跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息,确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https://确保您连接到官方网站,并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2010年10月;84(19):10113-20.
doi:10.1128/JVI.00097-10。 Epub 2010年7月21日。

病毒复制复合体与新城疫病毒的毒力有关

附属公司

病毒复制复合体与新城疫病毒的毒力有关

J C F M宿舍等。 J维罗尔. 2010年10月.

摘要

新城疫病毒([NDV],也称为1型禽副粘病毒)的强毒株可以通过在融合蛋白(F)的蛋白水解切割位点存在多个碱性氨基酸残基来区分低毒力毒株。然而,从鸽子中分离出的一些NDV变异体(鸽副粘病毒1型[PPMV-1])具有较低的毒力,尽管它们的F蛋白裂解位点包含多碱基氨基酸序列,并且与毒株具有相同的功能。为了确定这种差异的分子基础,我们检测了NDV毒力中内部蛋白的作用。利用反向遗传学方法,在非毒株PPMV-1 AV324和强毒株NDV Herts之间交换编码核蛋白(NP)、磷酸蛋白(P)、基质蛋白(M)和大聚合酶蛋白(L)的基因。评估重组病毒在日龄鸡中的致病性和复制水平,并在细胞培养单层中检测病毒基因组复制和斑块大小。我们还在体外复制试验中测试了单个NP、P和L蛋白对病毒复制复合体活性的贡献。结果表明,Herts的复制蛋白活性高于AV324,病毒复制复合体的活性与毒力直接相关。虽然M蛋白影响病毒体外复制,但它对毒力的影响很小。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
用于在FL-Herts之间交换NP、P、M和L基因的克隆策略示意图空军和rgAV324AFS公司通过测定日龄雏鸡脑内致病性指数(ICPI)来测定不同重组病毒的毒力。ICPI最高得分为2.0。KM,卡那霉素抗性基因定位于载体质粒中。
图2。
图2。
1日龄雏鸡脑内接种后不同器官中亲本和NP-P′-L嵌合病毒的病毒滴度。每天宰杀三只鸡,收集大脑、脾脏、肝脏和肺。使用QM5细胞测定病毒滴度,并将其表示为平均病毒滴度(log10TCID公司50/g组织)。虚线表示QM5细胞中病毒检测试验的检测限。“QM5阴性”样本通过接种胚胎卵子,额外检测是否存在病毒。开放符号表示接种的鸡蛋保持病毒阴性,封闭符号表示接种鸡蛋变成病毒阳性。由于三只感染FL-Herts的鸡在感染后3天死亡,因此该组只有四个时间点。误差条显示标准偏差。
图3。
图3。
将FPV-T7感染的QM5细胞与病毒微基因组质粒(包含Gluc报告基因侧翼Herts的先导序列和尾部序列)和表达Herts NP、P和L的质粒(灰色)或AV324(黑色)共转染后的相对荧光素酶表达水平。通过省略L质粒(X)来确定荧光素酶活性的背景水平。该图显示了六个独立实验中获得的平均值。在左边轴,给出了相对于Herts的荧光素酶活性值,在右侧显示了相对于AV324的萤光素酶活性的值。误差条表示平均值标准误差(SEM)。
图4。
图4。
感染前10小时内负义基因组RNA复制的发生和动力学。在MOI为10时感染DF-1细胞,并通过qRRT-PCR检测复制。结果是重复感染的平均值。
图5:。
图5:。
感染后48小时QM5(a)和DF-1(b)细胞中重组病毒的相对斑块大小。使用抗NDV F蛋白的单克隆抗体通过免疫染色观察斑块。平均斑块大小是通过使用Image-Pro Plus软件(Media Cybernetics,Inc.)测量每个病毒至少12个斑块的面积来确定的。在左边轴,给出了与FL-Herts相对的斑块大小,在右侧轴,显示了相对于rgAV324的斑块大小。误差线表示标准偏差。

类似文章

引用人

工具书类

    1. Ahmed,M.、M.O.McKenzie、S.Puckett、M.Hojnacki、L.Poliquin和D.S.Lyles。水疱性口炎病毒基质蛋白抑制β-干扰素基因表达的能力与抑制宿主RNA和蛋白质合成在遗传学上相关。J.维罗尔。77:4646-4657.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Aldous,E.W.、J.K.Mynn、J.Banks和D.J.Alexander。2003年。通过融合蛋白基因部分核苷酸序列的系统发育分析,对禽副粘病毒1型(新城疫病毒)分离物进行分子流行病学研究。鸟类病理学。32:239-256.-公共医学
    1. 亚历山大·D·J和R·E·高夫。2003年,《新城疫、其他禽副粘病毒和肺炎病毒感染》,第63-92页。Y.M.Saif、H.J.Barnes、A.M.Faddly、J.R.Glisson、L.R.McDougald和D.E.Swayne(编辑),《家禽疾病》,第11版,爱荷华州艾姆斯爱荷华州立大学出版社。
    1. Antin、P.B.和C.P.Ordahl。1991年。禽肌源性细胞系的分离和鉴定。开发生物。143:111-121.-公共医学
    1. Bankamp,B.、S.P.Kearney、X.Liu、W.J.Bellini和P.A.Rota。小基因组复制试验中疫苗和野生型麻疹病毒株的聚合酶蛋白活性。J.维罗尔。76:7073-7081.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语