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.2011年2月3日;117(5):1614-21.
doi:10.1182/bloud-2010-07-298422。 Epub 2010年11月24日。

合理的L-天冬酰胺酶工程揭示了双重活性对癌细胞毒性的重要性

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合理的L-天冬酰胺酶工程揭示了双重活性对癌细胞毒性的重要性

马克·诺夫曼等。 血液. .
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摘要

在治疗环境中使用蛋白质通常需要工程来修改功能和提高疗效。我们以前曾报道过治疗性抗白血病蛋白大分子大肠杆菌L-天冬酰胺酶被白血病溶酶体半胱氨酸蛋白酶降解。在本研究中,我们成功地构建了L-天冬酰胺酶,以抵抗蛋白水解裂解,同时提高活性。我们采用了一种使用遗传算法的突变取样与使用分子动力学的灵活性研究相结合的新方法,以研究盖子脱落和突变对药物活性的影响。应用这些方法,我们成功预测了更活跃的L-天冬酰胺酶突变体N24T和N24A。对于后者,独特的氢键网络有助于提高活性。此外,控制次级谷氨酰胺酶活性的界面突变证明了这种酶活性对药物细胞毒性的重要性。对所有选择的突变体进行了表达、纯化和活性测试,以及它们形成活性四聚体形式的能力。通过将N24A和N24A R195S突变引入药物L-天冬酰胺酶,我们更接近于个性化药物设计。

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