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.1990年9月14日;93(2):189-98.
doi:10.1016/0378-1119(90)90224-f。

用于秀丽隐杆线虫基因表达研究的lacZ融合载体模块集

附属公司

用于秀丽隐杆线虫基因表达研究的lacZ融合载体模块集

一场大火等。 基因. .

摘要

我们描述了一系列包含模块化特征的质粒载体,这些特征对于研究真核生物系统中的基因表达特别有用。载体包含大肠杆菌β-半乳糖苷酶(beta-Gal)编码区(lacZ基因),其5'端和3'端两侧有独特的多连接子片段,以及多种模块的几种组合:一个可选标记(琥珀抑制子tRNA)、一个翻译起始区、一个合成内含子片段、,SV40和两个线虫基因的3'区的早期多聚腺苷化信号。SV40 T抗原中编码核定位肽的片段被整合到许多结构中,导致β-Gal在细胞核中积聚,这有助于识别复杂组织中的生成细胞。为了使功能性β-Gal融合到分泌蛋白,我们构建了带有编码lacZ上游合成跨膜结构域的替代模块的质粒。该结构域旨在阻止分泌蛋白质在分泌过程中跨膜转移,使融合多肽的β-Gal结构域留在细胞质中,从而在酶分析中发挥作用。我们使用载体分析了线虫秀丽隐杆线虫中几个基因的表达,并在这些研究中证明了lacZ可以在多种不同的组织和细胞类型中表达。这些载体在秀丽隐杆线虫和其他实验系统的基因表达研究中应该是有用的。

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