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.2010年12月14日；107(50):21812-7.
doi:10.1073/pnas.1010373107。 Epub 2010年11月22日。

阿尔茨海默病肽β-淀粉样蛋白与纤维蛋白原相互作用并诱导其寡聚

Hyung Jin Ahn先生 1, 达里娅·扎莫洛奇科夫, Marta Cortes食堂, 艾琳·H·诺里斯, J弗雷泽-格利克曼, 西德尼·斯特里克兰
附属公司

阿尔茨海默病肽β-淀粉样蛋白与纤维蛋白原相互作用并诱导其寡聚

Hyung Jin Ahn先生等。 美国国家科学院程序. .

摘要

越来越多的证据支持血管对阿尔茨海默病（AD）的作用，但AD与循环系统之间的直接联系尚未建立。先前的研究表明，在存在β-淀粉样肽（Aβ）的情况下形成的血凝块具有异常结构，并且在体外和体内具有抗降解性，这与AD有关。在本研究中，我们发现Aβ与纤维蛋白原特异性相互作用，K（d）为26.3±6.7nM，结合位点位于纤维蛋白原β链的C末端附近，并且结合导致纤维蛋白原寡聚。这些结果表明，Aβ和纤维蛋白原之间的相互作用改变了纤维蛋白原的结构，从而可能导致异常的纤维蛋白凝块形成。总之，我们的研究表明Aβ和纤维蛋白原之间的相互作用可能是AD血管异常的重要因素。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
Aβ肽和纤维蛋白原在体外相互作用。(A类)生物素化的Aβ42或Aβ40与纤维蛋白原（FBG）孵育，并使用链霉亲和素-Sepharose进行下拉试验。所有样品均经Western blot分析，具有多重实验的代表性。用抗纤维蛋白原抗体在非还原条件下进行Western blot，结果表明Aβ42和Aβ40与纤维蛋白原结合。每个下拉框下方的Aβ斑点杂交显示，生物素化的Aβ被下拉了相当数量。(B类)用ELISA法测定生物素标记的Aβ42与纤维蛋白原的结合曲线。当不添加Aβ42时，无论纤维蛋白原浓度如何，结合纤维蛋白原的水平都可以忽略不计。因此，在微孔中纤维蛋白原和链霉亲和素之间没有非特异性结合。
图2。
图2。
Aβ42与纤维蛋白原片段D结合。生物素化Aβ42与(A类)碎片D（FD）或(B类)使用链霉亲和素-Sepharose进行FragE（FE）和下拉分析。使用抗纤维蛋白原抗体进行蛋白质印迹。针对Aβ的斑点杂交显示，可比较数量的Aβ被拉下。用ELISA法测定生物素标记的Aβ42与FragD或FragE的结合曲线。我们观察到FragD结合的Aβ42依赖性增加(C类)，但Aβ42和FragE之间没有结合(天). 这些结果代表了多项实验。
图3。
图3。
Aβ42与纤维蛋白原或FragD的相互作用是浓度依赖性的。Aβ42与纤维蛋白原的结合动力学(A类)或碎片D(B类)用FP监测。用TAMRA标记的Aβ42孵育纤维蛋白原或片段D浓度增加。反应达到平衡后，测量极化K（K）d日通过将数据拟合到单位点结合方程来计算(n个= 3). 这个K（K）d日Aβ42与纤维蛋白原的结合（两个位点）少于与FragD的结合（一个位点），数据符合单位点结合模型。当数据拟合到双位点结合模型时，这两个位点的离解常数实际上是相同的。纤维蛋白原上两个结合位点之间的距离可能允许它们相互独立地结合Aβ。
图4。
图4。
Aβ42与纤维蛋白原β链C末端附近的纤维蛋白原特异性相互作用。(A类)FDP与生物素化Aβ42孵育，然后与链霉亲和素-Sepharose珠孵育。从珠子中洗脱与Aβ42相互作用的片段，并使用SDS/PAGE进行分析。缺乏生物素化Aβ42的反应混合物用作非特异性结合的对照（“仅FDP”巷）。16kDa以下的主要带是链霉亲和素（Strep）。在7 kDa蛋白大小标记周围鉴定出一个与Aβ42（Frag）相互作用的片段。(B类)使用AlphaLISA测定纤维蛋白原衍生49米肽（β366–β414）对Aβ42–纤维蛋白原相互作用的抑制曲线。49米肽有IC500.99±00.1μM，而纤维蛋白原肽γ377–γ395对Aβ42-纤维蛋白原相互作用没有任何抑制作用(n个= 3).
图5。
图5。
Aβ42结合诱导纤维蛋白原寡聚。纤维蛋白原（FBG；1μM）加上Aβ42（蓝色；5μM）、FBG单独（红色；1μM）或Aβ42单独（绿色；5μM）在37°C下培养2小时。(A类)样品在FPLC上的Superose 6凝胶过滤柱上运行。(B类)用抗FBG或Aβ42抗体对Aβ42-纤维蛋白原混合物的洗脱液进行Western blot分析。(C类和天)TEM图像来自使用尺寸排除色谱纯化的纤维蛋白原低聚物。免疫金标记显示低聚物由Aβ和纤维蛋白原组成(天). 用抗纤维蛋白原抗体（6 nm金；箭头）和抗Aβ抗体（12 nm金；箭）标记β42纤维蛋白原低聚物。这个结果代表了多次实验。
图6。
图6。
Aβ42和纤维蛋白原结合在AD病理中的作用的建议模型。Aβ肽与纤维蛋白原相互作用并改变纤维蛋白凝块的形成。这些改变的血栓具有异常的结构，并抵抗纤溶酶的降解。在AD患者中，持续性纤维蛋白（原）可能导致血管缺陷、血流量减少、认知功能障碍和神经炎症。（比例尺：纤维蛋白原低聚物TEM图像中的50 nm。）
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