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.2011年3月；85（5）：2235-46。
doi:10.1128/JVI.02036-10。 Epub 2010年12月15日。

表达树突状细胞靶向HIV gag蛋白的新城疫病毒诱导小鼠产生强大的gag特异性免疫反应

贾德·玛玛莉 1, Frida阵列, 秦山高, 阿道夫·加西亚·萨斯特雷, 拉尔夫·斯坦曼, 帕雷斯, 戈德温·恩钦达
附属公司

表达树突状细胞靶向HIV gag蛋白的新城疫病毒诱导小鼠产生强大的gag特异性免疫反应

贾德·玛玛莉等。 J维罗尔. 2011年3月.

摘要

病毒疫苗载体已成为开发人类免疫缺陷病毒（HIV）疫苗的一种有吸引力的策略。重组新城疫病毒（rNDV）作为一种疫苗载体脱颖而出，因为它在人类中具有公认的安全性，是α-干扰素（IFN-α）和干扰素-β）生产的有效诱导剂，也是树突状细胞（DC）成熟的有效诱导物。我们的团队先前已经生成了一种表达密码优化HIV Gag蛋白的rNDV载体，并证明其能够在小鼠中诱导Gag特异性CD8（+）T细胞反应。在本报告中，我们证明了通过将rNDV编码的HIV Gag抗原靶向DC可以进一步增强Gag特异性免疫反应。通过添加对DC限制性抗原摄取受体DEC205特异的单链Fv（scFv）抗体，实现HIV Gag抗原的靶向性，从而将DEC205 scFv-Gag分子编码为融合蛋白进行表达。与使用编码非靶向Gag抗原的rNDV接种相比，使用编码DC靶向Gag抗原的r NDV接种小鼠可诱导增强Gag特异性CD8（+）T细胞反应，并增加脾脏中CD4（+）T细胞和CD8（+T细胞的数量。重要的是，接种DEC205靶向疫苗的小鼠能更好地保护其免受表达HIV Gag蛋白的重组痘苗病毒的攻击。在这里，我们证明了通过DEC205受体将HIV Gag抗原靶向DC增强了rNDV载体诱导强效抗原特异性免疫反应的能力。

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数字

图1。
图1。
病毒疫苗构建物的特征。（A） 表达DC靶向或非靶向HIV Gag蛋白的不同重组NDV的示意图。在NDV的P和M基因之间插入一个包含scDEC-Gagp41、scCont-Gagp41或GFP的转录单位。（B） 鸡胚中NDV的生长动力学。（C） 感染rNDV-L-scDECGaggp41、rNDV-scCont-Gagp41或rNDV-L-GFP病毒（MOI of 1）12、24或36 h的Vero细胞的细胞裂解物和上清液经过SDS-PAGE后转移到硝化纤维素膜上。使用抗Gag p24抗体、抗NDV兔血清或抗肌动蛋白作为负荷对照，对膜进行免疫印迹。（D） 与小鼠DEC205受体结合。在MOI为5时，用重组NDV-L-scDEC-Gagp41或NDV-L-scCont-Gagp41感染36小时的Vero细胞上清液与CHOmDEC205或CHOneo对照细胞结合。NDV-L-scDEC-Gagp41感染细胞的上清液在PBS中未稀释或稀释1/2、1/10、1/20或1/50。scFV-Gagp41融合蛋白通过OLLA特异性FITC-标记抗体检测。
图2。
图2。
接种后血清抗体滴度。（A和B）CxB6 F中抗NDV血清总抗体滴度1小鼠（每组6只）在第一次免疫后30天或初次免疫后（A）和增强后30天（B）进行测定。（C） 增强30天后测定抗-Gag IgG抗体。
图3。
图3。
疫苗诱导的HIV Gag特异性免疫反应。（A） 在初次注射后1周和增强后1周，对大量脾细胞进行T细胞免疫评估。用非活性肽（p17池1）或HIV Gagp41肽混合物重新刺激脾细胞6小时，并通过CD3中的细胞内细胞因子染色评估IFN-γ、TNF-α和IL-2的产生+CD4细胞+T细胞和CD3+CD8（CD8）+T细胞。箭头表示CD8+T细胞。CD3的（B和C）细胞因子谱+CD4细胞+T细胞（B）和CD3+CD8（CD8）+接种疫苗的小鼠在初次接种后1周和增强后1周的T细胞（C）反应。G、 IFN-γ表达细胞；T、 TNF-α表达细胞；五十、 IL-2表达细胞。（D） Gag-特异性CD8的累积+激发后1周和增强后1周脾脏（左侧）和肺部（右侧）的T细胞。接种疫苗的CxB6 F脾脏和肺部的HIV Gag特异性T细胞反应1用总CD8的HIV-Gag四聚体染色检查小鼠+CD3（CD3）+细胞。数据代表了3个不同的实验；每个实验中收集2只小鼠的数据。
图3。
图3。
疫苗诱导的HIV Gag特异性免疫反应。（A） 在初次注射后1周和增强后1周，对大量脾细胞进行T细胞免疫评估。用未反应肽（p17池1）或HIV Gagp41肽混合物重新刺激脾细胞6 h，通过CD3细胞内细胞因子染色评估IFN-γ、TNF-α和IL-2的生成+CD4细胞+T细胞和CD3+CD8（CD8）+T细胞。箭头表示CD8+T细胞。CD3的（B和C）细胞因子谱+CD4细胞+T细胞（B）和CD3+CD8（CD8）+接种疫苗的小鼠在初次接种后1周和增强后1周的T细胞（C）反应。G、 IFN-γ表达细胞；T、 TNF-α表达细胞；五十、 IL-2表达细胞。（D） Gag-特异性CD8的累积+脾脏（左）和肺部（右）中的T细胞在激发后1周和增强后1周。接种CxB6 F后脾脏和肺部的HIV Gag特异性T细胞反应1用总CD8的HIV-Gag四聚体染色检查小鼠+CD3细胞+细胞。数据代表了3个不同的实验；每个实验中收集2只小鼠的数据。
图4。
图4。
用Vac-gag对NDV-L-scFv-Gagp41病毒免疫的小鼠进行挑战。10组女性CxB6 F1小鼠经鼻内接种105NDV-L-scDEC-Gagp41或NDV-L-scCont-Gagp41的FFU。阴性对照小鼠接种NDV-L-GFP。四周后，动物被喂食10粒6同一病毒的FFU。增强后四周，每组5只小鼠用106Vac-Wt或Vac-gag的PFU。（A） 感染痘苗病毒6天后，处死小鼠，用1ml PBS使肺部均匀化，并测定CV-1细胞中的痘苗病毒滴度。（B和C）在Vac-gag（B）和Vac-Wt（C）挑战后连续6天每天监测体重下降。
图5：。
图5：。
DEC205靶向疫苗与对照组的剂量反应效力。（A） 免疫方案。各组雌性BALB/c小鼠用分级剂量的NDV-L-scDEC-Gagp41或NDV-L-scCont-Gagp41免疫。用NDV-L-GFP免疫阴性对照小鼠。对于DEC A组，用5×105FFU，增加106NDV-L-scDEC-Gagp41的FFU；对于Cont A组，给小鼠注射5×105FFU，增加106NDV-L-scCont-Gagp41的FFU。A组（DEC和Cont）的疫苗接种剂量被连续稀释（10倍），并给予B、C和D组。增强后三周，用106Vac-gag病毒或野生型痘苗病毒的PFU。在挑战后5天内监测体重减轻情况。（B） Vac-gag挑战后的体重减轻。（C） Vac Wt挑战后的体重减轻。（D） 疫苗病毒肺部感染后5天的滴度。激发五天后，采集肺部，通过CV-1细胞的斑块试验测定肺部中的痘苗病毒滴度。
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