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.2011年5月;300(5):H1616-30。
doi:10.1152/ajpheart.00728.2010。 Epub 2011年2月25日。

仓鼠提睾肌供血动脉和小动脉中赖氨酸受体(而非IP3受体)的异质性功能

附属公司

仓鼠提睾肌供血动脉和小动脉中赖氨酸受体(而非IP3受体)的异质性功能

埃里卡·韦斯科特等。 美国生理学杂志心循环生理学. 2011年5月.

摘要

赖氨酸苷受体(RyRs)和肌醇1,4,5-三磷酸受体(IP-Rs)在血管平滑肌微循环中的作用尚不清楚。因此,使用共焦成像和压力肌电图技术评估了RyRs和IP-Rs在仓鼠提睾肌供血动脉和下游动脉中Ca(²+)信号和肌源性张力中的功能。饲料动脉血管平滑肌显示Ca(²+)火花和Ca(_2+)波,RyR拮抗剂ryanodine(10μM)或丁卡因(100μM)对其有抑制作用。尽管火花和波浪受到抑制,但瑞安定或丁卡因增加了整体细胞内Ca(²+)并收缩了动脉。用xestospongin D(5μM)或2-氨基乙氧基二苯硼酸盐(100μM)阻断IP³Rs或用U-73122(10μM)抑制磷脂酶C也能减弱Ca(2+)波,而不影响Ca(²+)火花。重要的是,IPõRs和磷脂酶C拮抗剂降低了整体细胞内Ca(2+)并扩张了动脉。相反,克雷马斯特小动脉仅显示Ca(²+)波:未观察到Ca(_2+)火花,瑞安定(10-50μM)和丁卡因(100μM)均未影响Ca(_2+)信号或小动脉张力,尽管存在RyR激动剂咖啡因(10 mM)反应评估的功能性RyR。在供血动脉中,细动脉Ca(²+)波被xestospongin D(5μM)、2-氨基乙氧基二苯硼酸盐(100μM)和U-73122(10μM)减弱,伴随着整体细胞内Ca(2+)降低和血管舒张。这些发现突出了RyRs和IP-Rs在供血动脉Ca(²+)信号和肌源性张力中所起的对比作用,并证明了供血动脉和下游动脉之间RyR功能的重要差异。

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数字

图1。
图1。
钙的代表性图像2+火葬长的火花和波浪为动脉和小动脉供血。一个:含氟仓鼠供血动脉(HFAs)和仓鼠提睾小动脉(HCAs)的共焦图像,如图所示:基底钙2+水平(顶部)和峰值Ca2+水平(底部)对于供血动脉火花(箭头所示位置)、供血动脉波和主动脉波(左边正确的). 火花出现在平滑肌细胞的一个小而有限的区域,而波则出现在细胞的更大区域。有关更多详细信息,请参阅文本。B类:使用描述振幅(F/F)的SparkAn生成的代表记录道o个)与Ca的时间2+火花和钙2+波浪。与钙相比,钙火花(虚线)的振幅和持续时间较小2+波浪(实线)。C类:钙2+在两条供血动脉中观察到的波(左边)和小动脉(正确的)是异步的:F/F的代表轨迹o个在一个16.7s的记录周期内,同一血管内的10个细胞(顶部)10个无峰迹线的平均值>1.2 F/Fo个由供血动脉或颈动脉记录(底部). 通过对6条供血动脉的122个细胞和5条小动脉的98个细胞的分析,也得到了类似的结果。
图2。
图2。
存储耗尽抑制Ca2+波浪,但增加全球Ca2+以及供血动脉和小动脉的肌张力。数据是Ca发生(Occ)的平均值±95%置信区间2+波浪(一个D类). 所有其他数据均为Ca的振幅(Amp)和频率(Freq)的平均值±SE2+波浪(一个D类); 全球fluo-4强度,全球细胞内钙的指数2+(B类E类); 和直径(C类F类)在没有[生理盐溶液(PSS)]或存在肌(内质网)钙的情况下2+-如图所示,ATP酶抑制剂thapsigargin(100 nM)。相对单位*P(P)与PSS中的值相比<0.05,n个= 3. 中的虚线C类F类以0 Ca表示血管的最大直径2+PSS系统。
图3。
图3。
供血动脉和小动脉显示出相似的压力-直径关系。数据为平均值±SE(n个=3)供料动脉(一个)和小动脉(B类)20、40、80和120 cmH时的直径2钙中的O2+-含有PSS(○)和Ca2+-无PSS(●)。
图4。
图4。
血管内压力变化对发病率的影响(顶部),振幅(中间的)、和频率(底部)钙的2+火花(左边)和Ca2+波浪(正确的)如图所示,用于供血动脉和小动脉。压力为20、40、80和120 cmH时2O、 钙的发生率、振幅或频率没有差异2+供血动脉和小动脉之间的波(正确的);P(P)> 0.05. *P(P)<0.05,与血管内压为20 cmH时的等效值显著不同2O;n个=3条供血动脉或小动脉。
图5。
图5。
Ryanodine受体对钙的贡献2+火花,Ca2+克雷马斯特供血动脉中的波和肌源性张力。A–D:存在和不存在ryanodine(10μM)的血管数据。E–H(E–H):存在和不存在丁卡因(100μM)的血管数据。数据是Ca发生的平均值±95%置信区间2+火花和波浪(一个,B类,E类、和F类)或Ca的平均值±SE2+波幅(F/Fo个); 频率(Hz);全球fluo-4信号,全球细胞内钙的指数2+(C类G公司); 和直径(D类H(H))在80 cmH的含氟克雷马斯供料动脉中2在没有(PSS)和有ryanodine(10μM,n个=6)或丁卡因(100μM,n个=3)如图所示*P(P)<0.05,与PSS中的值显著不同。动脉的最大直径用虚线表示D类H(H).
图6。
图6。
阻断大电导Ca2+-激活的K+(黑色)通道抑制赖氨酸诱导的供血动脉收缩。数据为无BK(PSS)或有BK时的平均直径±SE通道阻滞剂paxiline(100 nM,n个= 4;一个B类)或四乙基铵(TEA,1 mM,n个= 6;C类); 兰尼定受体拮抗剂兰尼定(10μM;A–F); 电压门控钙2+通道激动剂Bay K 8644(5 nM,n个= 6;F类); 或帕西林+赖氨酸定的组合(一个B类),TEA+赖氨酸定(C类D类)或Bay K 8644+ryanodine(F类)如图所示*P(P)<0.05,与PSS显著不同。ψP(P)<0.05,与PSS有显著差异,但与相邻组无显著差异(P(P)> 0.05). **P(P)<0.05,与PSS及邻近组有显著差异。
图7。
图7。
BK封锁通道增加Ca2+波浪,全球Ca2+以及供血动脉和小动脉的肌源性张力。数据是Ca的平均值±95%置信区间2+波浪产状(一个D类)或Ca的平均值±SE2+波幅(F/Fo个)或频率(单位:Hz;一个D类); 全氟-4信号,一种全细胞内钙的指数2+(B类E类); 或直径(C类F类)在BK缺席或在场的情况下如图所示,通道阻断剂TEA(1 mM)*P(P)<0.05,与PSS中的等效值有显著差异;n个=3,对于供料动脉,以及n个=6(对于小动脉)。
图8。
图8。
Ryanodine受体对钙无贡献2+提睾小动脉的信号或肌源性张力。在80 cmH的含氟套管小动脉中2O、 钙2+波浪,但不包括Ca2+定期观察火花。数据是Ca的平均值±95%置信区间2+波浪产状(一个D类)或Ca的平均值±SE2+波幅(F/Fo个),加利福尼亚州2+波频率(Hz)(一个D类); 全球fluo-4强度,全球细胞内钙的指数2+(B类E类); 和直径(C类F类)在没有(PSS)或存在ryanodine受体拮抗剂ryanodie(50μM,n个= 6;A–C)或丁卡因(100μM,n个= 3;D–F型)如图所示。在存在ryanodine受体拮抗剂的情况下,未观察到PSS与值之间的显著差异(P(P)> 0.05).
图9。
图9。
克remaster小动脉中ryanodine(Ryd)受体的功能证据。一个:340 nm/380 nm照明(右轴,点迹)下直径(左轴,固体轨迹)和fura-2发射强度比的典型记录,以响应加压至80 cmH的小动脉中10 mM咖啡因(重黑线)2O.所示数据标准化为基线值,以便与B类10 mM咖啡因的应用引起了双相反应:呋喃-2比率的短暂增加和直径的减小叠加在呋喃2比率缓慢但持久的下降和扩张上。在另外6个小动脉中也获得了类似的结果。B–D:数据为平均值±SE。B类:加压至20 cmH的小动脉的直径(标准化为咖啡因前值、左轴、上迹线)和呋喃-2比率(标准化为咖啡因前基线、右轴、下迹线)2O.粗实线表示接触咖啡因的时间(10 mM),如图所示;n个= 7.C类D类:咖啡因(10 mM)和收缩的小动脉,这种收缩在瑞安定的存在下被阻断(C类,10微米,n个= 8; D类,50微米,n个=7)如图所示*P(P)<0.05,与PSS显著不同。
图10。
图10。
瑞安定对BK阻断引起的收缩无影响托马斯特小动脉内的通道。数据为无BK(PSS)或有BK时的平均直径±SE通道阻滞剂paxiline(100 nM,n个= 4;一个B类)或TEA(1 mM,n个= 6;C类D类)兰尼定受体拮抗剂兰尼定(10μM,A–D)或帕西林+赖氨酸定的组合(一个B类)或TEA+赖氨酸定(C类D类)如图所示*P(P)<0.05,与PSS显著不同。ψP(P)<0.05,与PSS有显著差异,但与相邻组无显著差异(P(P)> 0.05).
图11。
图11。
肌醇1,4,5-三磷酸(IP)受体和磷脂酶C对钙的贡献2+波浪和肌源性张力,但不包括Ca2+船员补给动脉中的火花。数据是Ca发生的平均值±95%置信区间2+火花(一个,E类、和)或Ca2+波浪(B类,F类、和J型). 所有其他数据均为振幅(F/F)的平均值±SEo个)和Ca的频率(Hz)2+火花(一个,E类、和)和钙2+波浪(B类,F类、和J型); 全球fluo-4强度,全球细胞内钙的指数2+(C类,G公司、和K); 和直径(D类,H(H)、和L(左))在没有(PSS)或IP在场的情况下受体拮抗剂xestospongin D(5μM,n个=5;A–D)或2-氨基乙氧基二苯硼酸盐(2-APB,100μM,n个= 6;E–H(E–H)); 或磷脂酶C拮抗剂U-73122(10μM,n个= 6;I–L型). *P(P)<0.05,与PSS值有显著差异;n个= 6. 中的虚线D类,H(H)、和L(左)以0 Ca表示血管的最大直径2+PSS系统。
图12。
图12。
知识产权受体和磷脂酶C对钙的贡献2+克remaster小动脉的波和肌源性张力。数据是Ca发生的平均值±95%置信区间2+波浪(一个,D类、和G公司). 所有其他数据均为振幅(F/F)的平均值±SEo个)和Ca的频率(Hz)2+波浪(一个,D类、和G公司); 全球氟-4强度,一种全球细胞内钙的指数2+(B类,E类、和H(H)); 和直径(C类,F类、和)在没有(PSS)或IP在场的情况下受体拮抗剂xestospongin D(5μM,n个=5;A–C)或2-APB(100μM,n个= 6;D–F型); 或磷脂酶C拮抗剂U-73122(10μM,n个= 4–8;G–I型). *P(P)<0.05,与PSS中的值显著不同。中的虚线C类,F类、和以0 Ca表示血管的最大直径2+PSS系统。

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