跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2011年2月1日；17(3):514-24.
doi:10.1158/1078-0432.CCR-10-1617。 Epub 2010年11月24日。

c-Src和c-Met在介导头颈癌对c-Src-抑制的耐药性中的独特相互作用

Banibrata Sen公司 1, 彭少华, 巴比塔·赛加尔, 米歇尔·威廉姆斯, 费伊·约翰逊
附属公司

c-Src和c-Met在介导头颈癌对c-Src-抑制的耐药性中的独特相互作用

Banibrata Sen公司等。 临床癌症研究. .

摘要

目的：癌细胞中的c-Src抑制可导致肿瘤细胞的侵袭性消失，但对细胞凋亡的影响是可变的。c-Src下游促进生存的途径没有很好的特征。因为既能减少侵袭又能诱导显著凋亡的癌症治疗是理想的，所以我们试图描述抗c-Src抑制的机制。

实验设计：在一组口腔癌细胞系中，c-Src被抑制，随后的存活率和信号传导被测量。c-Src和c-Met之间的相互作用通过免疫沉淀和体外激酶测定进行评估。测定细胞毒性并计算Chou-Talalay组合指数。使用口腔癌原位模型评估c-Met和c-Src抑制剂的效果。

结果：c-Src的抑制在敏感细胞系中导致c-Met抑制，但在耐药细胞系中没有。分离的c-Met在敏感细胞和耐药细胞中都是c-Src底物，但在完整的耐药细胞中c-Src和c-Met没有相互作用。为了研究这种机制的生物学后果，我们证明了c-Src和c-Met抑制剂的联合具有协同细胞毒性、增强凋亡和减小肿瘤大小。

结论：持续的c-Met活化可以介导对c-Src抑制的抗性。这些数据表明，敏感细胞和耐药细胞中c-Met和c-Src信号的差异分别是由于促进或抑制相互作用的不同因素所致，而不是由于c-Src或c-Met的内在结构变化。c-Src和c-Met抑制的协同细胞毒性作用可能对头颈癌的治疗很重要。

PubMed免责声明

数字

图1
图1。SFK抑制对HNSCC细胞凋亡和细胞周期的影响
细胞用载体对照或100 nM达沙替尼处理24 h，并用TUNEL染色进行分析(A类)或用碘化丙啶染色并用FACS分析(B类). 凋亡细胞或细胞在每个细胞周期阶段的比例以占总数的百分比表示。横杆，SD*P（P）与车辆控制相比，<0.05（B，对S相的影响）。
图1
图1。SFK抑制对HNSCC细胞凋亡和细胞周期的影响
细胞用载体对照或100 nM达沙替尼处理24 h，并用TUNEL染色进行分析(A类)或用碘化丙啶染色并用FACS分析(B类). 凋亡细胞或细胞在每个细胞周期阶段的比例以占总数的百分比表示。横杆，SD*P（P）与车辆控制相比，<0.05（B，对S相的影响）。
图2
图2。SFK抑制或缺失对敏感和耐药HNSCC细胞株c-Met和AKT磷酸化的影响
9个HNSCC细胞系与100 nM达沙替尼孵育(A、 B、C)指定时间(A类)或持续7小时(B、 C、D)并通过Western blotting进行分析。(C类)通过密度测定法分析9株HNSCC细胞系活化Met（pMet Y1234/1235）的蛋白质印迹，并将其归一化为β-肌动蛋白和对照（即载体处理）。（E）用c-Src特异性siRNA或干扰siRNA转染HNSCC细胞，或模拟转染，转染72 h后通过Western blotting分析信号分子。
图2
图2。在一组敏感和耐药的HNSCC细胞系中，SFK抑制或缺失对c-Met和AKT磷酸化的影响
9个HNSCC细胞系与100 nM达沙替尼孵育(A、 B、C)指定时间(A类)或持续7小时(B、 C、D)并通过Western blotting进行分析。(C类)通过密度计分析来自9个HNSCC细胞系的活化Met（pMet Y1234/1235）的蛋白质印迹，并将其标准化为β-肌动蛋白和对照（即载体处理）。（E）用c-Src特异性siRNA或干扰siRNA转染HNSCC细胞，或模拟转染，转染72 h后通过Western blotting分析信号分子。
图2
图2。SFK抑制或缺失对敏感和耐药HNSCC细胞株c-Met和AKT磷酸化的影响
9个HNSCC细胞系与100 nM达沙替尼孵育(A、 B、C)指定时间(A类)或持续7小时(B、 C、D)并通过Western blotting进行分析。(C类)通过密度测定法分析9株HNSCC细胞系活化Met（pMet Y1234/1235）的蛋白质印迹，并将其归一化为β-肌动蛋白和对照（即载体处理）。（E）用c-Src特异性siRNA或干扰siRNA转染HNSCC细胞，或模拟转染，转染72 h后通过Western blotting分析信号分子。
图2
图2。SFK抑制或缺失对敏感和耐药HNSCC细胞株c-Met和AKT磷酸化的影响
9个HNSCC细胞系与100 nM达沙替尼孵育(A、 B、C)指定时间(A类)或持续7小时(B、 C、D)并通过Western blotting进行分析。(C类)通过密度计分析来自9个HNSCC细胞系的活化Met（pMet Y1234/1235）的蛋白质印迹，并将其标准化为β-肌动蛋白和对照（即载体处理）。（E）用c-Src特异性siRNA或干扰siRNA转染HNSCC细胞，或模拟转染，转染72 h后通过Western blotting分析信号分子。
图2
图2。SFK抑制或缺失对敏感和耐药HNSCC细胞株c-Met和AKT磷酸化的影响
9个HNSCC细胞系与100 nM达沙替尼孵育(A、 B、C)指定时间(A类)或持续7小时(B、 C、D)并通过Western blotting进行分析。(C类)通过密度测定法分析9株HNSCC细胞系活化Met（pMet Y1234/1235）的蛋白质印迹，并将其归一化为β-肌动蛋白和对照（即载体处理）。（E）用c-Src特异性siRNA或干扰siRNA转染HNSCC细胞，或模拟转染，转染72 h后通过Western blotting分析信号分子。
图3
图3。c-Met和c-Src作为分离蛋白在完整细胞中的相互作用
(A、 B类)c-Src或c-Met是从2个HNSCC细胞系中免疫沉淀（IP），并与2.5μM PHA665752（P）或100 nM达沙替尼（D）或组合（D/P）孵育，如图所示，激酶活性通过在体外激酶分析。(C类)从与100 nM达沙替尼或载体对照培养7 h的HNSCC细胞中免疫沉淀c-Src和c-Met。免疫复合物通过11%SDS-PAGE溶解，并用c-Src或c-Met抗体印迹。
图3
图3。c-Met和c-Src作为分离蛋白在完整细胞中的相互作用
(A、 B类)c-Src或c-Met是从2个HNSCC细胞系中免疫沉淀（IP），并与2.5μM PHA665752（P）或100 nM达沙替尼（D）或组合（D/P）孵育，如图所示，激酶活性通过在体外激酶分析。(C类)从与100 nM达沙替尼或载体对照培养7 h的HNSCC细胞中免疫沉淀c-Src和c-Met。免疫复合物通过11%SDS-PAGE溶解，并用c-Src或c-Met抗体印迹。
图3
图3。c-Met和c-Src作为分离蛋白在完整细胞中的相互作用
(A、 B类)c-Src或c-Met是从2个HNSCC细胞系中免疫沉淀（IP），并与2.5μM PHA665752（P）或100 nM达沙替尼（D）或组合（D/P）孵育，如图所示，激酶活性通过在体外激酶分析。(C类)从与100 nM达沙替尼或载体对照培养7 h的HNSCC细胞中免疫沉淀c-Src和c-Met。免疫复合物通过11%SDS-PAGE溶解，并用c-Src或c-Met抗体印迹。
图4
图4。抑制HGF和EGFR对c-Met活化的影响
(A类)将HNSCC细胞血清饥饿，然后与50 ng/ml HGF（5分钟）和/或100 nM达沙替尼（7小时）孵育，如图所示，并通过Western blotting分析信号分子。(B类)将HNSCC细胞与1μM埃洛替尼、100 nM达沙替尼、载体对照或这两种药物的组合培养7小时，然后通过Western blotting进行分析。
图4
图4。抑制HGF和EGFR对c-Met活化的影响
(A类)将HNSCC细胞血清饥饿，然后与50 ng/ml HGF（5分钟）和/或100 nM达沙替尼（7小时）孵育，如图所示，并通过Western blotting分析信号分子。(B类)将HNSCC细胞与1μM埃洛替尼、100 nM达沙替尼、载体对照或这两种药物的组合培养7小时，然后通过Western blotting进行分析。
图5
图5。SFK和c-Met联合抑制导致协同细胞毒性和信号传导效应体外和体内
图138(A类)和Osc19(B类)用PHA665752单独处理细胞、达沙替尼单独处理细胞或两种药物按指定剂量以固定比例联合处理细胞72小时。活细胞数量通过MTT分析（外径，光密度）确定，并表示为折叠对照（单独载体）。(C类)用100 nM达沙替尼、2μM PHA665752或联合用药处理Tu138细胞24 h，并用FACS分析进行TUNEL染色分析。(D类)用100 nM达沙替尼和/或2.5μM PHA665752处理HNSCC细胞7小时，并用所示抗体进行免疫印迹分析。（E） 用单独的克唑替尼、单独的达沙替尼或两种药物联合治疗携带原位舌头肿瘤的小鼠（用荧光素酶转染的Osc19细胞），并测量肿瘤大小。P（P）第7天，联合用药的数值分别为0.002（与对照组相比）、0.03（与达沙替尼相比）和0.01（与克雷佐替尼相比）。P（P）联合用药10天时的数值分别为0.007（与对照组相比）、0.02（与达沙替尼相比）和0.05（与克雷佐替尼比较）。(*P（P）≤0.05（相对于车辆控制）。
图5
图5。SFK和c-Met抑制的组合产生协同的细胞毒性和信号传导效应体外和体内
图138(A类)和Osc19(B类)用PHA665752单独处理细胞、达沙替尼单独处理细胞或两种药物按指定剂量以固定比例联合处理细胞72小时。活细胞数量通过MTT分析（外径，光密度）确定，并表示为折叠对照（单独载体）。(C类)用100 nM达沙替尼、2μM PHA665752或联合用药处理Tu138细胞24 h，并用FACS分析进行TUNEL染色分析。(D类)用100 nM达沙替尼和/或2.5μM PHA665752处理HNSCC细胞7小时，并用所示抗体进行免疫印迹分析。（E） 携带原位舌肿瘤（转染荧光素酶的Osc19细胞）的小鼠分别用克里唑替尼、达沙替尼或两种药物联合治疗，并测量肿瘤大小。P（P）第7天，联合用药的数值分别为0.002（与对照组相比）、0.03（与达沙替尼相比）和0.01（与克雷佐替尼相比）。P（P）联合用药10天时的数值分别为0.007（与对照组相比）、0.02（与达沙替尼相比）和0.05（与克雷佐替尼比较）。(*P（P）≤0.05（相对于车辆控制）。
图5
图5。SFK和c-Met联合抑制导致协同细胞毒性和信号传导效应体外和体内
图138(A类)和Osc19(B类)用PHA665752单独处理细胞、达沙替尼单独处理细胞或两种药物按指定剂量以固定比例联合处理细胞72小时。活细胞数量通过MTT分析（外径，光密度）确定，并表示为折叠对照（单独载体）。(C类)用100 nM达沙替尼、2μM PHA665752或联合用药处理Tu138细胞24 h，并用FACS分析进行TUNEL染色分析。(D类)用100 nM达沙替尼和/或2.5μM PHA665752处理HNSCC细胞7小时，并用所示抗体进行免疫印迹分析。（E） 携带原位舌肿瘤（转染荧光素酶的Osc19细胞）的小鼠分别用克里唑替尼、达沙替尼或两种药物联合治疗，并测量肿瘤大小。P（P）第7天，联合用药的数值分别为0.002（与对照组相比）、0.03（与达沙替尼相比）和0.01（与克雷佐替尼相比）。P（P）10天时，联合用药的数值分别为0.007（与对照组相比）、0.02（与达沙替尼相比）和0.05（与克唑替尼相比）。(*P（P）≤0.05（相对于车辆控制）。
图5
图5。SFK和c-Met联合抑制导致协同细胞毒性和信号传导效应体外和体内
图138(A类)和Osc19(B类)用PHA665752单独处理细胞、达沙替尼单独处理细胞或两种药物按指定剂量以固定比例联合处理细胞72小时。活细胞数量通过MTT分析（外径，光密度）确定，并表示为折叠对照（单独载体）。(C类)用100 nM达沙替尼、2μM PHA665752或联合用药处理Tu138细胞24 h，并用FACS分析进行TUNEL染色分析。(D类)用100 nM达沙替尼和/或2.5μM PHA665752处理HNSCC细胞7小时，并用所示抗体进行免疫印迹分析。（E） 携带原位舌肿瘤（转染荧光素酶的Osc19细胞）的小鼠分别用克里唑替尼、达沙替尼或两种药物联合治疗，并测量肿瘤大小。P（P）第7天，联合用药的数值分别为0.002（与对照组相比）、0.03（与达沙替尼相比）和0.01（与克雷佐替尼相比）。P（P）10天时，联合用药的数值分别为0.007（与对照组相比）、0.02（与达沙替尼相比）和0.05（与克唑替尼相比）。(*P（P）≤0.05（相对于车辆控制）。
图5
图5。SFK和c-Met联合抑制导致协同细胞毒性和信号传导效应体外和体内
图138(A类)和Osc19(B类)用PHA665752单独处理细胞、达沙替尼单独处理细胞或两种药物按指定剂量以固定比例联合处理细胞72小时。活细胞数量通过MTT分析（外径，光密度）确定，并表示为折叠对照（单独载体）。(C类)用100 nM达沙替尼、2μM PHA665752或联合用药处理Tu138细胞24 h，并用FACS分析进行TUNEL染色分析。(D类)用100 nM达沙替尼和/或2.5μM PHA665752处理HNSCC细胞7小时，并用所示抗体进行免疫印迹分析。（E） 携带原位舌肿瘤（转染荧光素酶的Osc19细胞）的小鼠分别用克里唑替尼、达沙替尼或两种药物联合治疗，并测量肿瘤大小。P（P）第7天，联合用药的数值分别为0.002（与对照组相比）、0.03（与达沙替尼相比）和0.01（与克雷佐替尼相比）。P（P）联合用药10天时的数值分别为0.007（与对照组相比）、0.02（与达沙替尼相比）和0.05（与克雷佐替尼比较）。(*P（P）≤0.05（相对于车辆控制）。
图6
图6。c-Met耗竭增强c-Src耗竭的细胞毒性
Tu167和Osc19细胞转染c-Src特异性siRNA（KD，敲除）、c-Met特异性siRNA或非特异性（加扰）对照。通过MTT分析估计转染96小时后活细胞的数量，并表示为折叠对照（模拟转染）。横杆，SD*P（P）与车辆控制相比≤0.05。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Jemal A、Siegel R、Ward E、Hao Y、Xu J、Thun MJ。2009年癌症统计。CA癌症临床杂志。2009;59:225–49.-公共医学
    1. Johnson FM，Gallick GE。SRC家族非受体酪氨酸激酶作为癌症治疗的分子靶点。抗癌药物药物化学。2007;7:651–9.-公共医学
    1. Kim LC、Song L、Haura EB。Src激酶作为癌症的治疗靶点。Nat Rev临床肿瘤学。2009;6:587–95.-公共医学
    1. Nam S，Kim D，Cheng JQ，等。Src家族激酶抑制剂达沙替尼（BMS-354825）对人前列腺癌细胞的作用。2005年癌症研究；65:9185–9.-公共医学
    1. Rodier JM、Valles AM、Denoyelle M、Thiery JP、Boyer B.pp60c-src是大鼠膀胱癌细胞系中生长因子诱导细胞散射的正调节因子。细胞生物学杂志。1995;131:761–73.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语