siCtl）或靶向PECAM-1的siRNA处理的HUVEC暴露于24小时的倾向性剪切应力下，并通过Western blot评估pS-GSK-3β的相对水平**第页<0.001，n=4-6。(D类)西方饮食喂养22周ApoE-/-（i-iii）和PECAM-1-/-阿波（ApoE）-/-对主动脉（v-vii）进行pS-GSK-3β染色。（i，v）IgG对照（左）和抗pS-GSK-3β-（右）染色主动脉横截面的低倍图像。评估病变（ii，vi）和非病变硬化（即健康）（iii，vii）内皮的表达。ApoE损伤和健康内皮细胞pS-GSK-3β表达像素强度直方图-/-（iv）和PECAM-1-/-阿波（ApoE）-/-（viii）显示ApoE动脉粥样硬化斑块中pS-GSK-3β水平增加-/-，但不在PECAM-1中-/-阿波（ApoE）-/-斑块（ApoE中病变加重的内皮细胞中pS-GSK-3β强度向右移位-/-PECAM-1中不存在-/-阿波（ApoE）-/-).
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Barker N.典型wnt/β-catenin信号通路。方法分子生物学。2008;468:5–15.-公共医学
    1. Cheng SL，Shao JS，Halstead LR，Distelhorst K，Sierra O，Towler DA。血管平滑肌甲状旁腺激素受体的激活抑制wnt/β-catenin信号传导和糖尿病动脉硬化中的主动脉纤维化。Circ Res.2010；107:271–282.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Shao JS、Cheng SL、Pingsterhaus JM、Charlton-Kachigian N、Loewy AP、Towler DA。Msx2通过激活旁分泌wnt信号促进心血管钙化。临床投资杂志。2005;115:1210–1220.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Al-Aly Z，Shao JS，Lai CF，Huang E，Cai J，Behrmann A，Cheng SL，Towler DA。糖尿病ldlr-/-小鼠主动脉msx2-wnt钙化级联由tnf-α依赖信号调节。动脉硬化血栓血管生物学。2007;27:2589–2596.-公共医学
    1. Bedel A、Negre-Salvayre A、Heeneman S、Grazide MH、Thiers JC、Salvayre R、Maupas-Schwalm F.E-cadherin/beta-catenin/t-cell因子途径参与氧化低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞增殖。Circ Res.2008；103:694–701.-公共医学

出版物类型

MeSH术语