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.2011年4月8日；286(14):12340-8.
doi:10.1074/jbc。M110.194498。 Epub 2011年1月14日。

Delta-like 1是间充质干细胞移植下调肝纤维化的新靶点和促因

若朗潘 1, 王平（Ping Wang）, 李新祥, 邵建中
附属公司

Delta-like 1是间充质干细胞移植下调肝纤维化的新靶点和促因

若朗潘等。 生物化学杂志. .

摘要

慢性肝损伤总是发展为纤维化，最终发展为肝硬化，这是全世界巨大的医疗负担。Delta-like 1（Dlk1）是众所周知的脂肪细胞分化抑制剂。然而，它是否参与肝纤维化尚不清楚。在这里，我们提供了第一个证据，证明在慢性肝损伤期间，Dlk1通过促进肝星状细胞（HSC）的激活而对肝纤维化起关键作用。我们发现，在肝损伤后，Dlk1被显著诱导，最初在肝细胞中表达，然后通过旁分泌方式进入HSC。它导致HSC的激活，这被认为是肝纤维化发生的关键事件。通过Western blot分析检测到两种形式的Dlk1蛋白（～50和～25 kDa）。体外给予Dlk1显著促进HSC活化，而体内敲除Dlkl显著抑制HSC活化和随后的纤维化。Dlk1的大可溶性形式（～50 kDa）被证明有助于HSC活化。我们发现，通过骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）移植可以抑制Dlk1促进的HSC激活和肝纤维化。此外，我们证明，在损伤刺激下，FGF2在BM-MSC中上调，它可能参与BM-MSC对Dlk1的抑制。我们的研究结果提供了Dlk1在肝纤维化中的新作用，从而更好地理解了纤维化和肝硬化的分子基础，也为MSC生物学在肝脏修复中的细胞和分子机制提供了见解。

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数字

图1。
图1。
Dlk1很容易被诱导，在慢性肝损伤期间保持升高。 A、，CCl中Dlk1表达的Western blot分析4-不同时间点受伤的肝脏。分析了与β-肌动蛋白相关的密度定量(n个= 5).B、，损伤肝脏中的Dlk1 mRNA（CCl4受伤4周）由检测就地杂交。组织切片用苏木精复染。比例尺，50μm。C、，Dlk1的共同定位(红色)和α-SMA(绿色)双重免疫荧光染色法检测HSC。用DAPI对细胞核进行复染(蓝色).比例尺，20微米。D、，从损伤的肝脏中分离出HSC和肝细胞，并用RT-PCR检测Dlk1的表达。
图2。
图2。
大形式的Dlk1，而不是小形式的，促进了HSC激活在体外. A、，用正常培养的HEK293培养基诱导新分离HSC基因表达的RT-PCR分析(控制)，Dlk1的小形式(S公司)，还有那个大的(L（左）)持续7天。PPAR中，过氧化物酶体增殖物激活受体。B类用实时PCR（*，第页< 0.05与控制，n个= 5).C、，HSC中α-SMA的脂滴观察和免疫荧光染色7天和14天(D类)治疗。用DAPI染色观察细胞核(蓝色).箭头指示脂滴。比例尺，100微米。D、，用LSM 5图像检测仪分析α-SMA免疫荧光染色的细胞荧光强度（**，第页< 0.01与控制，n个= 10).
图3。
图3。
Dlk1参与HSC活化和肝纤维化体内. A、，CCl中的Dlk1 mRNA水平4-使用PBS和合成siRNA给药的受伤小鼠和受伤动物（**，第页< 0.01与CCl4损伤组的数值，n个= 5).B类和C类实时PCR检测siRNA和Dlk1-L给药后损伤肝脏中α-SMA和col I（α1）的表达。使用正常培养的HEK293培养基作为对照（*，第页< 0.05; **,第页< 0.01,与CCl中的值4-受伤人群，n个= 5).D、，天狼星红染色用于上述各组的纤维化。通过使用计算机软件测量肝纤维化的相对面积来半定量肝纤维化的程度。结果显示在右侧直方图(*,第页< 0.05; **,第页< 0.01,与CCl中的值4-受伤人群，n个= 5).比例尺，50微米。
图4。
图4。
骨髓基质干细胞移植减弱CCl4-诱导HSC活化和肝纤维化。 A、，天狼星红染色用于纤维化。A、 面板i，正常组；第二组，CCl公司4-损伤组；第三小组PBS组；第四组，BM-MSC移植组。比例尺，50微米。B、，肝纤维化评分。通过使用计算机软件（*，第页< 0.05与CCl中的值4-受伤人群，n个= 6).C、，α-SMA的免疫荧光染色(绿色)在实验肝脏中。C、 面板i，正常组；第二组，CCl公司4-损伤组；小组iii，PBS组；第四组，BM-MSC移植组。细胞核用DAPI复染(蓝色).箭头表示α-SMA阳性细胞。比例尺，20微米。D、，α-SMA和与β-肌动蛋白相关的col I（α，第页< 0.05与CCl中的值4-受伤人群，n个= 5).
图5。
图5。
移植的BM-MSC通过调节Dlk1表达抑制HSC激活。 A、，实时PCR检测实验肝脏中的Dlk1 mRNA水平（*，第页< 0.01与CCl中的值4-受伤人群，n个= 5).B、 就地实验性肝组织中Dlk1 mRNA的杂交分析。B、 面板i，正常组；第二组，CCl公司4-损伤组；第三小组PBS组；第四组BM-MSC移植组。组织切片用苏木精复染。箭头表明Dlk1阳性肝细胞。比例尺，50微米。C、，Dlk1的共同定位(红色)和α-SMA(绿色)双重免疫荧光染色法检测HSC。用DAPI对细胞核进行复染(蓝色).箭头表明细胞与Dlk1和α-SMA共定位。比例尺，20微米。D、，通过实时PCR（*，第页< 0.05; **,第页< 0.01,n个= 5).
图6。
图6。
BM-MSCs可能通过分泌FGF2抑制肝细胞中Dlk1的表达。 A、，实时PCR检测肝损伤肝细胞中Dlk1 mRNA的表达。肝实质细胞，正常培养肝细胞；肝细胞(有限公司)，肝细胞与BM-MSC共培养72小时（**，第页< 0.01与肝细胞中的值，n个= 5).B、，用实时PCR（**，第页< 0.01与BM-MSC中的正常水平，n个= 5).C、，ELISA分析共培养后BM-MSC分泌FGF2（*，第页< 0.05与正常培养的BM-MSC值，n个= 5).D、，实时PCR检测损伤肝细胞中Dlk1 mRNA的表达。控制，正常培养肝细胞；媒体(有限公司)和媒体(dep（深度）)，用具有（培养基（dep））或不具有（培养基（co））FGF2耗竭的BM-MSC培养基培养72小时的肝细胞。（*，第页< 0.05; **,第页< 0.01,n个= 5).
图7。
图7。
重组FGF2可抑制Dlk1表达、HSC激活和肝纤维化。 A、，实时PCR分析肝细胞中Dlk1的表达。将受伤肝脏的肝细胞暴露于20 ng/ml FGF2在体外72小时（*，第页< 0.05与正常培养损伤肝细胞的值，n个= 5).B、，给予FGF2（50μg/kg体重）后受损肝脏中的Dlk1 mRNA水平体内(**,第页< 0.01与CCl中的值4-受伤人群，n个= 5).C、，通过实时PCR（**，第页< 0.01与CCl中的值4受伤人群，n个= 5).D、，天狼星红染色显示实验肝脏的纤维化程度。通过使用计算机软件测量肝纤维化的相对面积来半定量肝纤维化的程度。结果显示在右直方图中（**，第页< 0.01与CCl中的值4-受伤人群，n个= 5).比例尺，50微米。
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